(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210696333.7 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 成都施桂行医药 科技有限责任公司 地址 610218 四川省成 都市双流区生物城 中路二段18号 (72)发明人 韩源平　刘威　 (74)专利代理 机构 北京一枝笔知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11791 专利代理师 张庆瑞 (51)Int.Cl. C07K 14/47(2006.01) C07K 1/04(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/81(2006.01) C12N 15/85(2006.01)A61K 38/17(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 3/00(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 防御肽及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明涉及一种防御肽及其制备方法和应 用。 本发明涉及医药领域包括人用和兽用药的制 备以及预防以及治疗的应用， 涉及特异防御肽以 及其衍生物的制备以及用于治疗或预防各种疾 病的应用。 采用多种给药方法， 具有特异结构多 多肽或其衍生物能够调控肠道细菌群体感应系 统,能够调控细菌自诱导信号 ‑2以平衡肠道微生 态。 该多肽能够抑制小肠细菌异位上升、 抑制细 菌内毒素以及其它病原体相关分子模式物进入 肝脏以及循环系统， 以此能够预防以及治疗多种 代谢疾病， 包括2型糖尿病、 肥胖、 非酒精脂肪肝 炎、 酒精性肝炎、 肝衰竭、 肝硬化、 多种癌症、 囊性 纤维化、 炎症性肠病 、 肠易激综合征。 权利要求书1页 说明书16页 序列表2页 附图12页 CN 114874311 A 2022.08.09 CN 114874311 A 1.一种防御肽， 其特 征在于， 所述防御肽为： 氨基酸序列如SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2所示的多肽； 或与SEQ ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2所示的多肽具有同源性， 且具有相同生物活性的多 肽； 或由SEQ ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2所示的多肽经化学修饰、 保护、 首尾连接成环或多个 氨基酸的缺失、 替代或增 加得到， 且具有相同生物活性的多肽。 2.一种DNA片段， 其特 征在于， 所述DNA片段编码权利要求1所述的防御肽。 3.根据权利要求2所述的DNA片段， 其特征在于， 所述DNA片段的序列如SEQ  ID NO： 3或 SEQ ID NO： 4所示。 4.一种重组表达载体， 其特征在于， 所述重组表达载体含有编码权利要求1所述的防御 肽的核苷酸序列。 5.一种宿主细胞， 其特 征在于， 其基因 组中含有权利要求2或3所述的DNA片段。 6.权利要求1所述的防御肽、 权利 要求2或3所述的DNA片段、 权利 要求4所述的重组表达 载体或权利要求5所述的宿 主细胞在制备用于平衡肠道微生态或治疗肠道菌群紊乱相关疾 病的产品中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述防御肽通过干预细菌群体感应系统以 平衡肠道微生态， 且能够促进肠道内源益生菌的丰度， 也能够抑制多种肠道条件致病菌， 可 以用于治疗肠道菌群紊乱以及病源相关分子模式物导致的组织损伤以及器官衰竭和因肠 道菌群紊 乱导致的代谢疾病。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述肠道菌群紊乱相关疾病包括2型糖尿 病、 肥胖、 脂肪肝病 、 代谢综合征、 肝衰竭和肝损伤。 9.一种权利要求1所述的防御肽的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 通过固相合成方法制备 所述防御肽； 或 通过权利要求5所述的宿主细胞进行基因表达制备 所述防御肽。 10.