ICS 67.250 X 08 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5155—2019 食品金属包装内壁涂层中三聚氰胺和双酚 A 迁移量的测定 2019 - 12 - 27 发布 河北省市场监督管理局 2020 - 01 - 28 实施 发 布 DB13/T 5155—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北省市场监督管理局提出。 本标准起草单位：河北省食品检验研究院、河北养元智汇饮品股份有限公司、清华大学、中国人 民大学。 本标准主要起草人：第一法主要起草人为范素芳、张岩、李强、俞婧、张雷雷、夏军霞、孟志娟、 李岩；第二法主要起草人为龙峰、施汉昌、范素芳、张岩、夏军霞。 I DB13/T 5155—2019 食品金属包装内壁涂层中三聚氰胺和双酚 A 迁移量的测定 1 范围 本标准规定了食品金属包装内壁涂层中三聚氰胺和双酚A迁移量的测定方法。 本标准适用于食品金属包装内壁涂层中三聚氰胺和双酚A迁移量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5009.156 食品安全国家标准 食品接触材料及制品迁移实验预处理方法通则 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB 31604.1 食品安全国家标准 食品接触材料及制品迁移试验通则 第一法 气相色谱-串联质谱法 3 原理 食品金属包装内壁涂层采用食品模拟物浸泡，三聚氰胺和双酚A迁移到浸泡液中，取一定量的模拟 物浸泡液经提取、净化、衍生后进气相色谱-质谱仪测定，溶液中三聚氰胺和双酚A通过毛细管色谱柱 分离，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。试验中容器及转移器 具应避免使用塑料材质。 4.1 试剂 4.1.1 甲醇：色谱纯。 4.1.2 乙腈：色谱纯。 4.1.3 吡啶：色谱纯。 4.1.4 衍生化试剂：N,O-三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）（99+1，V/V）， 色谱纯。 4.1.5 植物油：符合 GB 5009.156 的要求。 4.2 试剂配制 1 DB13/T 5155—2019 4.2.1 水基、酸性、酒精类、油基食品模拟物的配制：按 GB 5009.156 操作。 4.3 标准品 4.3.1 三聚氰胺标准品（C3H6N6，CAS 号：108-78-1），纯度≥99.0 %，或经国家认证并授予标准物 质证书的标准品。 4.3.2 双酚 A 标准品（C15H16O2，CAS 号：80-05-7），纯度≥99.0 %，或经国家认证并授予标准物质 证书的标准品。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 三聚氰胺标准储备液（1 mg/mL）：准确称取 0.0500 g（精确至 0.1 mg）三聚氰胺标准物质到 50 mL 容量瓶，加入 40 mL 水，在水浴（温度为 70 ℃）中超声 15 min～30 min，使三聚氰胺能够充 分溶解，冷却至室温后用水定容，将溶液转移至棕色试剂瓶中， 4 ℃～20 ℃条件下保存，6 个月内 浓度保持稳定。 4.4.2 双酚 A 标准储备液（1 mg/mL）：准确称取 0.0500 g（精确至 0.1 mg）双酚 A 标准物质到 50 mL 容量瓶，用甲醇溶解、定容至刻度，摇匀，静置，将溶液转移至棕色试剂瓶中，0 ℃～4 ℃条件下保 存，6 个月内浓度保持稳定。 4.4.3 三聚氰胺和双酚 A 混合标准工作液（10 μ g/mL）：精密量取 1 mg/mL 的三聚氰胺标准储备液 和双酚 A 标准储备液各 1.0 mL，于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，静置。将溶液转移 至棕色玻璃瓶中，0 ℃～4 ℃保存，有效期 1 个月。 4.5 材料 4.5.1 有机相微孔滤膜：0.22 μ m。 5 仪器与设备 5.1 气相色谱-三重四级杆质谱联用仪：配有电子轰击源（EI）。 5.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 mg。 5.3 涡旋振荡器。 5.4 氮吹仪:可控温。 6 分析步骤 6.1 食品模拟物试液制备 6.1.1 食品模拟物浸泡液的制备 按照GB 5009.156及GB 31604.1的要求，选择对应的食品模拟物以及迁移实验条件进行迁移试验， 可以得到食品模拟物浸泡液。如果食品模拟物浸泡液不能马上进行下一步试验，应将食品模拟物浸泡 液于0 ℃～4 ℃冰箱中避光保存。 在食品模拟物浸泡液温度与室温一致后，进行下一步试液的制备。 2 DB13/T 5155—2019 6.1.2 食品模拟物试液的制备 6.1.2.1 水性、酸性、酒精类食品模拟物试液 准确称取迁移试验后得到的水性、酸性、酒精类食品模拟物浸泡液2 mL，待用。 6.1.2.2 油性食品模拟物试液 分别称取5 g（精确至0.01 g）油基食品模拟物至具塞玻璃试管中， 加入5 mL正己烷，混匀，加入 5 mL甲醇-水混合溶液（1+1，V/V），涡旋振荡2 min，静置分层。吸取下层水溶液2 mL，待用。 6.1.3 空白试液的制备 未与食品金属包装内壁涂层接触的水性、酸性、酒精类食品模拟物按照6.1.2.1操作，油性食品模 拟物按照6.1.2.2操作，过滤后所得为空白试液。 