(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210712533.7 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 浙江大学医学院附属第一医院 地址 310009 浙江省杭州市上城区庆春路 79号 (72)发明人 黄河　孔德麟　荆瑞瑞　杨婷婷　 赵梦雨　张琪琦　杨琳　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 邱启旺 (51)Int.Cl. C12N 5/10(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 一种基于铁死亡抑制剂的免疫细胞及其制 备方法、 应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于铁死亡抑制剂的免 疫细胞及其制备方法、 应用， 本发明提出血清铁 离子能够诱发免疫细胞 发生铁死亡， 并进一步在 免疫细胞制备工艺中证实铁离子对免疫细胞的 毒性作用； 因此， 在免疫细胞产品制备中添加铁 死亡抑制剂， 增加了其对铁离子毒性的抵抗作 用， 并促进了免疫细胞在体内对肿瘤的治疗效 果， 延长了荷瘤小鼠的生存时间。 本发明提出铁 死亡对免疫细胞的胁迫作用， 优化了免疫细胞产 品的制备工艺。 权利要求书1页 说明书5页 附图6页 CN 115261327 A 2022.11.01 CN 115261327 A 1.一种基于铁死亡抑制 剂的免疫细胞的制备方法， 其特征在于， 具体为： 分离培养免疫 细胞， 并在免疫细胞培养过程中添加浓度为0 ‑4μM铁死亡抑制剂， 其中免疫细胞的量为5* 10E5/kg‑4*10E6/kg。 2.根据权利要求1所述的基于铁死亡抑制剂的免疫细胞的制备方法， 其特征在于， 所述 铁死亡抑制剂为包括Ferrostatin ‑1、 UAMC‑3203、 Liproxstatin ‑1在内的对铁死亡有抑制 作用的抑制剂。 3.根据权利要求2所述的基于铁死亡抑制剂的免疫细胞的制备方法， 其特征在于， 铁死 亡抑制剂Ferrostatin ‑1的添加浓度为1 ‑4μM， 铁死亡抑制剂UAMC ‑3203和铁死亡抑制剂 Lip‑1的添加浓度为0 ‑200nM。 4.根据权利要求1所述的基于铁死亡抑制剂的免疫细胞的制备方法， 其特征在于， 所述 免疫细胞具有杀伤功能的免疫细胞； 所述免疫细胞为T细胞、 NK细胞、 巨噬细胞中的一种或 多种按任意比例混合。 5.根据权利要求1所述的基于铁死亡抑制剂的免疫细胞的制备方法， 其特征在于， 所述 T细胞为CAR ‑T细胞或TCR ‑T细胞中的一种或两种按任意比例混合。 6.根据权利要求1所述的基于铁死亡抑制剂的免疫细胞的制备方法， 其特征在于， 在免 疫细胞培养过程中添加浓度为0 ‑4μM铁死亡抑制剂具体为： 在免疫细胞培养0 ‑12天每天都 加入铁死亡抑制剂、 在免疫细胞培养0 ‑12天过程中按 单位时间间断地加入铁死亡抑制剂或 在免疫细胞培 养0‑12天后加入铁死 亡抑制剂。 7.一种基于铁死亡抑制剂的免疫细胞， 其特征在于， 由权利要求1～6任一项所述的制 备方法制得。 8.一种权利要求7所述的免疫细胞或由权利要求1～6任一项所述的制备方法制得的免 疫细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤为血液肿瘤、 神经胶质细胞瘤中 的一种。 10.一种抗肿瘤药物， 其特征在于， 其包含如权利要求7所述的基于铁死亡抑制剂的免 疫细胞或由权利要求1～6任一项所述的制备 方法制得的免疫细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261327 A 2一种基于铁死亡抑制剂的 免疫细胞及其制备方 法、 应用 技术领域 [0001]本发明涉及嵌合抗原受体T(CAR ‑T)细胞的产品制备， 尤其涉及一种基于铁死亡抑 制剂的免疫细胞及其制备 方法、 应用。 背景技术 [0002]嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(chimeric  antigen receptor  T‑cell therapy， CAR‑T)是一种 新型的免疫靶向治疗技术， 通过基因工程修饰T淋巴细胞并嵌入CAR基因， 使 其在体内特异性地识别并攻击恶性肿瘤， 被认为是最具临床应用前景 的细胞免疫疗法。 尽 管疗效显著， 但仍有10％ ‑50％病人在治疗后疾病复发。 这是由于患者体内CAR ‑T细胞的扩 增效率、 杀伤能力以及存活时间存在个体差异造成的。 因此， 提高CAR ‑T细胞持久性及杀伤 功能成为了亟需解决的技 术问题。 [0003]铁死亡最早被定义于2012年， 是铁离子依赖性的调节性死亡， 其本质是细胞膜磷 脂发生脂质过氧化， 造成膜破裂而导致的细胞死亡。 形态上， 铁死亡的细胞表现出典型的坏 死性形态， 并伴随同质异形的小线 粒体： 嵴减少、 膜凝聚、 外膜破裂。 铁死亡的主要诱因这是 细胞内游离 二价铁的过渡积累。 细胞内游离的二价铁离子氧化性极强,容易与H2O2发生芬顿 反应(Fenton  reaction),产生能对DNA、 蛋白质和膜磷脂造成氧化损伤的羟基自由基,从而 促进磷脂的组分—多不饱和脂肪酸发生脂质过 氧化反应， 引起膜破裂导 致细胞死亡。 [0004]因此， 亟需提供一种免疫细胞的制 备方法， 通过铁死亡抑制剂增加免疫细胞持续 性及杀伤 功能。 发明内容 [0005]本发明针对现有技术不足， 提出了一种基于铁死亡抑制剂的免疫细胞及其制备方 法、 应用。 [0006]为实现上述技术目的， 本发明的技术方案为： 本发明实施例的第一方面提供了一 种基于铁死亡抑制剂的免疫细胞的制备方法， 具体为： 分离培养免疫细胞， 并在免疫细胞培 养过程中添加浓度为0 ‑4 μM铁死亡抑制剂， 其中免疫细胞的量 为5*10E5/kg‑4*10E6/kg。 [0007]进一步地， 所述铁死亡抑制剂为包括Ferr ostatin‑1、 UAMC‑3203、 Liproxstat in‑1 在内的对铁死 亡有抑制作用的抑制剂。 [0008]进一步地， 铁死亡抑制剂Ferrostatin ‑1的添加浓度为1 ‑4 μM， 铁死亡抑制剂UAMC ‑ 3203和铁死亡抑制剂L ip‑1的添加浓度为0 ‑200nM。 [0009]进一步地， 所述免疫细胞具有杀伤功能的免疫细胞； 所述免疫细胞为T细胞、 NK细 胞、 巨噬细胞中的一种或多种按任意比例混合。 [0010]进一步地， 所述T细胞为CAR ‑T细胞或TCR ‑T细胞中的一种或两种按任意比例混 合。 。 [0011]进一步地， 在免疫细胞培养过程中添加浓度为0 ‑4 μM铁死亡抑制剂具体为： 在免疫 细胞培养0 ‑12天每天都加入铁死亡抑制剂、 在免疫细胞培养0 ‑12天过程中按 单位时间间断说　明　书 1/5 页 3 CN 115261327 A 3