(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210701245.1 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 南京林业大 学 地址 210037 江苏省南京市玄武区龙蟠路 159号 (72)发明人 张瑜　杨昆　王飞　李迅　董亦馨　 (74)专利代理 机构 南京中律知识产权代理事务 所(普通合伙) 32341 专利代理师 李建芳 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01) A61K 31/337(2006.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋 白纳米粒的制备方法及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种共负载紫杉醇和锰酞菁 的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法及应用， 共负 载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制 备方法为： 通过化学偶联的方法将AS1411修饰在 铁蛋白外表 面； 并通过 温度法将紫杉醇与锰酞菁 两种药物共负载在适配体铁蛋白内。 本发明修饰 了适配体AS1411的铁蛋白纳米载药系统， 不仅增 强了纳米粒子的靶向性， 而且共负载的两种药物 结合了化学治疗与光动力治疗， 提高了肿瘤细胞 的抑制效果， 为后续药物靶向肿瘤细胞治疗提供 了非常好的载体模型， 具有很好的应用前 景。 权利要求书2页 说明书6页 附图5页 CN 114984217 A 2022.09.02 CN 114984217 A 1.一种共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在于： 包括 如下步骤： 1)将适配 体AS1411通过化学 方法偶联在铁蛋白表面， 得适配 体铁蛋白； 2)适配体铁蛋白通过温度法共同负载紫杉醇和锰酞菁， 即得共负载紫杉醇和锰酞菁的 适配体铁蛋白纳米粒。 2.如权利要求1所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法， 其 特征在于： 步骤1)中， 将适配体AS1411与铁蛋白通过碳二亚胺法偶联， 超滤离心， 得到适配 体 铁 蛋 白 ； 其 中 ， 适 配 体 A S 1 4 1 1 是 D N A 适 配 体 ， 基 因 序 列 为 5 ’(C O O H) ‑ GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG‑3’， 铁蛋白为人重链铁蛋白。 3.如权利要求1或2所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁 蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在于： 步骤1)中， 适配 体AS1411与铁蛋白的摩尔比为(2 ±0.1):1。 4.如权利要求1或2所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁 蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在于： 步骤1)包括如下步骤： 1.1)将适配 体AS1411溶于超纯 水中， 得浓度为10 0±20 μM的适配 体AS1411水溶液； 1.2)将铁蛋白溶于GFC溶 液， 得浓度为0.6 ±0.2mg/mL铁蛋白GFC溶 液； 1.3)将步骤1.1)制得的适配体AS1411水溶液加入MES溶液， 然后加入EDC溶液和NHS溶 液， 冰浴搅拌30 ±5min； 随后加入步骤1.2)制得的铁蛋白GFC溶， 用pH为8～8.5的GFC溶液调 pH至7～7.5以上， 冰浴搅拌2 ±0.5h， 然后5000 ×g离心5±1min去除失活铁蛋 白， 取出上清 3200×g超滤离心20 ±2min， 再超滤置换到pH＝7.0 ±0.1的GFC溶液中， 14000 ±1000rpm离 心15～20min， 取上清， 即为偶联了AS141 1的适配体铁蛋白。 5.如权利要求4所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法， 其 特征在于： 步骤1.2)中， 铁蛋白GFC溶液中， 氯化钠浓度25 ±1mM， 磷酸二氢钠50 ±1mM， pH＝ 7.0±0.1； 步骤1.3)中， MES溶液的浓度为8 ±0.1mg/mL， pH为6 ±0.1； EDC溶液的浓度为200 ±5mM； NHS溶液的浓度为100 ±5mM； GFC溶液中， 氯化钠浓度为25 ±1mM， 磷酸二氢钠为50 ± 1mM。 6.如权利要求1或2所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁 蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在于： 步骤2)中， 将紫杉醇和锰酞菁加入到适配体铁蛋白中， 孵育后离心， 分离上清 液， 透析、 离心、 过 滤， 得到共负载 药物纳米粒。 7.如权利要求6所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法， 其 特征在于： 步骤2)中， 适配体铁蛋白与紫杉醇的质量比为(2 ±0.1)： 1， 适配体铁蛋白与锰酞 菁的质量比为(5 ±0.2)： 1； 将紫杉醇与锰酞菁溶于DMSO后， 再加入到适配 体铁蛋白中。 8.如权利要求6所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法， 其 特征在于： 步骤2)中， 孵育为60℃恒 温水浴50 ‑60min； 孵育后离心的转速为12000rpm， 离心 时间为10～15mi n。 9.如权利要求6所述的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法， 其 特征在于： 步骤2)中， 透析的时间为24～48h， 透析温度为4 ±0.1℃， 透析后在5000 ×g条件 下离心8～10min， 上清液使用0.45 μm的滤膜过滤， 即为负载了紫杉醇和锰酞菁药物的适配 体铁蛋白载 药纳米粒。 10.权利要求1～9任意一项所述的制备方法制得的共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114984217 A 2蛋白纳米粒在递送抗肿瘤药物上的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114984217 A 3