(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210677815.8 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 辽宁中医药大学 地址 110847 辽宁省沈阳市皇姑区崇山 东 路79号 (72)发明人 英锡相　郭胜男　兰秀娟　张文洁　 (74)专利代理 机构 沈阳亚泰专利商标代理有限 公司 21107 专利代理师 史力伏 (51)Int.Cl. C07D 217/08(2006.01) A61K 31/472(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A23L 33/105(2016.01) (54)发明名称 马齿苋中一种四氢异喹啉类生物碱的提取 分离方法及其应用 (57)摘要 本发明涉及中药提取、 分离领域， 尤其涉及 从马齿苋中提取、 分离和鉴别出一种四氢异喹啉 类生物碱及其提取分离方法。 所述的四氢异喹啉 类生物碱， 分子式为C10H12N2O3， 命名为1 ‑methyl‑ 2‑nitroso‑1,2,3,4‑tetrahydroisoquinoline ‑ 6,7‑diol。 还提供上述四氢异喹啉类生物碱的提 取分离方法， 依次采用水煎煮提取、 硅胶 柱层析、 乙酸乙酯萃取、 ODS中压柱、 SI中压柱、 葡聚糖凝 胶柱及液相分离制备。 其结构采用1H‑NMR、13C‑ NMR及二维核磁波谱解析的方法确定为四氢异喹 啉类生物碱化合物。 该化合物具有潜在的抗炎和 抗癌的活性， 并提供制备方法， 为开发新药和开 发新成分提供 先导物和理论依据。 权利要求书1页 说明书6页 附图7页 CN 114989084 A 2022.09.02 CN 114989084 A 1.一种从马齿苋药材中分离出的四氢异喹啉类生物碱， 其特征在于， 分子式为： C10H12N2O3， 并且根据结构命名为1 ‑methyl‑2‑nitroso‑1,2,3,4‑tetrahydroi soquinoline ‑ 6,7‑diol， 其化学结构式如下： 。 2.如权利要求1所述的化 合物的提取分离方法， 其特 征在于， 具体步骤为： 步骤1： 取马齿苋干燥药材， 采用50%乙醇回流提取， 合并滤液直接加热浓缩， 放凉至室 温， 得药液备用； 步骤2： 将步骤1中浓缩液上硅胶柱， 用乙酸乙酯： 乙醇洗脱， 合并减压回收溶液至浸膏， 得到提取物； 步骤3： 将步骤2中所得提取物经聚酰胺柱分离， 采用水、 乙醇 ‑水洗脱， 将乙醇 ‑水洗脱 的显色部分合并蒸干后上ODS柱， 用甲醇 ‑水梯度洗脱， 经薄层色谱检测， 显 色， 将50%甲醇部 位部分合并， 减压浓 缩至干， 备用； 步骤4： 将步骤3中所得物再经SI中压柱层析分离， 以乙酸乙酯等度洗脱， 得到6个部位， 即洗脱得6个瓶， 每瓶200mL， 经薄层色谱进行检测， 将第一个部位50℃以下减压浓缩至干， 备用； 步骤5： 将步骤4中所得浓缩物经预处理的Sephadex  LH‑20， 以甲醇洗脱， 经薄层色谱进 行检测， 显色， 将显色的洗脱部位分别减压浓 缩至干， 得浓缩物备用； 步骤6： 将步骤5中所得物经HPLC分离制备， 以乙腈 ‑水‑0.1%甲酸作为流动相， 检测波长 为210 nm， 280nm， 制备 得到生物碱类化 合物， 归一法测定纯度均为90～ 99%。 3.如权利要求2所述的提取分离方法， 其特征在于， 所述ODS和SI的预处理过程为甲醇 浸泡过24小时， 上柱， 用甲醇洗 至滴入水中无混浊， 再以初始流动相平衡。 4.如权利要求2所述的提取分离方法， 其特征在于， 所述步骤2中硅胶层析分离依次用 体积比为5:1， 4:1， 3:1， 2:1的乙酸乙酯 ‑乙醇梯度洗脱。 5.如权利要求2所述的提取分离方法， 其特征在于， 所述步骤3中聚酰胺柱分离采用体 积比为1:10 0， 50:50， 70:30， 90:10的乙醇 ‑水梯度洗脱。 