(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221071019 2.X (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 南京邮电大 学 地址 210046 江苏省南京市栖霞区文苑路9 号 (72)发明人 范亲　李至浩　晁洁　 (74)专利代理 机构 南京正联知识产权代理有限 公司 32243 专利代理师 姜梦翔 (51)Int.Cl. A61K 39/39(2006.01) A61K 9/72(2006.01) A61K 9/12(2006.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/04(2006.01) A61P 37/04(2006.01) (54)发明名称 一种可吸入制剂及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种可吸入制剂及其制备方 法， 属于生物医药领域， 所述可吸入制剂由DNA四 面体载药颗粒作为活性成分溶解于缓冲溶液中 制成液态制剂， 所述DNA四面体载药颗粒由四条 DNA单链经碱基互补配对形成， 每条DNA单链均包 括用于组装四面体结构的组装链， 且至少有一条 DNA单链还包含免疫调节序列； 所述免疫调节序 列选自核酸免疫佐剂或免疫检查点核酸适配体。 所述可吸入制剂可借助气溶胶肺部给药装置直 接用于肺部肿瘤的原位治疗； 本发 明中所用功能 性DNA四面体具有安全性高、 形状精确可控及易 于修饰的优势， 由其制备的四面体气溶胶能够在 肺部显著聚集， 降低对其它组织的毒性， 在肺部 高效地激活免疫细胞， 有效抑制癌细胞的生长 。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图4页 CN 115381937 A 2022.11.25 CN 115381937 A 1.一种可吸入制剂， 其特征在于， 所述可吸入制 剂是由DNA四面体载药颗粒作为唯一活 性成分溶解于缓冲溶液中制成的液态制剂， 所述DNA四面体载药颗粒由四条DNA单链经碱基 互补配对形成， 每条DNA单链均包括用于组装四面体结构的组装链， 且至少有一条DNA单链 包含免疫调节序列， 所述免疫调节序列选自核酸免疫佐剂或免疫检查 点核酸适配体。 2.根据权利要求1所述的一种可吸入制剂， 其特征在于， 所述四条载药的DNA单链中， 每 一条DNA单链包 含30‑150个脱氧核糖核苷酸单体。 3.根据权利要求1所述的一种可吸入制剂， 其特征在于， 所述核酸免疫佐剂为CpG寡脱 氧核苷酸、 聚肌胞苷酸和多聚腺苷酸中的一种或多种。 4.根据权利要求1所述的一种可吸入制 剂， 其特征在于， 所述免疫检查点核酸适配体为 CTLA‑4核酸适配体、 PD ‑1核酸适配体、 PD ‑L1核酸适配体、 LAG ‑3核酸适配体中的一种或多 种。 5.根据权利要求1所述的一种可吸入制剂， 其特征在于， 所述DNA四面体载药颗粒的四 条DNA单链中， 每条DNA单链均包含免疫调节序列， 即DNA四面体载药颗粒共携带有四条免疫 调节序列， 所述免疫调节序列中核酸免疫佐剂与免疫检查点核酸适配体的物质的量配比为 4:0、 2:2、 1:3、 3:1或0:4。 6.根据权利要求1所述的一种可吸入制 剂， 其特征在于， 所述用于组装四面体结构的组 装链分别记为S1、 S2、 S3、 S4， 四条组装链的序列分别如SEQ  ID NO.5、 SEQ  ID NO.6、 SEQ  ID  NO.7和SEQ  ID NO.8所示。 7.根据权利要求1所述的一种可吸入制剂， 其特征在于， 所述四条DNA单链 的序列分别 如SEQ ID NO.1、 SEQ ID NO.2、 SEQ ID NO.3和SEQ  ID NO.4所示。 