(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210696024.X (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 天津科技大 学 地址 300457 天津市滨 海新区经济技 术开 发区第十三大街9号 (72)发明人 刘会平　闫芝茜　刘易坤　 (74)专利代理 机构 天津盛理知识产权代理有限 公司 12209 专利代理师 韩晓梅 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) A61K 31/715(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖、 提取分离方 法和在制备抗肿瘤药物的补充剂中的应用 (57)摘要 本发明属于功能性食品领域， 提供一种具有 抗肿瘤活性的杜仲叶多糖的制备及结构表征方 法。 本发明通过水提醇沉法制备杜仲叶多糖， 采 用凝胶色谱柱进行分离纯化， 得到均一性的杜仲 叶多糖(EFP)。 采用高效液相色谱、 离子色谱、 红 外光谱和NMR对其进行表征。 在小鼠体内研究了 EFP这一组分的免疫调节和抗肿瘤作用， 证明EFP 的抗肿瘤活性较高， 有望作为一种潜在的抗肿瘤 药物进行开发。 权利要求书2页 说明书9页 附图7页 CN 114989323 A 2022.09.02 CN 114989323 A 1.一种具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖， 其特征在于： 所述杜仲叶多糖的相对分子量为 9.98×105Da， 由鼠李糖、 阿拉伯糖、 半乳糖、 葡萄糖、 木糖、 甘露糖、 半乳糖醛酸和葡萄糖醛 酸按摩尔比为： 0.2 26:1.739:2.183:1:0.15 5:0.321:0.3 58:0.047组成。 2.根据权利要求1所述的杜仲叶多糖， 其特征在于： 所述杜仲叶多糖是一种同时含有α ‑ 型糖苷键和β ‑型糖苷键的酸性多糖， 其主链由α ‑L‑Araf‑(1→、→3,5)‑α‑Araf‑(1→、→3)‑ β‑Galp‑(1→、→3,6)‑β‑Glcp‑(1→、→2)‑α‑D‑Manp‑(1→、→4)‑α‑GalpA‑(1→和→2,4)‑ α‑Rhap‑(1→组成； 或者， 所述杜仲叶多糖是一种同时含有α ‑型糖苷键和β ‑型糖苷键的酸性多糖， 红外光 谱中1617.03cm‑1处出现的吸收峰和13C NMR中173.30ppm处的低场信号都证明了糖醛酸的 存在。 3.根据权利要求1或2所述的杜仲叶多糖， 其特征在于： 所述杜仲叶多糖在 建立的H22荷 瘤小鼠模型中能够诱导肿瘤细胞的凋亡， 将其DNA复制周期阻滞在S期， 同时降低肿瘤细胞 线粒体膜电位， 以此来抑制肿瘤的生长 。 4.如权利要求1至 3任一项所述的杜仲叶多糖的提取分离方法， 其特 征在于： 步骤如下： (1)干燥的杜仲叶粉末作为原料， 蒸馏水作为提取剂， 采用水提醇沉法对杜仲叶粗多糖 进行提取； (2)采用葡聚糖凝胶柱Sephadex  G‑200对杜仲叶多糖进行分离纯化， 得到均一杜仲叶 多糖EFP。 5.根据权利要求4所述的杜仲叶多糖的提取分离方法， 其特征在于： 提取的具体方法为 提取温度10 0℃， 料液比为1:20， 提取时间为3小时， 提取次数3次， 醇沉浓度为6 0％。 6.根据权利要求4所述的杜仲叶多糖的提取分离方法， 其特征在于： 分离纯化的具体方 法为采用Sephadex  G‑200凝胶柱进行洗脱， 洗脱速度为0.1mL/min， 每一管的收集时间设定 为25min。 7.根据权利要求4所述的杜仲叶多糖的提取分离方法， 其特征在于： 干燥是指在50℃的 烘箱中干燥3小时， 再 过60目筛； 或者， 步骤(1)中采用5g杜仲叶粉末采用250mL石油醚， 在水浴70℃的条件下进行脱脂 处理， 冷凝回流6小时后进行烘干处 理， 得到脱脂的杜仲叶粉末； 或者， 步骤(1)中杜仲叶粉末和水的比例为1:20， 提取 时间为3小时， 提取 次数为3次， 醇 沉浓度为6 0％； 或者， 步骤(1)中提取 液被浓缩至三分之一体积， 得到浓 缩液； 或者， 步骤(1)中浓 缩液中加入乙醇过夜后， 通过在40 00rpm下离心10mi n获得粗多糖。 8.根据权利要求4所述的杜仲叶多糖的提取分离方法， 其特征在于： 步骤(2)包括向杜 仲叶粗多糖溶液中加入1/5倍体积的Sevage试剂， Sevage试剂由正丁醇和三氯甲烷以4:1的 比例配置得到， 充分震荡20min后静置， 等待溶液分层， 弃去蛋白层， 多糖溶液和Sevage试剂 进行回收， 再补充少量的Sevage试剂。 重复5 ‑7次直到多糖溶液中不再看到蛋白层出现， 剩 余的有机试剂通过旋转蒸发仪除去； 或者， 步骤(2)包括除去蛋白后的粗多糖溶液用蒸馏水在4℃透析(100kDa)3天， 期间每 隔8小时换一次水， 冷冻干燥并收集得到粗杜仲叶多糖(c EFP)； 或者， 步骤(2)中精准称量20mg样品cEFP溶于1mL蒸馏水中， 通过0.45μm滤膜。 采用权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114989323 A 2Sephadex G‑200凝胶柱进行洗脱， 准确控制0.1mL/min为洗脱速度， 每一管的收集时间设定 为25min； 或者， 步骤(2)包括利用苯酚 ‑硫酸法测定每一管洗脱液中的组分， 得到洗脱曲线。 将同 一组分的洗脱液进行合并、 冻干， 得到的多糖命名为EFP。 9.如权利要求1至 3任一项所述的杜仲叶多糖在制备抗肿瘤药物的补充剂中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于： 所述抗肿瘤药物为预防和/或治疗肝癌疾 病的药物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114989323 A 3