6.2 提取 取食品模拟物标准工作溶液、食品模拟物试液、空白试液2 mL于15 mL离心管中，准确加入4 mL 乙腈，剧烈振荡提取10 min，4000 r/min离心10 min，吸取清液4 mL于15 mL离心管中，待净化。 6.3 净化 将待净化的清液置于-20 ℃低温箱中冷冻30 min至分层，准确吸取上层清液2.0 mL，于70 ℃水浴 中氮气吹干，待衍生化。 6.4 衍生化 取上述氮气吹干残留物，加入500 μ L的吡啶和100 μ L衍生化试剂（4.1.4） ，混匀, 置70 ℃±5 ℃ 烘箱中，衍生反应30 min, 待测。 6.5 仪器参考条件 6.5.1 色谱条件 色谱参考条件如下： a) 色谱柱：HP-5MS 毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm，0.25 µm)，或相当者； b) 载气：氦气，流速 1.2 mL/min； c) 进样口温度：250 ℃； d) 进样量：1.0 μL，不分流进样，溶剂延迟 4 min； e) 程序升温： 初始柱温 75 ℃， 保持 1 min， 以 30 ℃/min 升至 220 ℃，再以 5 ℃/min 升至 280 ℃， 保持 2 min。 6.5.2 质谱条件 质谱参考条件如下： a) 电离方式：电子轰击电离（EI)； b) 电离能量：70 eV； c) 离子源温度：230 ℃。 d) 扫描方式：多反应监测模式 (multi-reaction monitoring，MRM)，分析物的质谱参数见表 1。 三聚氰胺和双酚 A 总离子流图见附录 A。 3 DB13/T 5155—2019 表 1 分析物的质谱参数 分析物名称 母离子（m/z) 定量离子（m/z) 碰撞能（V） 子离子（m/z) 碰撞能（V） 双酚 A 356.8 73.0 40 191.0 20 三聚氰胺 342.0 327.0 15 171.0 15 6.6 食品模拟物试样溶液的测定 6.6.1 食品模拟物标准工作溶液的制备 6.6.1.1 水性、酸性、酒精类食品模拟物标准工作溶液 分别吸取三聚氰胺和双酚A混合标准工作溶液（4.4.3）0 mL、0.01 mL 、0.025 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.25 mL于50 mL容量瓶中，分别用水性食品模拟物定容，其中三聚氰胺和双酚A的浓度分 别为0 μ g/L、2 μ g/ L、5 μ g/ L、10 μ g/ L、20 μ g/ L、40 μ g/ L、50 μ g/L。采用相同方式， 分别用酸性、酒精类食品模拟物配制同样浓度系列的三聚氰胺和双酚A标准工作溶液。 6.6.1.2 油性食品模拟物标准工作溶液 分别称取5 g（精确至0.01 g）油基食品模拟物至7个具塞玻璃试管中，分别移取0 μ L、1μ L 、3 μ L、5 μ L、10 μ L、20 μ L、25 μ L三聚氰胺和双酚A混合标准工作溶液（4.4.3），得到浓度分别为 0 μ g/kg、2 μ g/kg、6 μ g/kg、10 μ g/kg、20 μ g/kg、40 μ g/kg、50 μ g/kg的标准工作溶液。分别 在每个试管中再加入5 mL正己烷，混匀，加入5 mL甲醇-水混合溶液（1+1，V/V），涡旋振荡2 min， 静置分层。吸取下层水溶液2 mL，待用。 6.6.2 定性测定 按照仪器参考条件(6.5)测定食品模拟物试样溶液和标准工作溶液，如果食品模拟物试样溶液的质 量色谱峰保留时间与标准溶液在±2.5 %范围内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合基质标准溶 液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的待测物。 表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度，k/% k≥50 20<k<50 10<k≤20 k≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 6.6.3 标准曲线的制作 以食品模拟标准工作溶液中三聚氰胺和双酚A浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作溶 液，得到线性方程。 6.6.4 定量测定 将试样溶液注入气相色谱-质谱联用仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中三聚氰胺和双 酚A的浓度。 6.7 空白试验 空白试验系指除不加试样外，采用完全相同的分析步骤、试剂和用量，进行平行操作。 4 DB13/T 5155—2019 7 分析结果的表述 7.1 食品模拟物试液中三聚氰胺、双酚 A 浓度的计算 由标准曲线得到食品模拟物中三聚氰胺和双酚A的浓度，分以下两种情况计算： a) 水性、酸性、酒精类食品模拟物试液中三聚氰胺、双酚 A 浓度按式(1)计算。 …………………………………………………（1） 式中： Xi --试样中三聚氰胺、双酚A的含量，单位为毫克每升（ mg/L）； ρ --上机样液中三聚氰胺、双酚A的含量，单位为毫克每升（mg/L）； V --定容体积，单位为毫升（mL）； K --稀释倍数； v --样品体积，单位为毫升（mL）。 b) 油性食品模拟物试液中三聚氰胺、双酚 A 浓度按式(2)计算。 ………………………………………………………（2） 式中： Xi --样品中三聚氰胺、双酚A的含量，单位为毫