ICS 65.020.20 CCS B16 DB42 湖北省 地方 标准 DB42/T 2106—2023 芋疫病抗性室内离体接种鉴定技术规程 Code of practice for identification of taro to leaf blight in room 2023 - 09 - 27发布 2023 - 11 - 27实施 湖北省市场监督管理局 发布 DB42/T 2106 —2023 I 目次 前言 ................................ ................................ ................ III 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 操作流程 ................................ ................................ ........... 1 5 病原物分离与鉴定 ................................ ................................ ... 1 6 接种体制备 ................................ ................................ ......... 2 7 室内离体接种鉴定方法 ................................ ............................... 2 8 抗性鉴定评价标准 ................................ ................................ ... 3 附录A（资料性） 芋疫病典型病症，病原菌的形态描述和分子鉴定 ........................... 4 附录B（资料性） 芋疫病抗性离体鉴定记载表 ................................ ............. 6 参考文献 ................................ ................................ .............. 7 DB42/T 2106 —2023 III 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 武汉市农业科学院 提出。 本文件由 湖北省农业农村厅 归口。 本文件起草单位： 武汉市农业科学院、华中农业大学。 本文件主要起草人： 王直新、孙亚林、谢甲涛、黄新芳、柯卫东、朱红莲 、刘玉平、 董红霞。 本文件实施应用中的疑问，可咨询 湖北省农业农村厅 ，联系电话：027-87665821 ，邮箱： [email protected] ；对本文件的有关修改意见建议请反馈至 武汉市农业科学院 蔬菜研究所 ，联系电话： 027-88116313 ，邮箱： [email protected] 。 DB42/T 2106 —2023 1 芋疫病抗 性室内离体接种 鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了芋疫病室内离体接种鉴定技术的接种体制备、 室内离体接种鉴定方法、 抗性评价标准、 鉴定记载方法等 基本要求 。 本文件适用于芋 品种及种质资源对芋疫霉菌抗性的室内 离体接种 鉴定及评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 2327 农作物种质资源鉴定评价技术规范 芋 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 芋疫病 taro leaf blight 由芋疫霉菌（ Phytophthora colocasiae Racib.）侵染芋叶片、叶柄或球茎引起的病害。 接种体 inoculum 用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。 4 操作流程 5 病原物分离与鉴定 病原物分离 从发病田间采集具有典型症 状（见附录A.1）的新鲜病叶，采用常规植物病原菌分离方法分离芋疫 病病原物。分离物经寄主范围、培养性状、回接发病症状、形态学特征确认为芋疫霉菌后，再进行分离 纯化和致病性测定，保存备用。 病原物鉴定 对用于抗病性接种鉴定的病原物进行形态学鉴定、致病性鉴定和 DNA分子鉴定，鉴定方法见附录 A.2 和A.3。 病原物分 离与鉴定 接种体 繁殖 调查与病 情分级 室内离体 接种 鉴定评 价 结果记 载 DB42/T 2106 —2023 2 6 接种体制备 接种体繁殖 在接种前进行病原物接种体的繁殖。将芋疫霉菌接种在 V8培养基上（培养皿直径 =90 mm），恒温培 养箱中28 ℃下暗培养 7 d。菌丝长到培养皿边缘时，为保证接种时菌丝活力最强且较为一致，用打孔器 （直径=5 mm）从菌落边缘打取菌丝块，菌丝块即为接种体。 V8培养基的配制 （1 L）：V8（番茄、胡萝卜、芹菜、红甜菜、欧芹、生菜、西洋菜、菠菜）混合蔬 菜汁200 mL、CaCO 3 2 g、蒸馏水 800 mL、琼脂15 g，121 ℃高压蒸汽灭菌 20 min。 接种体保存 准备试管 V8培养基斜面， 将待保存的菌株接种于斜面培养基上， 待菌丝长满斜面后， 置于 4 ℃～8 ℃ 或室温的条件下保存。每 30 d转接保存 1次。 7 室内离体接种鉴定方法 鉴定材料准备 待鉴定芋材料种植于试验地应满足 NY/T 2327 的要求，定植 60 d～120 d后，在接种鉴定当天上午， 从田间取新生的完全展开的第 2片叶，叶片。叶片需健康，无伤口、虫害或病菌感染。叶片编号后带回 室内，经 75%酒精消毒，使用钢制模具从每个叶片相同部位 切下2个直径80 mm的圆片，平铺在塑料盘中 的湿纱布上。以福鼎芋为感病对照材料。鉴定材料按顺序或者随机排列，每份材料重复 3次，每一重复 10个叶盘。 接种方法 将供试菌株在 V8培养基上培养 7 d，用无菌的打孔器（直径 =5 mm）从菌落边缘打取菌丝块，用镊子将 菌丝块接种在叶盘中央位置，避开主叶脉，每个叶盘接种 1个菌丝块。以接种空白 V8培养基块的叶盘为 空白对照。 将叶盘置于塑料盘内的湿纱布上， 用保鲜膜盖住塑料盘保湿， 并每 24 h用喷雾器适量补充灭菌水 （水 中含0.05%的吐温-20）一次。鉴定室保持 28 ℃，相对湿度 80%，黑暗条件培养 24 h，然后调至每日光周期 光照/黑暗时长分别设置为 12 h/12 h。 病情调查 7.3.1 调查时间 接种后96 h调查病情 。 7.3.2 调查方法及病情级别划分 对接种后的叶盘（加上精度为 1 mm的直尺作为标尺）进行拍照，使用图像分析软件测量标尺对应的 像素和病斑的像素，换算为病斑实际大小。 7.3.3 计算方法 调查每份鉴定材料接种病原物后的发病情况，依据 表1病情级别划分标准 ，逐份调查和登记病情级 别，计算出病情指数（ DI）。病情指数按式（ 1）计算：