(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210721330.4 (22)申请日 2022.06.17 (71)申请人 石河子大 学 地址 832000 新疆维吾尔自治区石河子市 北四路221号 (72)发明人 秦冬梅　孟凌宇　陈卫军　张青　 (74)专利代理 机构 北京方圆嘉 禾知识产权代理 有限公司 1 1385 专利代理师 朱玲艳 (51)Int.Cl. C07C 50/32(2006.01) C07C 46/10(2006.01) C07C 69/18(2006.01) C07C 69/533(2006.01) C07C 67/48(2006.01)C07C 67/56(2006.01) A61K 31/122(2006.01) A61K 31/222(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种紫草素类化 合物的制备方法及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种紫草素类化合物的制备 方法及其应用， 涉及医药技术领域。 本发明采用 石油醚对紫草素类化合物进行提取、 正相硅胶柱 分离(石油醚 ‑乙酸乙酯)， 对所得组分WR2 ‑33‑8 进行正相硅胶柱分离(二氯甲烷 ‑石油醚)， 配合 ODS柱分离(甲醇水溶液)保证了乙酰紫草素的收 率、 纯度和结构稳定； 对所得组分WR2 ‑33‑12进行 正相硅胶柱分离(二氯甲烷)得到高收率和高纯 度的2,3‑二甲基戊烯酰紫草素和紫草素。 本发明 提供的制备方法的工艺流程简单高效； 而且， 本 发明提供的制备方法制得的乙酰紫草素、 2,3 ‑二 甲 基戊 烯 酰 紫 草 素 和紫 草 素 纯 度高 ， 对 HepG2.2.15细胞具有很好的抑制作用和治疗效 果。 权利要求书2页 说明书8页 附图5页 CN 114933522 A 2022.08.23 CN 114933522 A 1.一种紫 草素类化 合物的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)利用石油醚对新疆软紫 草进行提取， 得到石油醚部位 粗提物； (2)采用石油醚 ‑乙酸乙酯混合溶剂对所述石油醚部位粗提物进行正相硅胶柱分离， 得 到组分WR2 ‑33‑8和组分WR2 ‑33‑12； 所述正相硅胶柱分离用洗脱剂为石油醚 ‑乙酸乙酯混合 溶剂， 所述石油醚 ‑乙酸乙酯混合溶剂中石油醚 ‑乙酸乙酯的体积比为(40～1)： 1； (3)采用二 氯甲烷‑石油醚混合溶剂对所述组分WR2 ‑33‑8进行正相硅胶柱分离， 得到乙 酰紫草素粗产物； 所述二氯甲烷 ‑石油醚混合溶剂中二氯甲烷和石油醚的体积比为1： (4～ 6)； 采用甲醇水溶液对所述乙酰紫草素粗产物进行十八烷基硅烷键合硅胶反相柱分离， 得 到乙酰紫草素； 所述甲醇水 溶液中甲醇的体积分数为9 2～94％； (4)采用二 氯甲烷对所述组分WR2 ‑33‑12进行正相硅胶柱进行分离， 得到2,3 ‑二甲基戊 烯酰紫草素和紫 草素； 步骤(3)和步骤(4)没有时间先后顺序。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述提取包括依次进行浸 泡和热提取。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述提取的次数为3～4次， 单次浸泡 的时间为8～12h， 单次热提取时间为1～3 h； 所述热提取的温度为5 6～58℃； 单次提取用石油醚与新疆软紫 草的质量比为(7～8)： 1。 4.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 所述正相硅胶柱分离的洗 脱方式为梯度洗脱， 所述梯度洗脱过程中石油醚 ‑乙酸乙酯混合溶剂 中石油醚和乙酸乙酯 的体积比依次为 40:1、 30:1、 20:1、 15:1、 10:1、 8 :1、 5:1和1:1。 5.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 所述正相硅胶柱分离用硅 胶粒径为20 0～300目。 6.根据权利 要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)和步骤(4)中所述正相硅胶柱 分离用硅胶粒径独立 地为300～400目。 7.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 所述十八烷基硅烷键合硅 胶反相柱在使用前先进行预处理， 所述预处理包括： 将十八烷基硅烷键合硅胶反相柱的填 料进行甲醇浸泡， 将得到的甲醇浸泡填料装柱， 甲醇洗至无混浊， 然后以甲醇水溶液进行平 衡； 所述甲醇水 溶液中甲醇的体积分数为9 2～94％。 8.权利要求1～7任一项所述制备方法制得的紫草素类化合物中的一种或几种在制备 抑制表达乙型肝炎病毒的肝癌细胞的药物中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述表达乙型肝炎病 毒的肝癌细胞的个数 与紫草素类化 合物的剂量之比为1.15 ×104个： 0.3～10 0 μmol/L。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述表达乙型肝炎病毒的肝癌细胞的个 数与乙酰 紫草素的剂量之比为1.15 ×104个： 0.78125～10 0 μmol/L； 所述表达乙型肝炎病毒的肝癌细胞的个数与2,3 ‑二甲基戊烯酰紫草素的剂量之比为 1.15×104个： 0.3125～40 μmo l/L； 所述表达乙型肝炎病毒的肝癌细胞的个数与紫草素的剂量之比为1.15 ×104个： 0.625权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114933522 A 2～80 μmol/L。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114933522 A 3