(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210681591.8 (22)申请日 2022.06.15 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:C2021 157 2021.0 6.24 (71)申请人 同济大学苏州研究院 地址 215100 江苏省苏州市吴中区木渎镇 金枫路198号 (72)发明人 蒋明　郭佳　尹衍新　于丽华　 付敏　毛玉婷　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 孙光远 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01)C12N 15/13(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种改良c-Met中和抗体及其制备方法和应 用 (57)摘要 本发明公开了一种改良c ‑Met中和抗体及其 制备方法和应用。 属于生物制药技术领域。 本发 明通过抗体的随机突变库和细胞展示技术， 对具 有中和活性的激动型c ‑Met抗体进行结构和活性 优化， 获得高亲和低激动活性的抗体， 并保持亲 本抗体的中和及内化活性， 提高c ‑Met抗体的成 药性。 获得的突变抗体2G5纯化效果好， IC50为 41.53ng/ml， 与c ‑Met胞外区结合能力强。 阻断 ELISA实验结果显示， 突变抗体2G5 具有显著的中 和活性， 在A549细胞中， 抗体引起显著的内化效 应。 突变抗体2G5不能激活起A 549细胞c ‑Met信号 通路， 不能引起HUV EC细胞增殖和A 549细胞迁移 。 获得了成药性更高的突变型抗体 。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图3页 CN 115073603 A 2022.09.20 CN 115073603 A 1.一种改良c ‑Met中和抗体， 其特征在于， 以抗体3E1D7的氨基酸序列为基础， 重链CDR3 的氨基酸序列替换为SEQ  ID NO.2所示的序列。 2.权利要求1所述的一种改良c ‑Met中和抗体的基因， 其特征在于， 编码重链CDR3氨基 酸的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 3.一种包 含权利要求2所述基因的重组载体。 4.一种能够 分泌如权利要求1或2所述的抗体或包含权利要求3所述重组载体的重组细 胞。 5.如权利要求 4所述的重组细胞， 其特 征在于， 保藏编号 为CCTCC NO:C2021 157。 6.权利要求1所述 一种改良c ‑Met中和抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。 7.如权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤为非小细胞肺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115073603 A 2一种改良c ‑Met中和抗体及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物制药技术领域， 更具体的说是涉及一种改良c ‑Met中和抗体及其 制备方法和应用。 背景技术 [0002]人间质上皮转化因子(c ‑mesenchymal  epithelial  transition  factor,c ‑Met) 是位于细胞表面的一类酪氨酸激酶受体， 肝细胞生长因子(Hepatocyte  growth factor, HGF)是其天然配体， 可诱导其二聚化及胞内酪氨 酸磷酸化。 C ‑Met作为一种标志物 不仅广泛 存在于多种肿 瘤组织， HGF/c ‑Met信号通路还参与了肿 瘤和癌症的增殖、 存活、 侵袭和血管 生成等多种病理过程。 近年来， 基于c ‑Met抗体的肿 瘤靶向治疗手段得到了广泛的研究， 其 策略包括： 1)采用裸抗 或基因工程抗体作为中和抗体对HGF/c ‑Met通路进行拮抗； 2)采用抗 体药物偶联(antibodydrugconjugate， ADC)策略， 开发高特异、 高毒性的细胞毒素； 3)通过 双特异抗体募集淋巴细胞对c ‑Met高表达肿 瘤细胞进行杀伤。 目前， 艾伯维公司的ADC药物 ABBV‑399进展较快， 对非小细胞肺癌有很好的抗肿瘤效果， 而ADC药物中的抗体ABT ‑700就 是一种以c ‑Met为靶点的中和抗体， 且具有很好的结合和内化特性。 [0003]c‑Met具有复杂的结构和激活机制， 在c ‑Met抗体研发的过程中， 表位的差异会带 来抗体功能的差别。 抗体的二价结构可能通过非HGF依赖的途径直接引起c ‑Met二聚化， 激 活下游促肿瘤的信号通路。 此类激动型抗体不仅无法直接用于拮抗性药物的开 发， 在ADC药 物中也存在潜在的二次致瘤风险。 [0004]虽然， 通过基因工程手段构建单链或单臂抗体可以解决其激动活性的问题， 但仍 然存在半衰期缩短和纯化困难等 技术问题。 [0005]因此， 如何提供一种改良c ‑Met中和抗体是本领域 技术人员亟需解决的问题。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明提供了一种改良c ‑Met中和抗体及其制备 方法和应用。 [0007]本发明基于一株具有中和活性的激动型c ‑Met抗体3E 1D7， 通过随机突变和细胞展 示技术， 从重链补体决定区3(complementarity  determiningregion  3， CDR3)随机突变抗 体库中筛选出具有高亲和低激动活性， 并且保留中和及内化能力的突变抗体。 主要针对c ‑ Met抗体3E1D7的激动活性进行优化， 通过CDR3中的氨基酸进行随机突变， 希望通过其侧链 基团的重拍， 降低或消除激动活性， 并且尽量保持其中和以及内吞等活性。 利用抗原融合蛋 白进行结合能力的筛选后， 成功获得突变抗体2G5。 通过对c ‑Met磷酸化、 肿瘤细胞迁移和内 皮细胞增殖实验明确其激动活性被显著降低， 并且通过中和实验明确其对HGF的结合具有 显著的抑制作用， 更为关键的， 该突变型抗体仍然保持了亲本抗体的内吞 活性。 表明， c ‑Met 突变型抗体2G5不管 是作为中和型抗体还是ADC药物前体均比亲本抗体具有更高的成药性。 [0008]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0009]保藏信息如下： 培养物名称(分类命名)： 人胚胎肾细胞293T ‑2G5， 保藏编号： CCTCC  说　明　书 1/6 页 3 CN 115073603 A 3