一种药物， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的防御肽和药 学上可接受的辅料。 11.根据权利要求10所述的药物， 其特 征在于， 所述辅料包括肠道缓释剂以及稳定剂。 12.根据权利 要求10所述的药物， 其特征在于， 还包括维生素D和25 ‑羟基维生素D3中的 一种或多种。 13.根据权利要求10所述的药物， 其特征在于， 所述药物的剂型为口服制剂、 喷雾制剂 或注射制剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114874311 A 2防御肽及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及医药技 术领域， 特别是 涉及一种防御肽 及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]肠道微生态紊乱是多种疾病的共同原因。 肠道微生物群(gut  microbiota)是生活 在动物消化道中的多种微生物， 包括细菌和古菌(archaea)以及真菌和肠道病毒。 肠道 微生 态也可以叫做肠道菌群(gut  flora)或者肠道微生物组(microbiome)。 胃肠道宏基因组 (gastrointestinal  metagenome)是肠 道微生物 群所有基因组的集合体。 在人类中， 肠道是 微生物群的主要位置及场所。 肠道微生物群具有广泛的生理功 能， 包括对微生物定植的影 响， 对病原体的抵抗力， 也能够维持肠道上皮生理平衡， 能够帮助代谢膳食和药物的分解， 帮助建立以及维持机体的免疫功能。 健康的成年人通常都有500至1000种细菌(species)， 它们隶属于相对较少的已知细菌门(phyla)， 包括拟杆菌门(Bacteroidetes)和 厚壁菌门 (Firmicutes)， 变性杆菌门(Proteobacteria)等。 微生物群与宿主免疫系统之间的相互作 用是众多、 复杂的以及双向的。 免疫系统必须学会容忍共生微生物群的存在， 并对病原体做 出适当反应。 反过来， 微生物群也帮助塑造机体的免疫系统。 肠道微生物的生物功能包括： (1)帮助机体 建立免疫平衡机制,(2)合 成多种维生素B， 而后者是机体细胞生物 化学代谢关 键酶的辅酶(Co ‑enzymes),(3)基于其巨大的数量肠道微生物能够抵御外来的侵入细菌的 定殖,(4)通过分解在小肠没有被消化的食物残余产生短链脂肪酸(short  chain fatty  acids)， 后者不但是机体的重要热卡来源， 也能够调控机体的代谢以及平衡免疫系统。 例如 短链脂肪酸能够帮助肠道建立免疫调节T ‑细胞(regulatory  T cells,Treg),以维持免疫 系统的平衡， 避免过度的炎症反应。 [0003]相反， 肠道菌群紊乱(gut  dysbiosis)与多种疾病 密切相关。 肠道菌群紊乱可以表 现为三个方面。 第一， 肠道菌群组成的改变， 包括微生物组分丰度的改变， 往往是群体的丰 度降低， 微生态多样性性降低； 它们可以用香农 ‑威纳指数(Shannon's  Diversity  Index)， alpha‑多样性， beta ‑多样性等等参数来描述。 第二， 肠道菌群紊乱也表现为大肠中的细菌 出现在小肠中， 即细菌道小肠异位上升。 而异位细菌在 小肠中产生的内毒素(endot oxin)能 够随着食物乳糜进入门静脉或者进入淋巴系统， 产生系统炎症， 而后者是导致胰岛素抵抗 的重要原因。 在生理状态， 除了回肠 隔膜的机械作用阻止大肠细菌上扬， 在小肠末端(回肠 段)的潘氏细胞(Panet h cells)所外分泌于肠腔的防御肽， 包括alpha ‑densin‑5/6， 能够抑 制细菌在小肠中升位上升。 这些防御肽能够直接抑制多种细菌/真菌/肠道病毒， 阻止它们 异位上升。 多种亚健康状态， 例如缺乏阳光或者 维生素D缺乏能够导致潘氏细胞防御肽基因 表达能力降低， 然后再导致细菌在小肠中异位上移。 第三， 菌群紊乱 也表现为条件致病菌的 增加， 以及菌体的死亡增加。 例如我们发现在维生素D以及高脂肪饲养条件下， 条件致病菌 Helicobacter  hepaticus出现在小肠段。 在小鼠模型中该细菌能够产生肝炎， 而在肝癌病 人以及肝硬化病人中该细菌也发现于肝脏中增加。 例如炎症性肠病(inflammatory  bowel  diseases,IBD)是由环境和遗传风险因素共同导致的肠道不适当炎症疾病。 炎症反应的原说　明　书 1/16 页 3 CN 114874311 A 3