ICS 07.080 CCS B 16 DB 62 甘肃 省地 方标准 DB62/T4756—2023 玉米抗北方炭疽病鉴定技术规程 地方标准信息服务平台 2023-08-23发布 2023-09-25实施 甘肃省市场监督管理局 发布 地方标准信息服务平台 DB62/T4756—2023 目 次 前言 I I 范围 2 规范性引用文件 3术语和定义 4 田间症状表现型 5 人工接种抗病性鉴定方法· 抗性评价 附录A（规范性） 玉米北方炭疽病症状、玉蜀黍球梗孢菌形态特征 地方标准信息服务平台 DB62/T4756—2023 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。 本文件由甘肃省粮食油料作物栽培标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：河西学院、泉州师范学院、高台县农业技术推广中心、甘肃省会宁县农业技术推 广中心、德农种业股份有限公司、沈阳农业大学、甘肃前进生物科技发展有限公司、金塔县农业技术推 广中心、甘州区农蓄产品质量检测服务中心、甘州区种子产业发展中心、甘肃德光农业有限公司、酒泉 市通盈种苗有限公司、庄浪县乡村振兴事务服务中心、庄浪县农业农村局。 本文件主要起草人：雷玉明、雷鑫、秦国伟、住雯丽、郑天翔、王伟、吴尧、濮超、杨国振、薛看 生、马金、李栋、冒国伟、张琪、陈海龙、陆静、李会文、王廷三、程紫霞、苏朋朋。 本文件由河西学院负责解释。 地方标准信息服务平台 II DB62/T4756—2023 玉米抗北方炭疽病鉴定技术规程 1范围 本文件规定了玉米品种北方炭疽抗病性鉴定技术和抗病性评价标准。 本文件规定了玉米北方炭疽病接种体制备、菌种繁殖与保存、鉴定圃设置、接种、病情调查、抗性 评价等的技术要求及玉米自交系、杂交种等抗性鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 DB62/T4180玉米主要病虫害综合防治技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 玉米北方炭疽病 一种由玉蜀黍球梗孢菌引起玉米的真菌性叶部病害。 3. 2 玉蜀黍球梗孢菌 学名KabatiellazeaeNaritaetHiratsuka，一种引起玉米北方炭疽病的致病菌，属无性型真菌，腔孢 纲、黑盘孢目、黑盘孢科、球梗霉属的一种真菌 3. 3 单孢分离 一种分离孢子的方法。在无菌条件下，通过解剖镜或显微镜观察孢子菌悬液或琼脂平板表面，利用 解剖针或移植器、玻璃毛细管等挑取单一孢子，置于相应培养基上，萌发形成菌丝而获得纯菌种的方法。 3. 4 PDA培养基 称取马铃薯200g，洗净去皮切碎，加水1000mL煮沸20min～30min，纱布过滤，补水至1000mL， 加入葡萄糖18g～20g，琼胶18g～20g，搅拌均匀，120℃～125℃高压灭菌30min。 3.5 KZM培养基 称取羧甲基纤维素10g，麦芽糖5g，蛋白陈1.5g，KH2OPO41g，加入1000mL蒸馏水中，加热溶 解，补水至1000mL，120℃~125C高压灭菌30min。 3.6 PD液体培养基 PDA培养基中不添加琼脂制作的液体培养基。 1 DB62/T4756—2023 3. 7 抗性评价 根据采用的技术标准判别玉米对北方炭疽病的反应程度和抵抗水平的描述。 4田间症状表现型 参照A.1北方炭疽病症状表现型鉴定。 