(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210697523.0 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 南京吉芮康生物科技研究院有限公 司 地址 210044 江苏省南京市浦口区江北新 区药谷大道11号加速器二期05栋505 室 申请人 江苏靶标生物医药研究所有限公司 (72)发明人 华子春　庄红芹　毕志倩　 (74)专利代理 机构 江苏银创律师事务所 32 242 专利代理师 何震花 (51)Int.Cl. A61K 35/745(2015.01) A61K 38/39(2006.01) A61P 29/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种携带内皮抑素蛋白的重组长双歧杆菌 在制备治疗小鼠结肠炎和结直肠癌的药物中的 应用 (57)摘要 本发明公开了一种携带内皮抑素蛋白的重 组长双歧杆菌在制备治疗小鼠结肠炎和结直肠 癌的药物中的应用。 所述的携带内皮抑素蛋白为 来源于胶 原XVIII蛋白序列的长度为2 0‑28kDa的 C端片段。 所述的携带内皮抑素蛋白的重组长双 歧杆菌可缓解肠炎引起的小鼠体重减轻、 腹泻、 结肠缩短和结肠上皮损伤。 所述的携带内皮抑素 蛋白的重组长双歧杆菌可显著降低结直肠肿瘤 的成瘤率、 减小肿瘤数量和肿瘤体积。 携带内皮 抑素蛋白的重组长双歧杆菌B.longum ‑Endo同时 能够治疗炎症性肠病和结直肠癌疾病。 权利要求书1页 说明书13页 序列表1页 附图6页 CN 115364125 A 2022.11.22 CN 115364125 A 1.一种携带内皮抑素蛋白的重组长双歧杆菌在制备治疗结肠炎和结直肠癌的药物中 的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑 素蛋白的氨基酸序列如 SEQ ID No.1所示。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑 素蛋白的重组长双歧杆 菌可缓解肠炎模型引起的体重减轻、 腹泻、 结肠缩短和结肠上皮损伤。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑 素蛋白的重组长双歧杆 菌可显著降低结直肠肿瘤的成瘤率、 减小肿瘤数量和肿瘤体积， 提高结直肠癌模型 的总体 生存率。 5.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑 素蛋白的重组长双歧杆 菌可有效预防或抑制结直肠癌模型中的肿瘤的发生。 6.根据权利要求1、 3所述的应用， 其特征在于， 所述的携带内皮抑 素蛋白的重组长双歧 杆菌可将肠炎模 型的MPO活性恢复到正常水平， 有效缓解肠炎模型中ZO ‑1， Occludin基因表 达水平的降低， 还同时明显降低肠炎模型 结直肠中的促炎细胞因子的高表达 。 7.根据权利要求1、 4、 5所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑 素蛋白的重组长双 歧杆菌改善结直肠癌模型的肠道微生物群失调， 显著增加结直肠癌模型肠道菌群丰富度和 微生物多样。 8.根据权利 要求1、 4、 5、 7所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑素蛋白的重组长 双歧杆菌可同时显著增加拟杆菌门(Bacteroidota)、 放线菌门(Actinobacteria)、 疣微菌 门(Verrucomicrobiota)的相对丰度， 而显著减少脱硫杆菌门(Desul fobacterota)相对丰 度。 9.根据权利 要求1、 4、 5、 7所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑素蛋白的重组长 双歧杆菌可显著改善直肠癌模型紊乱的肠道菌群结构， 乳酸杆菌属(Lactobacillus)、 拟杆 菌属(Bacteroides)、 回肠杆菌属(Ileibacterium)、 双歧杆菌属(Bifidobacterium)、 阿洛 巴氏菌属(Allobaculum)、 狄氏副拟杆菌属(Parabateroides)和副萨特氏菌属 (Parasutterella)的相对丰度均显著提高； 致病菌硫酸盐还原细菌(Desu lfovibrio)、 结直 肠癌的潜在生物标志 物另枝菌属(Al istipes)的相对丰度显著降低。 