(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210710447.2 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 南通大学 地址 226019 江苏省南 通市啬园路9号 申请人 南通市老年康复医院 　 南通市肿瘤医院 (72)发明人 夏栋林　冯灵子　吴玉　杨燕光　 陈超　李佳　 (74)专利代理 机构 南京汇盛专利商标事务所 (普通合伙) 32238 专利代理师 裴咏萍 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 31/506(2006.01) A61K 47/46(2006.01)A61K 47/24(2006.01) A61K 47/20(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) (54)发明名称 一种纳米疫苗及应用 (57)摘要 本发明公开了一种纳米疫苗， 通过以下方法 制备： S1、 纳米化达沙替尼的制 备； S2、 PLT制 备， 将新鲜血液分离得到血小板， 经脂质体挤出器处 理， 获得血小板膜液； S3、 超声包载， 取S1中制备 的纳米化达沙替尼溶液与血小板膜液， 充分超声 混匀后， 进行超声包载； S4、 离心收集， 将S3中超 声包载后的溶液离心， 即得所述纳米疫苗。 本发 明通过对达沙替尼进行纳米化修饰， 有利于血小 板的包载， 提高达 沙替尼的治 疗效果。 权利要求书1页 说明书5页 附图10页 CN 115105485 A 2022.09.27 CN 115105485 A 1.一种纳米疫苗， 其特 征在于， 所述纳米疫苗 通过以下 方法制备： S1、 纳米化达 沙替尼的制备 将达沙替尼溶解于DMSO中， 获得油相 ‑DMSO； 取大豆磷脂于纯水中， 加热搅拌， 滴加油 相‑DMSO， 滴加完毕后， 加入BSA， 搅拌充分， 0.2 2微米膜过 滤， 即得纳米化达 沙替尼溶 液； S2、 PLT制备 将新鲜血 液分离得到血小板， 经脂质体挤出器处 理， 获得血小板膜液； S3、 超声包载 取S1中制备的纳米化达 沙替尼溶 液与血小板膜液， 充分超声混匀后， 进行超声包载； S4、 离心收集 将S3中超声包载后的溶 液离心， 即得 所述纳米疫苗。 2.根据权利要求1所述的纳米疫苗， 其特征在于， 所述S3 中纳米化达沙替尼溶液与血小 板膜液的加入量比例为： 纳米化达沙替尼溶液中纳米化达沙替尼与加入的血小板膜液的比 例为13.7 μg： 0.5mL～6.3 μg： 2mL。 3.根据权利要求2所述的纳米疫苗， 其特征在于， 所述S1中达沙替尼、 大豆磷脂、 BSA的 加入比例为10mg:3 00mg:2mL。 4.根据权利要求3所述的纳米疫苗， 其特征在于， 所述S3 中纳米化达沙替尼溶液与血小 板膜液按照体积比1:0.5～1:2混合。 5.根据权利要求4所述的纳米疫苗， 其特征在于， 所述S3 中纳米化达沙替尼溶液与血小 板膜液的体积比为1:1。 6.根据权利要求5所述的纳米疫苗， 其特征在于， 所述S 1中纳米化达沙替尼的制备过程 如下： 取10mg达沙替尼， 溶解于DMSO中， 获得油相 ‑DASA； 取大豆磷脂300mg加入10mL纯水中， 水温控制 在60～70℃， 并在磁力 搅拌器下不断搅拌， 速度2000r ·min‑1， 滴加油相 ‑DASA， 10 分钟内滴加完毕； 随后加入2mL  BSA， 搅拌5mi n后， 0.22微米膜过 滤后即得到Nan o‑DASA。 7.根据权利要求6所述的纳米疫苗， 其特征在于， 所述S3中超声条件为： 功率100W的浴 式超声器、 温度为常温， 超声10mi n； 并在超声完成后， 将溶 液在37℃条件下放置 孵育30min。 8.权利要求1至7任一所述纳米疫苗在制备抗肿瘤药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115105485 A 2一种纳米疫苗及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技 术领域， 具体涉及一种纳米疫苗及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]癌症可以引发肿瘤特异性免疫反应， 进一步刺激治疗性疫苗的开发。 肿瘤疫苗能 够提高免疫治疗， 具有普遍性、 高效杀癌的特点， 是实现肿瘤彻底杀灭的有效策略。 肿瘤疫 苗能够诱导激活细胞毒性CD8+T淋巴细胞(CTL)， 达到提高肿 瘤免疫治疗效果。 其机理是外 源性抗原通过MHC ‑Ⅰ抗原递呈， 将抗原递呈至CD8+T淋巴细胞， 激活CTL免疫反应； 也可以通 过靶向树突状细胞摄取、 加工处理和提呈抗原， 从而启动适应性免疫应答， 提高免疫疗效。 由此， 肿瘤治疗性疫苗能够在自体诱导癌症特异性免疫反应， 做到最小程度的不良自身免 疫反应、 帮助解除免疫抑制， 并与其 他免疫疗法形成协同效应。 [0003]细胞焦亡是新近报道的有别于细胞凋亡的快速爆发式程序性死亡方式。 表 现为少 部分细胞在药物作用下半胱氨酸蛋白酶(Caspase)高表达， 切割Gasdermin家族蛋白(如 GSDME)使其活化， 发生细胞膜 “打孔”， 细胞膨胀式的爆破死亡， 释放细胞内容物(包括促炎 因子)， 快速激活机体免疫性T细胞， 致使其他相关细胞也发生类似的程序性快速爆发式死 亡。 调控肿瘤细胞的GSDME蛋白表达， 成为激活Caspase ‑3/GSDME通路， 释放促炎因子、 调控 记忆T细胞的激活成为有效途径。 发明内容 [0004]本发明的目的是为了提供一种能靶向肿瘤激活Caspase ‑3/GSDME通路， 引发细胞 焦亡， 实现高效的肿瘤免疫 治疗效果的疫苗。 [0005]为了达到上述目的， 本发明提供的技 术方案如下： [0006]一种纳米疫苗， 通过以下 方法制备： [0007]S1、 纳米化达 沙替尼的制备 [0008]将达沙替尼溶解于DMSO 中， 获得油相 ‑DMSO； 取大豆磷脂于纯水中， 加热搅拌， 滴加 油相‑DMSO， 滴加完毕后， 加入BSA， 搅拌充分， 0.2 2微米膜过 滤， 即得纳米化达 沙替尼溶 液； [0009]S2、 PLT制备 [0010]将新鲜血 液分离得到血小板， 经脂质体挤出器处 理， 获得血小板膜液； [0011]S3、 超声包载 [0012]取S1中制备的纳米化达沙替尼溶液与血小板膜液， 充分超声混匀后， 进行超声包 载； [0013]S4、 离心收集 [0014]将S3中超声包载后的溶 液离心， 即得 所述纳米疫苗。 [0015]本发明通过对达沙替尼进行纳米化修饰， 能够降低达沙替尼的粒径， 同时有利于 血小板的包载。 [0016]在部分实施例中， 为了获得更好的包载效果， S3中纳米化达沙替尼溶液与血小板说　明　书 1/5 页 3 CN 115105485 A 3