5人工接种抗病性鉴定方法 5.1病菌接种体制备 5.1.1病原物分离 利用组织分离法分离病原菌，将采集到的典型症状病叶，剪取病健交界处（0.2mm~0.3mm）× （0.2mm~0.3mm）小块，经70%酒精溶液消毒15s~20s，0.1%升汞溶液消毒30s，无菌水冲洗3次， 在无菌条件下接种于PDA培养基上，25C±1℃黑暗培养8d～10d，获得分离物。 5.1.2形态鉴定 参照A.2玉蜀泰球梗孢菌形态特征鉴定，确认为玉蜀黍球梗孢菌。 5.1.3分离物纯化 采用单孢分离技术，在PDA培养基获纯培养物。 5.1.4致病性测定 将纯培养物在PDA平板上培养15d，刮取PDA平板上的分生孢子，用无菌水配制成浓度为 1×105个/mL～1×106个/mL的孢子悬浮液，喷雾接种于人工气候室裁培的玉米6叶期的叶片上， 保持室内温度25℃C±2℃C，相对湿度90%～92%，持续时间48h。接种10d后观察发病情况，叶 片症状与A.1规定一致，获得病原物形态与A.2规定一致，确定分离物为致病菌。 标准信 5.2病菌繁殖与保存 5.2.1扩大繁殖 将纯化培养物接种于PDA培养基25C±1℃C黑暗培养8d~10d后，用灭菌内径6mm打孔器切取菌落 制作菌饼，菌饼移至KZM液体培养基中25C±1℃C、150转/分振荡黑暗培养3d，用于制备菌悬液。 5.2.2菌悬液配制 将带菌KZM液体培养基进行过滤，血球计数板测定滤液中分生孢子数量，无菌水调制滤液浓度至 % 5.2.3菌种保存 将纯化培养8d～10d的长满菌体PDA平板培养基，用PD液体培养基洗下菌体，过滤后获得分生孢 子悬浮液，按照体积比1:1比例加入50%甘油，配制成甘油菌悬液，保存于-20C低温冰箱，备用。 5.3抗性鉴定圃设计 DB62/T4756—2023 5.3.1鉴定圃设置 间灌溉和施肥、喷药设施的区域，与玉米种子田、玉米生产大田距离≥1000m。温室鉴定圃设置要求有 效种植面积≥500m²，温室净高≥4.0m，温湿度可控，具备滴灌设施，种植鉴定材料≥5个。 5.3.2小区设置 鉴定材料随机排列或顺序排列，小区行长400cm～500cm，行距60cm，株距20cm，5行区，每行 保苗20～25株，设3次重复，周围设置4行玉米为保护带。 5.3.3对照材料设置 设对照感病品种为黄早四，小区种植规格与5.3.2相同，每5个鉴定材料设对照1个。 5.4抗性测定 5.4.1测定类型 鉴定材料设苗期鉴定和成株期鉴定。 5.4.2接种时间 苗期鉴定在玉米生长至6叶～7叶期接种，成株期鉴定在玉米生长至13～14叶接种。 5.4.3接种方法 依据抗性鉴定设计和玉米生育期特性，接种方法应满足以下要求： a）喷雾接种，适合于苗期鉴定，将菌种用无菌水调制孢子悬浮液，装入小型手持喷雾器，均匀喷 雾接种于植株叶片，接种量控制8mL/株～10mL/株。要求接菌时每个处理之间采用薄膜隔离 保护，孢子悬浮液在植株叶片上不流为宜； b) 灌注接种，适合于成株期鉴定，用一个带刻度的10mL注射器吸取孢子悬浮液，从玉米心叶 与其下的展开叶叶鞘相接处以下灌注心叶，接种量控制5mL/株～6mL/株。要求注射器不带 针头，以心叶处冒出水珠为准。 标准信 5.5田间管理 5.5.1环境控制 鉴定圃施肥、灌溉水平与大田玉米相同；田间鉴定圃接种后进行田间灌水或滴灌，保持田间相对湿 度≥60%，持续时间48h；温室鉴定圃接种后灌水，温度控制在25℃土2℃，相对湿度≥90%，持续时 间28 h。 5.5.2病虫草害控制 鉴定圃玉米整个生育期间不进行病害防治，虫害防治按照DB62/T4180的规定执行，除草时间与次 数与大由玉米相同。 5.6病情调查 5.6.1调查时间 苗期接种、成株期接种分别在7d、14d后进行抗性调查。 3