(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210716231.7 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 中国药科大学 地址 211198 江苏省南京市江宁区龙眠大 道639号 (72)发明人 孙晓莲　赵雅萱　沈晶晶　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 孙斌 (51)Int.Cl. A61K 47/52(2017.01) A61K 47/54(2017.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/34(2017.01) A61K 38/38(2006.01)A61K 38/44(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种基于四氧化三铁的磁靶向蛋白递送纳 米组装体的制备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于四氧化三铁的磁靶 向蛋白递送纳米组装体的制备方法， 具体步骤 为： (1)四氧化三铁纳米颗粒的合成， (2)合成含 苯硼酸基团的小分子配体， (3)苯硼酸修饰的四 氧化三铁材料制备， (4)胞外响应纳米组装体的 制备， (5)胞内响应纳米组装体的制备。 本发明还 公开了该制备方法制备的纳米组装体在蛋白递 送中的应用， 可以实现肿瘤部位胞内或胞外响应 性蛋白递送。 本发明制备的纳米组装体具有磁靶 向性， 可增加摄取， 能够应用于肿瘤细胞内外响 应性递送蛋白质并保持蛋白质活性， 具有良好的 生物相容性。 同时还可用于递送功能蛋白， 具有 肿瘤治疗前景。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 115227828 A 2022.10.25 CN 115227828 A 1.一种基于四氧化三铁的磁靶向蛋白递送纳米组装体的制备方法， 其特征在于， 包括 如下步骤： (1)四氧化三铁纳米颗粒的合成： 将乙酰丙酮铁与油胺、 油 酸混合， 加热并通入惰性气 体， 加入极性溶剂离心， 得到四氧化 三铁纳米颗粒。 (2)合成含苯硼酸基团的响应性小分子： 将含有苯硼酸基团的化合物和频哪醇溶于四 氢呋喃， 加入醋酸溶液， 在室温下搅拌反应， 旋蒸提纯后得化合物1， 将化合物1、 盐酸多巴 胺、 2‑乙氧基‑1‑乙氧碳酰基 ‑1,2‑二氢喹啉(EEDQ)溶于甲醇溶液中， 在惰性气体保护下搅 拌过夜， 旋蒸除去溶剂， 得到化 合物2， 即为含苯硼酸基团的响应性小分子； (3)苯硼酸修饰的四氧化三铁纳米颗粒： 将盐酸多巴胺和步骤(2)制备的化合物2溶于 四氢呋喃中， 升温， 冷凝回流， 加入步骤(1)制备的四氧化三铁纳米颗粒， 离心， 加入去离子 水， 随后加入甲基硼酸， 离心， 得到苯硼酸 修饰的四氧化 三铁纳米颗粒(IONP)； (4)胞外响应纳米组装体的制备： 将步骤(3)制备的苯硼酸修饰的四氧化三铁纳米颗粒 与蛋白质混合， 静置后离心， 获得 胞外响应性纳米组装体； (5)胞内响应纳米组装体的制备： 将蛋白质与天然多酚共孵育， 随后与步骤(3)制备的 苯硼酸修饰的四氧化三铁纳米颗粒混合， 静置， 得到纳米颗粒， 后加入聚乙二醇修饰的聚乙 烯亚胺混合， 静置后离心， 获得 胞内响应的纳米组装体。 2.根据权利要求1所述的纳米组装体的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中制备的 四氧化三铁纳米颗粒 粒径为8～10nm。 3.根据权利要求1所述的纳米组装体的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中含苯硼 酸基团的化 合物为4‑羧基苯硼酸或4 ‑羧基‑3‑氟苯硼酸。 4.根据权利要求1所述的纳米组装体的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中盐酸多 巴胺与化 合物2的摩尔比为1:0.2 ～2， 化合物2与甲基硼酸的摩尔比为1:3～7。 5.根据权利要求1所述的纳米组装体的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(4)中蛋白质 与苯硼酸 修饰的四氧化 三铁纳米颗粒的质量比为1:0.5～ 2； 所述蛋白质为牛 血清白蛋白。 