8.一种可吸入制剂的制备 方法， 包括以下步骤： (1)将上述四条DNA单链溶解于超纯 水； (2)将四条DNA单链按1:1:1:1的摩尔比混匀于缓冲液中； (3)将混匀溶液快速加热至95℃ ‑100℃维持至少10分钟， 快速退火至2 ‑4℃并维持20 ‑ 30分钟， 得 载药四面体溶 液。 9.根据权利要求8所述的一种可吸入制剂的制备方法， 其特征在于， 所述缓冲液为1 × TM Buffer或1×TAE Mg2+buffer。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115381937 A 2一种可吸入制剂及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技 术领域， 具体涉及一种可吸入制剂及其制备 方法。 背景技术 [0002]目前， 肺癌的常见治疗方法包括姑息治疗、 手术、 化学疗法和放射疗法， 但这些疗 法都有一定的局限性。 手术治疗往往受 限于现有的检测手段， 以至于无法准确 根本地切除 恶性肿瘤。 传统化疗和放疗则缺乏靶向性， 易对正常组织和细胞产生毒副作用， 并可诱导肿 瘤细胞产生耐药性， 从而降低治疗效果。 近年来， 通过激发机体免疫功能治疗肿瘤的免疫疗 法受到极大关注。 肺癌免疫疗法主要包括肿瘤 疫苗、 溶瘤病毒、 过继T细胞疗法、 单克隆抗体 疗法等， 在肺癌临床和临床前研究中， 取得了显著的抗肿瘤治疗效果。 然而， 现有肺癌免疫 疗法仍存在很多问题尚待解决， 由于缺乏高效的递送技术， 极易造成全身性毒副作用， 引起 机体过度免疫反应， 对胃肠道、 皮肤和肝脏等造成免疫性炎症和损伤， 给病人带来极大的痛 苦。 [0003]研究发现与全身化疗相比， 吸入治疗将免疫治疗药物局部递送至肿瘤组织， 从而 增强其疗效并降低其全身副作用。 此外， 吸入疗法避免了首过代谢， 并增加了患者对治疗的 顺应性。 肺肿瘤组织的药物浓度比正常肺组织高5到15倍。 但传统吸入疗法不能使 药物靶向 特定的肺肿瘤部位会增加 其在肺中的局部浓度， 从而增加肺毒性的风险。 为了克服这些缺 点， 研究者们开发了可吸入的智能纳米肺部药物输送系统， 纳米载体可以避免粘液纤毛清 除和肺内吞噬细胞吞噬， 从而延 长治疗剂在呼吸道内的停留时间， 特异 性部的癌组织。 纳米 载体能够有效地 转移到气溶胶中， 并具有高度的雾化能力。 [0004]但是现有肺部吸入纳 米药物递送载体， 例如聚合物纳 米载体、 脂质纳 米载体、 脂质 聚合物杂化纳米粒、 主动靶向吸入纳米粒， 现有技术 公开的纳米载体， 一方面载体的尺寸大 小很难精确控制， 造成靶向性差,药物利用率低； 另一方面由于其载药方式的非特异性， 造 成载药量和比例无法精确可控。 若利用现有的游离的单链核酸免疫佐剂序列和免疫检查点 核酸适配体序列直接配置成可吸入制剂， 也 不能达到很好的治疗效果。 发明内容 [0005]本发明要解决的技术问题是提供一种可精准载药的高效纳米载药结构并制成可 吸入制剂， 可形成用于肺癌原位治疗的气溶胶， 所述肺癌包括小细胞肺癌  (SCLC)、 非小细 胞肺癌(NSCLC)和转移性肺癌。 [0006]为了解决上述 技术问题， 本发明提供了如下的技 术方案： [0007]本发明第一方面， 提供了一种可吸入制剂， 由D NA四面体载药颗粒作为唯一活性成 分溶解于缓冲溶液中制成液态制剂， 所述DNA四面体载药颗粒由四条  DNA单链经碱基互补 配对形成， 每条DNA单链均包括用于组装四面体结构的组装链， 且至少 有一条DNA单链还包 含免疫调节序列； 需要说明的是， 所述免疫调节序列选 自核酸免疫佐剂或免疫检查点核酸 适配体， 其中， 所述核酸免疫佐剂包括但 不仅限于CpG寡脱氧核苷酸(CpG  ODN)、 聚肌胞苷酸说　明　书 1/5 页 3 CN 115381937 A 3