(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210679072.8 (22)申请日 2022.06.15 (71)申请人 复旦大学 地址 200433 上海市杨 浦区邯郸路2 20号 (72)发明人 卢大儒　陈红岩　何妍　 (74)专利代理 机构 上海远同律师事务所 313 07 专利代理师 胡洁 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61P 29/00(2006.01)A61P 31/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (54)发明名称 新型双特异性 抗体 (57)摘要 本发明涉及新型抗体结构的双特性抗体、 编 码所述双特性抗体的多核苷酸、 包含 所述多核苷 酸的载体、 包含所述多核苷酸或载体的宿主细 胞、 包含所述双特性抗体的免疫缀合物、 包含所 述双特性抗体或 免疫缀合物的药物组合物、 以及 它们在疾病的免疫治疗、 预防、 诊断上的用途； 本 发明的双特性抗体包含至少两个抗原结合位点， 其中一个可以为免疫球蛋白Fab的抗原结合位 点， 另一个抗原结合位点是由两个相互配合的结 构域共同形成， 它们不直接相连， 而是通过连接 子分别串联于免疫球蛋白Fab同一重链或同一轻 链的N端和C端， 由Fab重链或轻链可变区与恒定 区形成的空间角度介导在空间上相互交叉， 从而 使得两个结构域相互作用形成所述另一个抗原 结合位点。 权利要求书2页 说明书39页 序列表99页 附图12页 CN 115160440 A 2022.10.11 CN 115160440 A 1.一种分离的双特异性抗体， 其包含至少两条多肽链， 所述两条多肽链能够配对形成 第一抗原结合 位点和第二 抗原结合 位点； 其中， 所述两条多肽链中， 一条多肽链包含VLb ‑CL， 另一条多肽链包含VHa ‑L1‑VHb‑CH1‑L2‑ VLa或者VLa ‑L1‑VHb‑CH1‑L2‑VHa； 或者， 所述两条多肽链中， 一条多肽链包含VHb ‑CH1， 另一条多肽链包含VHa ‑L1‑VLb‑CL‑L2‑ VLa或者VLa ‑L1‑VLb‑CL‑L2‑VHa； 其中， VHa是所述第一抗原结合位点的重链可变结构域， VHb是所述第二抗原结合位点 的重链可变结构域； CH1是重链的第一恒定结构域， VLa是所述第一抗原结合位点的轻链可 变结构域， VLb 是所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域， CL是轻链恒定结构域， L1和L2 分别为连接子序列， 并且VHa与VLa配对形成所述第一抗原结合位点， VHb与VLb配对形成结 合所述第二 抗原结合 位点。 2.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其中， 所述第 一或第二抗原结合位点识别肿瘤 抗原； 优选地， 所述第一和第二抗原结合位点中的一个识别肿瘤抗原， 另一个识别免疫细胞 相关靶点； 更优选地， 第二抗原结合位点识别肿瘤抗原， 第一抗原结合位点识别免疫细胞相 关靶点。 3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体， 其中， 所述VHa与VLa分别来源于抗CD16抗 体、 抗CD32抗体、 抗CD64抗体、 抗CD3抗体、 抗NKG2D抗体、 抗H er2抗体或抗41BB抗体的重链可 变结构域与轻链可变结构域。 4.根据权利 要求1‑3中任一项所述的双特异性抗体， 其中， 所述VHb与VLb分别来源于抗 GPC3抗体、 抗CD2 0抗体、 抗CD19抗体、 抗BCMA抗体、 抗CD12 3抗体、 抗Her2抗体或抗EpCA M抗体 的重链可变结构域与轻链可变结构域。 5.