10.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述的携带内皮抑素蛋白的重组长双歧 杆菌可在肠道体内有效地定植增殖， 携带内皮抑素蛋白的重组长双歧杆菌停止口服给药 后， 结直肠模型肿瘤并未生长， 结直肠模型的总体存活率 仍得以提高。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115364125 A 2一种携带内皮抑素蛋白的重组长双歧杆菌在制备治疗小鼠结 肠炎和结直肠癌的药物中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物技术领域， 具体涉及本发明涉及 一种携带内皮抑素蛋白的重 组长 双歧杆菌在制备治疗小鼠结肠炎和结直肠癌的药物中的应用。 背景技术 [0002]炎症性肠病炎症性肠病是一组病因尚未阐明的慢性非特异性肠道炎症性疾病， 包 括溃疡性结肠炎(Ulcerative  Colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's  disease,CD)。 虽然炎症 性肠病的发病率逐年上升， 但其具体的发病原因仍知之甚少 。 肠道微生物群的紊乱是炎症 性肠病的一个重要 特征。 临床上， 炎症性肠病患者的肠道菌群与健康人相比有显著差异。 例 如， 炎症性肠病患者的肠道微生物群多样性减少， 肠杆菌和梭杆菌增加， 厚壁菌门减少。 长 期以来， 慢性炎症和肠道微生物群紊乱被认为是炎症性肠病发展为结直肠癌的重要危险因 素。 目前， 临床试验表明通过口服益生菌调节肠道微生物的平衡， 是预防炎症 性肠病和结肠 癌的一种潜在方法。 [0003]双歧杆菌Bifidobacterium是一种不活跃、 大多呈分叉杆状、 严格厌氧的细菌属， 主要定植于人和动物的肠道内。 临床发明表明双歧杆菌可治疗胃肠道疾病、 缓解乳糖不耐 症、 增强免疫系统功能、 减少幽门螺杆菌在胃肠道中的定植。 长双歧杆菌Bifidobacterium   longum属于双歧杆菌属， 由于其安全性和有效性， 在医药和乳制品行业被广泛应用。 长双歧 杆菌B.longum  是人类肠道中的优势微生物群， 当机体正常的微生物菌群受到干扰时， 外源 补充的长双歧杆菌能够快速定植于肠道内以增强肠道屏障功能(Schroeder,BO.,Cell   Host Microbe 2018, 23:27‑40； Lewis,ZT.,Microbiome  2015,3:13)。 近年来， 双歧杆菌还 被用作生物制剂 治疗结直肠癌(Singh,J.,Carcinogenesi s 1997,18:833 ‑841； Fahmy,CA., Nutr Cancer 2019,71:688 ‑700； Valadez‑Bustos,N.,Int  J Mol Sci 2019,20:4275)。 双 歧杆菌具有较强的肿瘤靶向能力， Yazawa  等人以双歧杆菌为递送系统实现了对荷瘤小鼠 的基因治疗(Yazawa,K.,Cancer  Gene Ther 2000, 7:269‑274)。 [0004]血管生成是一个复杂的过程， 受到促血管生成因子和抗血管生成因子的严密调 控。 肿瘤血管生成在促进肿瘤生长和转移过程中具有关键作用， 抑制其生成已成为癌症治 疗的一个重要靶 标。 内皮抑素片段是一种来源于胶原XVIII蛋白序列的长度为20 ‑28kDa的C 端片段， 主要位于血管基底膜内(Perkins,GD.,Crit  Care 2009,13:R52)。 临床上， 重组人 内皮抑素  Endostar已被批准用于治疗非小细胞肺癌。 发明内容 [0005]针对上述缺陷， 本发明提供了一种携带内皮抑素蛋白的重组长双歧杆菌在制备治 疗小鼠结肠炎和结直肠癌的药物中的应用。 [0006]为了达到上述发明目的， 本发明所采用的技术方案如下： 本发明的一种携带内皮 抑素蛋白的重组长双歧杆菌在制备治疗小鼠结肠炎和结直肠癌的药物中的应用。说　明　书 1/13 页 3 CN 115364125 A 3