6.根据权利要求1所述的纳米组装体的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(5)中天然多 酚为表没食子儿茶素没食子酸酯， 蛋白质与 表没食子儿茶素没食子酸酯的摩尔比为 1:10～ 100， 蛋白质与苯硼酸修饰的四氧化三铁纳米颗粒的质量比为 1:0.5～2， 所述蛋白质为牛血 清白蛋白或者葡萄糖氧化酶。 7.一种利用权利要求1所述的基于四氧化三铁的磁靶向蛋白递送纳米组装体的制备方 法制备的纳米组装体在胞内或胞外蛋白递送中的应用。 8.根据权利要求7所述的纳米组装体的应用， 其特征在于， 所述纳米组装体在胞内或胞 外蛋白递送中的蛋白质为磁靶向性 递送功能蛋白质。 9.根据权利要求7所述的纳米组装体的应用， 其特征在于， 所述纳米组装体通过在胞外 或胞内响应性释放所负载的蛋白质。 10.一种利用权利要求1所述的基于四氧化三铁的磁靶向蛋白递送纳米组装体的制备 方法制备的纳米组装体在制备肿瘤治疗药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115227828 A 2一种基于四氧化三铁的磁靶向蛋白递 送纳米组装 体的制备方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及纳 米材料制备和生物医药领域， 具体涉及一种基于四氧化三铁的磁靶 向蛋白递送纳米组装体的制备 方法及应用。 背景技术 [0002]蛋白质递送是指将外源蛋白质或多肽等生物分子递送进体内， 从而实现细胞生物 学功能的调控、 疾病的治疗等作用。 相比于基因治疗， 蛋白质疗法能够快速响应， 不会引起 永久性的基因改变和严重的毒副作用； 而与小分子化药相比， 蛋白质具有高特异 性、 低毒性 等优势。 迄今为止， 蛋白质疗法已经在医学领域 发挥了重要作用。 基于蛋白质的作用位点可 以将它们分为两类， 一类是作用于胞外或细胞膜上 的蛋白质疗法， 蛋白质在细胞外即可起 作用， 如糖尿病治疗中用到的胰岛素是一种蛋白质类激素， 与靶细胞膜上 的特异受体结合 从而起到降低血糖的作用； 另一类的作用靶点则位于胞内， 蛋白质在胞质中发挥作用， 进 行 治疗， 如肿瘤治疗中常用的RNase  A是一种核糖核酸 酶， 能够催 化核糖核酸(RNA)的降解， 导 致细胞死亡。 [0003]胞内或胞外作用的蛋白质直接递送进入体内的过程中遇到许多障碍。 对于细胞外 靶点的蛋白质治疗， 其疗效由于易在血清中聚集、 被酶解等因素而受到影响； 而靶点位于胞 质中的蛋白质治疗， 治疗效果则受到蛋白质的许多物理化学性质限制， 如易被酶解、 分子尺 寸大、 细胞膜渗透性差、 易丧失活性等。 为了解决胞内外蛋白递送遇到的问题， 人们设计并 利用各种纳米颗粒(如脂质体、 高分子载体、 无机纳米颗粒载体等)进 行蛋白递送， 以增强其 稳定性或改善膜渗透性， 从而实现蛋白质递送。 其中， 相比于其他众多的递送方式， 无机纳 米颗粒由于尺寸可控、 易于功能化、 生物相容性好等优势在蛋白质及多肽递送领域具有广 阔的应用前景。 目前的大多数工作会对蛋白质进 行共价修饰， 将其偶联在纳米颗粒表面， 从 而实现蛋白递送。 然而化学修饰会严重影响蛋白质的活性， 不利于后续 发挥作用。 且大部分 纳米颗粒在病灶部位的聚集较低， 使治疗效果大打折扣。 与此同时， 循环积聚在正常部位 发 挥作用的纳米制剂会影响正常细胞的功 能， 造成严重的毒副作用。 因此需要开发一种能够 保持蛋白活性的、 具有靶向性以及肿瘤微环境响应性的蛋白质递送载体。 发明内容 [0004]发明目的： 针对现有技术不足， 本发明提供一种基于四氧化三铁的磁靶向蛋白递 送纳米组装体的制备方法， 本发明所制得的纳米组装体具有磁靶向性， 在外部磁场作用下 聚集于肿瘤部位， 可增加摄取， 应用于肿瘤部位胞内或胞外响应释放蛋白， 减少对正常组织 的毒副作用， 并且不需对蛋白进行化学修饰， 能够保持释放蛋白的活性。 [0005]本发明的另一目的是提供一种基于四氧化三铁的磁靶向蛋白递送纳米组装体的 制备方法所制备的纳米组装体在蛋白递送中的应用。 [0006]技术方案： 为了实现上述目的， 本发明所述的一种基于四氧化三铁 的磁靶向蛋白说　明　书 1/8 页 3 CN 115227828 A 3