ICS07.080 CCS B 16 DB 62 甘肃 省地 方标准 DB62/T4758——2023 真菌性玉米顶腐病鉴定技术规程 地方标准信息服务平台 2023-08-23发布 2023-09-25实施 甘肃省市场监督管理局 发布 地方标准信息服务平台 DB62/T4758—2023 目 次 前言 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 原理 5 试剂与材料 仪器及用具 7 取样方法 8 田间症状表现型 9 检验方法 10 结果判定 11 样品保存与处理 附录A（规范性） PSA培养基配方及制作方法 6 附录B（规范性） 玉米顶腐病菌菌体形态特征 地方标准信息服务平台 1 DB62/T4758—2023 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。 本文件由甘肃省粮食油料作物栽培标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：河西学院、甘肃前进生物科技发展有限公司、甘肃省农业信息中心、泉州师范学 院、德农种业股份公司、高台县农业技术推广中心、临泽县农业技术推广中心、张掖国家级玉米种子生 产基地种子质量监督检验中心、张市建国作物种质创新育种工作室、酒泉市通盈种苗有限公司。 本文件主要起草人：雷玉明、马金、赵婧、雷鑫、郑天翔、杨国振、王伟、濮超、吴尧、刘晓刚 张琪、公晓佳、孙志、马丽娟、李自峰、李涛、石建国。 本文件由河西学院负责解释。 地方标准信息服务平台 II DB62/T4758—2023 真菌性玉米顶腐病鉴定技术规程 1范围 本文件规定了真菌性玉米顶腐病检验取样方法、由间症状识别、实验室检验、结果判断及样品保存 与处理的技术要求。 本文件适用于玉米种子繁育田、杂交种真菌性顶腐病的鉴定， 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB1886.239食品安全国家标准食品添加剂琼脂 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 HG/T 3462 化学试剂蔗糖 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 玉米顶腐病 -种由亚粘团镰孢霉引起的玉米叶部、茎部的真菌性病害。 3. 2 亚粘团镰孢霉 学名Fusariummoniliformevar.subglutinansWr.etReink，一种引起玉米顶腐病的致病菌，属无性型 真菌、丝孢纲、丛梗孢目、瘤座孢科、镰孢霉属的一种真菌。 3.3 菌落筛选 需要从分离培养基培养生长出的大量菌落中，根据菌落形状、颜色、大小、菌丝形态等的各种特征， 从中挑选出具有明显表型特征的目标菌落的过程。 3. 4 转接 在无菌条件下，将目标菌落转移到适宜其生长的人工合成培养基而形成单一菌株的过程 4原理 玉米顶腐病是一种土壤、种子传播的真菌性病害，以亚粘团镰孢霉在土壤、病残体、种子中越冬。 以玉米幼苗、叶片、叶鞘、茎秆、果穗的田间症状表现型为初步诊断依据，结合室内种子、土壤、病组 织的病原菌分离培养特性与显微镜的形态特征，综合评价，判定真菌性玉米顶腐病。 1 DB62/T4758—2023 5试剂与材料 5.10.1%升汞（HgCl2） 称取升汞1.0g，用75%酒精5mL溶解，再加蒸馏水995mL稀释，加入1%酸性品红溶液0.1mL，配制 成0.1%红色升汞消毒液。 5.2乳酚油（CH12O3） 20mL均匀，配制成浮载剂。 5.3硫酸链霉素（C2iH42N?O18S1.5） 称取0.1g医用硫酸链霉素粉剂，用70%酒精5mL溶解，无菌水定容至10mL，配制成10mg/mL硫酸链 霉素溶液。 5.4马铃薯 挑选健康无病，淀粉含量>20%的马铃薯块茎，用水冲洗干净后去皮，切成1.0cm～1.5cm方块。 5.5蔗糖（C12H22O11) 选择分析纯蔗糖，符合HG/T3462要求。 5.6琼脂(C12H18Og)n 选择食品添加剂琼脂，符合GB1886.239要求。 5.7试验用水 试验用水符合GB/T6682三级水规定。 地方杨 6仪器及用具 6.1仪器 6.1.1电子天平：准确度等级I，实际分度值0.0001g； 6.1.2高压灭菌锅：容积50L，电源220V/50hz，最高工作/设计温度135℃/138℃，最高工作/设计压力 0.22Mpa/0.25Mpa，灭菌定时4min～120min，干燥定时30min～240min； 6.1.3超净工作台：洁净等级100级，噪声≤58db，平均面风速0.3m/s~0.6m/s，电源220V/50hz，光 照度≥300LX； VX 6.1.5生物显微镜；双目镜10x/20x，≥5孔物镜转换器，物镜4x/10x/40x/100x； 6.1.6低温冰箱：控温范围-10℃C～-40℃，控温精度±1℃； 6.1.7单道移液器：分液范围2mL～10mL、100μL～1000μL。 6.2用具 解剖刀、不锈钢手术剪刀、不锈钢单面刀片、接种玻璃棒、培养皿、烧杯、载玻片、盖玻片、种子 袋，消毒灭菌待用。 2 DB62/T47582023 7取样方法 7.1种子取样 每份样品随机选取100粒种子，放入无菌种子袋，填写完整的取样标签，待检。 7.2植株组织取样 7.2.1叶片、叶鞘取样 在玉米苗期至抽穗期田间调查，采集疑似玉米顶腐病的叶片、叶鞘，放入保鲜塑料袋或乳酚油标本 瓶中，待检。 7.2.2根系取样 玉米1叶6叶期田间调查，挖出疑似玉米顶腐病的植株根系，剪下发病根系放入保鲜塑料袋或乳酚 油标本瓶中，待检。 7.2.3茎杆取样 玉米抽穗期田间调查，采集疑似玉米顶腐病的穗位节或穗位节下茎杆，放入保鲜塑料袋或乳酚油标 本瓶中，待检。 7.3土壤取样 7.3.1定点取样 选择具有玉米顶腐病典型症状或疑似症状的植株，在植株根部周围0.2m²～0.3m²范围内取5cm深的 表土1000g，四分法制样后，取500g土样，待检。 7.3.2随机取样 选择玉米顶腐病普发田，对角线5点取样，每点在2m²范围内取5cm深的表土1000g，将各点土样混 和后，四分法制样，取500g土样，待检。 方标准信 8田间症状表现型 8.1畸形或枯死苗型 玉米出苗期，植株生长缓慢，叶片边缘失绿，出现黄色条斑，叶片皱缩、扭曲，叶缘出现“刀切状” 8.2叶缘缺刻型 玉米抽穗前，植株上部叶片基部或边缘出现缺刻状，顶端1叶～3叶缘呈黄亮色条斑，严重时1～2片 叶沿中脉半边或全叶脱落，仅剩中脉及中脉上残留的少量叶肉组织。 8.3断叶状或枯死型 玉米抽穗前，植株上部叶片尖端具黄褐色斑块，呈撕裂或断叶状，严重时顶端4叶～5叶尖端或全叶 枯死。 3