ICS 67 X 04 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5189.5—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的 测定 2020 - 06 - 28 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 07 - 28 实施 发 布 DB13/T 5189.5—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分： ——第 1 部分：亚硝酸盐的测定； ——第 2 部分：二氧化硫的测定； ——第 3 部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇 5 种有机溶剂残留的测定； ——第 4 部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定； ——第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定； ——第 6 部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定； ——第 7 部分：天然番茄红中苯并[α ]芘的测定； ——第 8 部分：辣椒提取物中苏丹红的测定； ——第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定； ——第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定； ——第 11 部分：叶黄素中苯的测定； ——第 12 部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。 本部分为DB13/T 5189的第5部分。 本标准由河北省市场监督管理局提出。 本标准起草单位：河北省食品检验研究院、晨光生物科技集团股份有限公司、石家庄海关技术中心、 清河县食品药品检验检测中心。 本标准主要起草人：王红、张强、张晓芳、匡林鹤、牛瑜琦、王敬、田俊生。 I DB13/T 5189.5—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的 1 范围 本部分规定了万寿菊提取物中对乙氧基苯胺的测定方法。 本部分适用于万寿菊提取物中对乙氧基苯胺的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 万寿菊提取物的对乙氧基苯胺经乙醇超声提取，取上清液过膜，液相色谱-串联质谱仪检测，外标 法定量。 4 试剂或材料 除另有规定外，水为GB/T 6682规定的一级水，试剂均为色谱纯。 4.1 试剂 4.1.1 丙酮（C3H6O）：色谱纯。 4.1.2 乙醇（C2H6O）：色谱纯。 4.2 标准品 4.2.1 对乙氧基苯胺标准品（C8H11NO，CAS 号：156-43-4）：纯度大于 99.0%，-18℃冷冻储藏。 4.3 标准溶液配制 4.3.1 标准储备液：准确称取对乙氧基苯胺标准品 50 mg（精确至 0.1 mg），用乙腈定容至 50 mL， 配制成 1 mg/mL 的储备液，于-18 ℃冰箱中冷冻保存。 4.3.2 标准中间液：准确移取适量标准储备液，用乙腈配制成 100 ng/mL 的标准中间液。 4.3.3 标准使用液：准确吸取标准中间液 0 mL、0.2 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 于 7 个 100 mL 容量瓶中，用空白样品提取液定容，此标准系列的浓度为 0 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、 2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL。 1 DB13/T 5189.5—2020 5 仪器与设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。 5.2 电子天平：感量 0.001g、0.0001 g。 5.3 漩涡混匀器。 5.4 冷冻离心机：转速不低于 10000 r/min 。 5.5 超声波清洗机。 6 试验步骤 6.1 试样制备 准确称取万寿菊提取物样品0.5 g（精确至0.001 g）于50 mL 试管中，加入5 mL丙酮，超声使试样 溶解，加入20 mL乙醇，超声提取20min，10000 r/min 4 ℃冷冻离心3 min。取上清液至25 mL容量瓶 中，用乙醇定容至刻度。过0.22 μm滤膜，待测。 6.2 色谱质谱参考条件 液相色谱条件和质谱条件。 6.2.1 液相色谱条件 a) b) c) d) e) 色谱柱：HILIC 色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.7 μm），或性能相当者； 流动相：乙腈：0.1%甲酸水=80：20； 流速：0.4 mL/min； 柱温：40 ℃； 进样量：2 μL。 6.2.2 质谱条件 a) b) c) d) e) f) g) 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多级反应监测（MRM）； 电喷雾电压：5500 V； 离子源温度：550 ℃； 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或根据仪器选择其他合适气体； 定性离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞能量见表 1。 表 1 对乙氧基苯胺的质谱参数 目标物质名称 定量离子对(m/z) 对乙氧基苯胺 138.0/109.8 6.3 液相色谱-串联质谱测定 2 定性离子对(m/z) 去簇电压/V 碰撞能量/V 138.0/109.8 60 20 138.0/92.9 60 25 DB13/T 5189.5—2020 6.3.1 定性测定 按照上述条件测定样品和建立标准工作曲线，如果样品中化合物质量色谱峰的保留时间（参见附录 A）与标准溶液的保留时间相比在允许偏差±2.5 %之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液 相比，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的目标化合物。 表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >20 >20～50 >10～20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 6.3.2 定量测定 在仪器最佳工作条件下，对基质标准工作溶液进样，以标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，标 准溶液中被测组分浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。 6.4 空白试验 空白试验，除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 7 试验结果 万寿菊提取物中对乙氧基苯胺含量X按式（1）计算。 X  (c  c 0 )  V ………………………………………………(1) m 式中： X——万寿菊提取物对乙氧基苯胺的含量，单位为微克每千克（μg/kg）； c——从标准工作曲线查出的试样溶液中对乙氧基苯胺的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； c0——从标准工作曲线查出的空白试验中对乙氧基苯胺的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V——试样最终稀释体积，单位为毫升（mL）； m——试样质量，单位为克（g）。 计算结果保留至小数点后一位。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 9 检出限和定量限 检出限为5 μg/kg，定量限为17 μg/kg。 3 DB13/T 5189.5—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 对乙氧基苯胺的多反应监测（MRM）色谱图 A.1 对乙氧基苯胺的多反应监测（MRM）色谱图，见图A.1。 图A.1 对乙氧基苯胺的多反应监测（MRM）色谱图 _________________________________ 4