ICS _11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 539—2002 副结核病诊断技术 Diagnostic techniques for paratuberculosis 行业标准信息服务平 2002-08-27 发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 539—2002 前言 副结核病(paratuberculosisJohne's disease）是由副结核分枝杆菌（mycobacteria paratuberculosis） 引起的以反当动物为主的一种慢性、消耗性传染病，其临床症状以持续性腹泻和慢性消瘦为特征。该病 广泛地分布于世界各国，引起较大的经济损失。世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimal Health（英），OfficeIntentionaldesEpizootic（法），OIE］将其划为B类传染病，我国也将其划为I类传 染病。 副结核病潜伏期长，有的终生感染而不表现出临床症状。至目前为止，尚无治疗该病的有效方法，防 治该病的主要方法是监测、隔离和淘汰病畜。目前该病的检疫方法有细菌学检查和免疫学检查。后者主 要是包括皮内变态反应、琼脂扩散试验、间接红细胞凝集试验、淋巴细胞转化试验、补体结合反应和酶联 免疫吸附试验（ELISA）。本标准提出的补体结合反应、皮内变态反应和ELISA方法与OIE推荐的可选 择方法基本致。 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：吉林农业大学、吉林省兽医研究所。 本标准起草人：何昭阳、吴玉环、顾万钧、钱爱东。 行业标准信息服务平台 NY/T 539—2002 副结核病诊断技术 1范围 本标准规定了副结核病的诊断技术。 本标准的细菌学检查、皮内变态反应、补体结合反应适用于牛、羊、鹿等动物的副结核病诊断； ELISA检疫方法适用于牛的副结核病诊断。 2细菌学检查 2.1材料准备 0.5%氢氧化钠液、水浴糟、离心机等。 抗酸染色法试剂：配制及染色方法见附录A。 2.2操作方法 取待检粪样（尽可能取带有粘液或血丝的粪便)15g～20g，加约3倍量的0.5%氢氧化钠液，混匀， 4000r/min离心30min，去上清，用沉淀涂片。也可以直肠刮取物、病变肠段粘膜直接涂片。火焰固定， 抗酸染色（见附录A)后镜检。 2.3结果判定 发现在细胞内有被染成红色、成丛排列的短杆菌即为细菌检查阳性（十），否则判为细菌检查阴性 (一)。 3皮内变态反应试验 3.1材料准备 3.1.1器材 游标卡尺、灭菌的1mL注射器及针头、75%酒精棉、记录本等。 3.1.2变应原 副结核分枝杆菌提纯蛋白衍生物（副结核PPD)或禽分枝杆菌提纯蛋白衍生物（禽结核PPD）。 3.2操作方法 3.2.1将被检动物编号，在颈侧中三分之一处中部的健康皮肤处剪毛，直径约10cm，将注射部位的皮 肤用手捏起，以卡尺测量皮肤皱褶厚度并记录。局部消毒。 3.2.2将变应原以灭菌生理盐水稀释至0.5mg/mL，与皮肤呈15°～20°的角度进行皮内注射。注射后 注射部位应呈现绿豆至黄豆大小的小包。无论动物种类及大小一律皮内注射0.1mL。如注至皮下或溢 出，应于离原注射点8cm以远处补注一针，并在记录中加以说明。 3.2.3羊在尾根无毛的皱褶部进行皮内注射。 3.3结果判定 注射72h观察反应，检查注射部位有无热、肿、痛等炎性反应，并以卡尺测量注射部位的皮肤皱褶 厚度。 3.3.1判定标准如下： a）变态反应阳性（+）：局部有炎性反应，皮厚差≥4mm。 1