(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210677167.6 (22)申请日 2022.06.15 (71)申请人 南京林业大 学 地址 210037 江苏省南京市玄武区龙蟠路 159号 (72)发明人 张瑜　杨冰燕　王飞　李迅　 董亦馨　 (74)专利代理 机构 南京禹为知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 32272 专利代理师 康伟 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 31/4745(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种负载SN-38的铁蛋白纳米粒及其制备方 法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种负载SN ‑38的铁蛋白纳米 粒及其制备方法和应用， 负载SN ‑38的铁蛋白纳 米粒包括， 负载物， 所述负载物为7 ‑乙基‑10‑羟 基喜树碱； 以及， 载体， 所述载体为脯氨酸、 丙氨 酸、 丝氨酸组成的含有10个氨基酸残基的PAS10 序列修饰的铁蛋白。 本发明提高了SN ‑38的水溶 性、 稳定性， 并有效的延长药物在血浆中的半衰 期； 此外， 纳米粒可 以通过对肿瘤细胞转铁蛋白 受体1的靶向性特异性地递送药物， 最大程度的 发挥SN‑38的抗癌效果， 为后续药物靶向肿瘤细 胞治疗提供了非常好的载体模型， 具有很好的应 用前景。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图4页 CN 114886873 A 2022.08.12 CN 114886873 A 1.一种负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒， 其特 征在于： 包括， 负载物， 所述负载物为7 ‑乙基‑10‑羟基喜树碱； 以及， 载体， 所述载体为脯氨酸、 丙氨酸、 丝氨酸组成的含有10个氨基酸残基的PAS10序列修 饰的铁蛋白； 其中， 所述PAS10的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示； 所述PAS10序列修饰的铁蛋白的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示。 2.如权利要求1所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒， 其特征在于： 所述铁蛋白为人重链 铁蛋白。 3.如权利 要求1或2所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒， 其特征在于： 所述负载物与所述 载体的摩尔比为10 0～200： 1。 4.如权利要求1～3中任一项所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在 于： 将含负载物的溶液加入到含载体的溶液中， 涡旋后孵育， 离心过滤得上清液， 并去除游 离的负载物。 5.如权利要求4所述的负载SN ‑38的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在 于： 所述含负载物的溶 液， 为7‑乙基‑10‑羟基喜树碱的乙醇溶 液。 6.如权利 要求4或5所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在于： 所述含 载体的溶液， 为PAS10序列修饰的铁蛋白的GFC溶液， 所述GFC溶液的pH为6.8～7.0， NaCl浓 度为50mM， NaH2PO4浓度为25～75mM 。 7.如权利要求6所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在于： 所述孵育 为50～60℃恒温水浴锅中以5 0～150rpm的转速 孵育30～40min。 8.如权利 要求4、 5、 7中任一项所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在 于： 所述离心， 离心转速80 00～12000rpm， 离心时间5～10mi n。 9.如权利要求8所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒的制备方法， 其特征在于： 所述去除 游离的负载物， 采用透析袋透析， 所述透析袋的截留值为6～8kDa， 透析时间为24～48h， 透 析温度为 4℃， 且每8小时换一次PBS透析 液。 10.如权利要求1～3中任一项所述的负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒在制备抗肿瘤药物中 的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114886873 A 2一种负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒 及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于抗肿瘤技术领域， 具体涉及到一种负载SN ‑38的铁蛋白纳米粒及其制 备方法和应用。 背景技术 [0002]喜树碱是从喜树皮和果实中提取的抗肿瘤 植物药,对胃肠道肿瘤和头颈癌等有良 好的疗效， 但会引发骨髓抑制、 呕吐、 腹泻和严重出血等不良反应限制了其在临床的进一步 应用。 7‑乙基‑10羟基喜树碱(SN ‑38)属于喜树碱类药物， 是已上市药物伊立替康(CPT ‑11) 的活性代谢产物， 能抑制DNA拓扑异构酶， 抑制DNA合 成， 并造成频繁的DNA单链断裂， 具有广 谱的细胞毒性。 与伊立替康相比， SN ‑38对多种癌细胞的功效高约100～1000倍， 并且对包括 结直肠癌， 肺癌， 肝癌、 宫颈癌和卵巢癌在内的多种肿瘤具有抑制作用。 由于SN ‑38存在E‑内 酯环闭环结构而极难溶于水， 目前临床使用的SN ‑38是经过碱化开环后溶于水的羧酸盐注 射液， 但是其质量不稳定、 开环后活性降低、 体内半衰期短、 代谢较快等缺陷严重影响疗效。 目前SN‑38的纳米递送系统是研 究较为广泛的药物制剂， 既能解决SN ‑38的溶解性问题， 又 能保护药物的内酯环结构， 同时还能减少药物用量， 降低毒副作用和增强疗效。 主要包括 SN‑38聚合物纳米粒、 SN ‑38聚合物胶 束、 SN‑38脂质纳米粒等。 尽管SN ‑38纳米药物的研究很 多， 但与多 数难溶性抗肿瘤药物类似， SN ‑38纳米递送系统仍面临着缺乏靶向性、 稳定性差、 生物相容 性低以及可能存在长期毒性 等关键问题和挑战。 [0003]蛋白质笼具有良好的稳定性、 生物相容性和生物降解性， 已广泛应用于药物传递 和疫苗开 发。 其中， 铁蛋白是由2 4个蛋白亚基自组装形成纳米中空笼状结构， 该纳米笼水溶 性好、 生物相容性 强， 体内稳定性佳， 尺寸均一， 且该铁蛋白本身 具有靶向性， 可与肿瘤细胞 中过量表达的转铁蛋白受体1(TfR1)特异性结合。 然而， 野生型的人重链铁蛋白作为纳米载 药系统依旧存在血 液滞留时间较短和对药物包封率较低两大主 要缺点。 发明内容 [0004]本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施 例。 在本部 分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部 分、 说明书摘要和发明名称的目的模糊， 而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。 [0005]鉴于上述和/或现有技 术中SN‑38在临床应用中存在的问题， 提出了 本发明。 [0006]本发明的其中一个目的是提供一种负载SN ‑38的N端修饰PAS10的铁蛋白纳米粒， 有望实现在通过转铁蛋白受体1(TfR1)靶向肿瘤细胞递送药物的同时， 有效地延长药物在 血浆中的半衰期， 为后续选择 药物递送载体提供了非常好的模型， 具有很好的应用前 景。 [0007]为解决上述技术问题， 本发明提供了如下技术方案： 一种负载SN ‑38的N端修饰 PAS10的铁蛋白纳米粒， 包括， [0008]负载物， 所述负载物为7 ‑乙基‑10‑羟基喜树碱； 以及， [0009]载体， 所述载体为脯氨酸、 丙氨酸、 丝氨酸组成的含有10个氨基酸残基的PAS10序说　明　书 1/6 页 3 CN 114886873 A 3