根据权利 要求1‑4中任一项所述的双特异性抗体， 其中， 所述VHa或VHb分别包含选自 SEQ ID NO:29、 30、 31、 32的序列， VLa或VLb分别包 含选自SEQ  ID NO:33、 34、 35、 36的序列。 6.根据权利 要求1‑5中任一项所述的双特异性抗体， 其中， 所述连接子L1与L2分别选自 包含甘氨酸(G)和丝氨 酸(S)残基的连接子序列； 优选地， 所述连接子L 1与L2长度各自为约1 至约50个氨基酸； 优选为约1至约15个氨基酸； 更优选地， 所述连接子L1与L2分别选自 (GGGGS)n， (GGGGS)nG， (GGGGS)n， (GGGGSGG)n， 其中n＝1 ‑6； 再优选地， 所述连接子L1与L2分 别选自SEQ  ID NO:24、 SEQ  ID NO:25、 SEQ  ID NO:26、 SEQ  ID NO:27、 SEQ  ID NO:28。 7.根据权利要求1 ‑6中任一项所述的双特异性 抗体， 其中， 所述双特异性 抗体包含Fc。 8.如权利要求7所述的双特异性抗体， 其中， 所述Fc来自人免疫球蛋白IgG分子或者其 突变体， 优选来自人免疫球蛋白IgG2或者 其突变体。 9.根据权利要求8所述的双特异性 抗体， 其中， 所述两条多肽链中， 一条多肽链包含VLb ‑CL， 另一条多肽链包含VHa ‑L1‑VHb‑CH1‑L2‑ VLa‑H‑Fc或者VLa ‑L1‑VHb‑CH1‑L2‑VHa‑H‑Fc； 或者， 所述两条多肽链中， 一条多肽链包含VHb ‑CH1‑H‑Fc， 另一条多肽链包含VHa ‑L1‑VLb‑ CL‑L2‑VLa或者VLa ‑L1‑VLb‑CL‑L2‑VHa； 其中， H是 人IgG的铰链区， Fc是 人IgG的Fc或者 其突变体。 10.根据权利要求1 ‑9中任一项所述的双特异性抗体， 其中， 所述双特异性抗体包含人 IgG的CH3结构域或其 突变体。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115160440 A 211.根据权利要求1 ‑10中任一项所述的双特异性抗体， 其中， 所述双特异性抗体包含人 IgG的铰链区或其 突变体。 12.根据权利要求1 ‑11中任一项所述的双特异性抗体， 其中， 所述双特异性抗体包含第 三个抗原结合 域， 所述第三个抗原结合 域包括但不限于Fab、 scFv、 VH H。 13.编码如权利要求1 ‑12任一项所述的双特异性 抗体的核酸序列。 14.包含权利要求13所述核酸序列的载体， 优选地， 所述载体是表达载体。 15.包含权利要求13所述核酸序列或权利要求14所述载体的宿主细胞， 优选地所述宿 主细胞是哺乳动物细胞； 或者， 所述宿主细胞 是原核细胞。 16.产生如权利要求1 ‑12任一项所述的双特异性抗体的方法， 包括步骤(i)在适于表达 所述双特异性抗体的条件 下培养权利要求 15的宿主细胞， 和(ii)从所述宿 主细胞或所述培 养基回收所述双特异性 抗体。 17.免疫缀合物， 其包含权利要求1 ‑12中任一项所述的双特异性抗体和与所述双特异 性抗体缀合的一个或多个异源分子； 优选地， 所述异源分子是细胞毒素。 18.药物组合物， 包含如权利要求1 ‑12任一项所述的双特异性抗体或如权利要求17所 述免疫缀 合物， 以及药用载体； 优选的， 所述药物组合物还 包含至少一种其 他有效成分。 19.如权利要求1 ‑12任一项所述的双特异性抗体、 如权利要求18所述的药物组合物、 如 权利要求17所述的免疫缀合物在制备用于治疗和/或预防受试者的疾病的药物或用作疾病 诊断的工具中的用途。 20.根据权利要求19所述的用途， 其中， 所述受试者是人类， 所述疾病选自肿瘤、 自身免 疫病、 急性或慢性炎性疾病 、 感染性疾病。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115160440 A 3