(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210687009.9 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 徐俊杰　叶郑涛　万喆　徐德锋　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 邱启旺 (51)Int.Cl. A61K 31/7048(2006.01) A61K 47/54(2017.01) G01N 33/50(2006.01) G01N 33/574(2006.01) A61P 35/00(2006.01)C07H 1/00(2006.01) C07H 17/08(2006.01) (54)发明名称 一种生物素-伊 维菌素偶联物及其制备方法 和应用 (57)摘要 本发明公开了一种生物素 ‑伊维菌素偶联物 及其制备方法和应用， 本发明以伊维菌素和生物 素作为原料， 合成了生物素 ‑伊维菌素的偶联物。 伊维菌素已被证明可以对许多肿瘤产生抑制和 治疗作用， 但作用靶点难以探索。 本发明利用生 物素可被链霉素亲和识别的特性， 将维菌素与生 物素偶联后则可被链霉素识别亲和。 后续通过下 来捕获实验、 蛋白质印迹实验检测伊维菌素所作 用的靶点分子。 本发明的提出为伊维菌素治疗肿 瘤靶点的探索提供了有效技 术手段。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 115300520 A 2022.11.08 CN 115300520 A 1.一种生物素 ‑伊维菌素偶联物， 其特 征在于， 结构式如下式所示： 2.一种权利要求1所述的生物素 ‑伊维菌素偶联物的制备方法， 其特征在于： 按照下述 步骤进行： 步骤A： 在反应瓶中加入生物素、 脱水剂、 缩合催化剂和有机溶剂， 冷却至0℃下， 搅拌 20‑40分钟； 步骤B： 在氮气 保护下向步骤A中加入伊维菌素， 在 ‑10至20℃下反应12 ‑32小时， 反应结 束后， 用氢氧化钠水溶液洗涤， 有机溶剂萃 取， 合并有机相， 用饱和氯化钠水溶液洗涤， 用硫 酸钠干燥后浓 缩得粗产品， 经硅胶柱色谱法洗脱， 得目标产品。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 所述的脱水剂为1 ‑(3‑二甲氨基丙 基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、 二环己基碳二亚胺(DCC)、 N,N ’ ‑二异丙基碳二亚胺 (DIC)中的一种或多种。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 所述的缩合催化剂为4 ‑二甲氨基吡啶 (DMAP)、 4 ‑吡咯烷基吡啶(4 ‑PPY)中的一种或多种。 5.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 所述的有机溶剂为二氯甲烷、 三氯甲 烷、 1， 2‑二氯乙烷， 乙腈， 乙酸乙酯、 乙酸甲酯、 1， 4 ‑二氧六环中的一种或多种。 6.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 生物素、 脱水剂、 缩合催化剂、 伊维菌 素的摩尔比为10:12 ‑15:0.5‑1:10‑11。 7.根据权利要求2所述的制备 方法， 其特 征在于： 生物素的浓度为0.1 1‑0.17mol/ml。 8.一种权利要求1所述的生物素 ‑伊维菌素偶联物的应用， 其特征在于： 包括作为抗肿 瘤药物和/或作为预测 和鉴定抗肿瘤作用靶点的试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115300520 A 2一种生物素 ‑伊维菌素偶联物及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术和医学领域， 具体地， 本发明涉及一种生物素 ‑伊维菌素偶联 物及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]伊维菌素于 1979年分离出来以后， 广 泛用于狗、 马和人的驱虫。 它是一种广 谱抗寄 生虫药物， 可以增加虫体的抑制性递质γ ‑氨基丁酸 〔GABA)的释放， 以及打开谷氨 酸控制的 Cl离子通道， 增强神经膜对Cl的通透性， 从而阻断神经信号的传递， 最终神经麻痹， 使肌肉 细胞失去收缩能力， 从而导致虫体死亡。 有效杀死像蠕虫， 线虫strongyloids， 蛔虫和盘尾 丝虫等寄生虫。 同时， 据研究表明， 伊维菌素在治疗肿瘤方面起到有效作用， 并且提示了新 的抗癌机制。 [0003]比如伊维菌素使激 酶PAK1失活并阻断人卵巢癌和NF2肿瘤细胞系的PAK1依赖性生 长(Ivermectin  inactivates  the kinase PAK1 and blocks the PAK1‑dependent   growth of human ovarian  cancer and NF2 tumor cell lines.Drug  Discov  Ther.2009Dec； 3(6):243 ‑6.PMID:22495656.) [0004]伊维菌素作为抗癌药物的前景乐观， 但其作用机制尚未完全明了， 同时在临床实 践中发现本药具有不可忽视的生物毒性。 本团队所构建的生物素 ‑伊维菌素偶联物， 能有效 利用链霉素 亲和磁珠检测伊维菌素直接结合 位点， 为研究作用机制提供新的手段。 发明内容 [0005]本发明针对伊维菌素的抗肿瘤特性， 将具有与链霉素高效亲和结合的生物素引入 主体结构中， 设计了一类偶联物， 并进 行了系统的生物活性评价和筛选， 提供了高抑癌活性 低毒性的化 合物。 [0006]本发明的第一个目的是提供一种生物素 ‑伊维菌素偶联物， 其化学结构式如下式 (图1)所示：说　明　书 1/5 页 3 CN 115300520 A 3