(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210703064.2 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 苏州工业园区唯可达生物科技有限 公司 地址 215000 江苏省苏州市工业园区星湖 街218号生物纳米园A 2楼230-230A室 (72)发明人 郜明泉　徐建青　 (74)专利代理 机构 苏州国诚专利代理有限公司 32293 专利代理师 黎兴科 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 39/00(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种肿瘤抗原抗体复合物及制备方法和应 用 (57)摘要 本发明公开了一种肿瘤抗原抗体复合物及 制备方法和应用， 该肿瘤抗原抗体复合物包括肿 瘤抗原和抗体， 肿瘤抗原抗体复合物 通过将肿瘤 抗原与抗体结合得到， 其为抗体偶联蛋白3G9 ‑ NY‑ESO‑1。 本发明中， 利用断裂内含肽GP41 ‑1反 式剪接方法实现肿瘤抗原与抗体的连接， 二者之 间利用肽键连接， 其稳定性更高， 特异性结合更 强， 反应条件温和， 效率高， 工艺简单， 且未加入 有毒有害物质， 也不会产生副产物等， 安全性高， 克服了现有技术中利用化学偶联方法等实现抗 原抗体连接时需要加入化学试剂、 有一定毒性、 化学偶联不稳定、 偶联键易断裂等问题， 肿瘤抗 原抗体复合物能作为一种新型的肿瘤疫苗使用， 为新型肿瘤疫苗的研发提供技 术支撑。 权利要求书2页 说明书6页 序列表（电子公布） 附图3页 CN 115028741 A 2022.09.09 CN 115028741 A 1.一种肿瘤抗原抗体复合物， 其特征在于， 所述肿瘤抗原抗体复合物包括肿瘤抗原和 抗体， 所述肿瘤抗原抗体复合物的重链氨基酸序列如SEQ  ID NO:10所示， 轻链氨基酸序列 如SEQ ID NO:6所示， 轻链不 参与反应。 2.根据权利要求1所述的一种肿瘤抗原抗体复合物， 其特征在于， 所述肿瘤抗原抗体复 合物通过将肿瘤抗原与抗体结合得到， 所述肿瘤抗原抗体复合物为抗体偶联蛋白3G9 ‑NY‑ ESO‑1， 所述肿瘤抗原为 NY‑ESO‑1， 所述抗体为DE C205的单克隆抗体3G9。 3.根据权利要求2所述的一种肿瘤抗原抗体复合物， 其特征在于， 所述肿瘤抗原抗体复 合物通过断裂内含肽GP41 ‑1反式剪接将肿瘤抗原与抗体结合得到 。 4.根据权利要求1 ‑3任一所述的一种肿瘤抗原抗体复合物的制备方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： 步骤(1)： 抗体融合蛋白3G9 ‑IntN重链表达载体构建 步骤(2)： 抗体融合蛋白3G9 ‑IntN制备 步骤(3)： 融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ESO‑1表达载体构建 步骤(4)： 融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ESO‑1制备 步骤(5)： 抗体偶联蛋白3G9 ‑NY‑ESO‑1制备。 5.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(1) 中， 抗体融合蛋 白3G9‑IntN重链表达载体构建的步骤包括： 以质粒pUC57 ‑Kan‑GP41IN为模 板， 设计碱基序列如SEQ  ID NO:3所示的Fc ‑IntN‑F和碱基序列如SEQ  ID NO:4所示的Fc ‑ IntN‑R， 通过PCR扩增Fc ‑IntN基因片段， 然后凝胶回收相应片段， 克隆至phIgG1 ‑3G9载体上 的多克隆位点BamH  I与HindⅢ之间， 构建成可表达抗体融合蛋白3G9 ‑IntN的重链表达载体 phIgG1‑3G9‑IntN。 6.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(2) 中， 抗体融合蛋白3G9 ‑IntN制备的步骤包括： 将步骤(1)构建的抗体融合蛋白3G9 ‑IntN重链 表达载体和抗体3G9轻链表达载体phIgK ‑3G9以1:1 的质量比共同转染293T细胞， 表达抗体 融合蛋白3G9 ‑IntN， 蛋白重链氨基酸序列如SEQ  ID NO:5所示， 轻链氨基酸序列如SEQ  ID  NO:6所示。 7.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(3) 中， 融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ESO‑1表达载体构建的步骤 包括： 通过使用BamH  I和NdeI双酶切质粒pUC57 ‑Kan‑GB1‑GP41IC和pET ‑30a(+)‑NY‑ESO‑1， 分别得到GB1 ‑IntC片段和线性化载体pET ‑30a(+)‑NY‑ESO‑1， 然后使用T 4连接酶， 用T4连接 方法构建成融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ESO‑1表达载体pET ‑30a(+)‑GB1‑IntC‑NY‑ESO‑1。 8.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(4) 中， 融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ESO‑1制备的步骤 包括： 将步骤(3)构建的融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ESO‑1表达载体pET ‑30a(+)‑GB1‑IntC‑NY‑ ESO‑1转化至BL21(DE3)感受态细胞中， ， 根据 《pET系统手册》 制 备融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ ESO‑1， 蛋白氨基酸序列如SEQ  ID NO:9所示， 使用HisTrapTM  HP纯化目的蛋白。 9.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(5) 中， 抗体偶联蛋白3G9 ‑NY‑ESO‑1制备的步骤 包括： 将步骤(2)所得抗体融合蛋白3G9 ‑IntN和步骤(4)所得融合蛋白GB1 ‑IntC‑NY‑ESO‑1以权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115028741 A 2一定的摩尔比混合， 加终浓度10微摩每升的DTT诱导催 化断裂内含肽GP41 ‑1反式剪接 反应， 剪接反应后， IntN剩余TRSGY五个氨基酸残基与IntC的五个氨基酸残基SSSDV以肽键连接， 得到所需抗体偶联蛋白3G9 ‑NY‑ESO‑1， 蛋白重链氨基酸序列如SEQ  ID NO:10所示， 轻链氨 基酸序列如SEQ  ID NO:6所示， 轻链不 参与反应。 10.根据权利要求1 ‑4任一所述的一种肿瘤抗原抗体复合物在制备肿瘤疫苗中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115028741 A 3