6.如权利要求2所述的提取分离方法， 其特征在于， 所述步骤3 中所用甲醇∶水梯度洗脱 中甲醇和水的体积比为5 0∶ 50， 70∶ 30， 90∶ 10； OD S柱的填料 粒度为20～40 μm。 7.如权利要求2所述的提取分离方法， 其特征在于， 所述步骤3 中洗脱条件为： 室温下加 压， 使流速1mL/mi n。 8.如权利要求2所述的提取分离方法， 其特征在于， 所述步骤4中所用乙酸乙酯洗脱程 序为等度洗脱， 所述 步骤5中所用甲醇洗脱程序为 等度洗脱。 9.如权利 要求2所述的提取分离方法， 其特征在于， 所述步骤6中所用乙腈 ‑0.1%甲酸体 积比为20： 80， 化 合物保留时间为5.415mi n。 10.如权利要求1所述的从马齿苋药材中分离出的四氢异喹啉类生物碱在制备抗炎、 抗 癌的药物或保健品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114989084 A 2马齿苋中一种四 氢异喹啉类生物碱的提取 分离方法及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及中药提取、 分离领域， 尤其涉及从马齿苋药材中提取、 分离和鉴别出的 四氢异喹啉类生物碱化 合物及其 提取分离方法。 背景技术 [0002]马齿苋 （Portulaca  oleracea  L. ） ， 又名长命菜、 马苋菜、 五行草， 为马齿苋科一年 生肉质草本植物。 马齿苋耐旱耐涝， 且耐光耐阴， 分布广泛， 资源丰富。 大多为野生， 很少有 人种植， 是我国卫生部规定的78种药食同源的野生植物之一。 2020版 《中华人民共和国药 典》 中收载马齿苋的干燥地上部 分入药， 具有清热解毒、 凉血止血、 止痢等功效， 用于热毒 血 痢、 痈肿疔 疮、 湿疹、 丹毒、 蛇虫咬伤、 便血、 痔血、 崩漏下 血等。 [0003]马齿苋现代药理学研究表明， 其具有抗炎止痛、 抗菌、 抗病毒、 降血压、 降血脂、 抗 氧化、 抗癌、 松弛骨骼肌和平滑肌、 调节免疫功能等作用。 研究表明马齿苋众多化学成分为 其多样的药理作用提供了物质基础， 马齿苋主要化学成分包括黄酮类、 香豆素类、 萜类、 甾 类、 有机酸类、 挥发油、 生物碱类、 氨基酸类、 各种色素类和矿物质类等。 其中有机酸类是马 齿苋中一类主要的化学成分， 目前已报道的有机酸类成分有4 ‑羟基‑5‑甲基呋喃 ‑3‑羧酸、 5‑羟甲基糠酸、 L ‑焦谷氨酸、 水杨酸、 香草酸、 对羟基苯甲酸、 硬脂酸、 棕榈酸、 油酸、 亚油酸 和亚麻酸 等。 [0004]目前从马齿苋中分离出的化学成分大多数是已知的， 且结构新颖性较低， 因此， 对 马齿苋中新化合物的开发和分离是亟 待需要的。 发明内容 [0005]针对上述问题， 本发明提供从马齿苋中提取一种四氢异 喹啉类生物碱化合物， 经 研究发现本发明的生物碱具有抗炎及抗癌的作用， 同时提供一种针对本发明新生物碱化合 物的简便、 快速、 环保、 纯度高的提取分离方法。 [0006]为了实现上述目的， 本发明提供了如下技 术方案。 [0007]本发明提供的四氢异喹啉类生物碱， 分子式为C10H12N2O3， 命名为1 ‑methyl‑2‑ nitroso‑1,2,3,4‑tetrahydroisoquinoline‑6,7‑diol。 化学结构式为： 。 [0008]为实现本发明的上述目的， 本发明还提供一种马齿苋中四氢异喹啉类生物碱化合 物的提取分离方法， 具体步骤为： 步骤1、 取马 齿苋干燥药材， 采用50%乙醇回流提取， 减压回收乙醇， 放凉至室温， 得 到药液备用； 步骤2、 将步骤1中浓缩液上硅胶柱， 用乙酸乙酯： 乙醇洗脱， 合并减压回收溶液至 浸膏， 得到提取物；说　明　书 1/6 页 3 CN 114989084 A 3