(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210546485.9 (22)申请日 2022.05.19 (71)申请人 苏州大学 地址 215000 江苏省苏州市吴中区石湖西 路188号 (72)发明人 彭浩　卢莹　刘洋　 (74)专利代理 机构 苏州市中南伟业知识产权代 理事务所(普通 合伙) 32257 专利代理师 王玉仙 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种NPPB基因DNA羟甲基化标志物、 引物及 其应用 (57)摘要 本发明涉及一种NPPB基因DNA羟甲基化标志 物、 引物及其应用， 该NPPB基因DNA羟甲基化标志 物包括NPPB基因启动子区的DNA羟甲基化位点 Chr1:11919160(CpG1)、 Chr1:11919144(CpG2)、 Chr1:11919133(CpG5)和Chr1:11919011(CpG10) 中的至少一个， 其羟甲基化程度指示脑卒中发病 风险。 本发明提供的NPPB基因DNA羟甲基化标志 物可用于 预测脑卒中发病风险， 为预防和治疗脑 卒中的提供了新的方向， 同时， 基于 上述DNA羟甲 基化位点提供了一种脑卒中特异性DNA羟甲基化 标志物组合， 进行基于多个DNA羟甲基化位点的 检测克服了单个DNA羟甲基化信号低的问题， 提 高了检测灵敏度、 特异性和准确率。 权利要求书2页 说明书9页 序列表1页 附图20页 CN 114807356 A 2022.07.29 CN 114807356 A 1.一种预测脑卒中发病风 险的DNA羟甲基化标志物， 其特征在于： 所述DNA羟甲基化标 志物包括NPPB基因启动子区的DNA羟甲基化位点Chr1:11919160、 Chr1:11919144、 Chr1: 11919133和Chr1:11919011中的至少一个。 2.根据权利 要求1所述的DNA羟甲基化标志物， 其特征在于： 所述DNA羟甲基化标志物包 括NPPB基因启动子区的DNA甲基化位点的组合； 所述DNA甲基化位点的组合为以下组合(1) ‑ (10)中的任意 一种： (1)Chr1:11919160和Chr1:11919144， (2)Chr1:11919160和Chr1:11919133， (3)Chr1:11919160和Chr1:11919011， (4)Chr1:11919144和Chr1:11919133， (5)Chr1:11919144和Chr1:11919011， (6)Chr1:11919133和Chr1:11919011， (7)Chr1:11919160、 Chr1:11919144和Chr1:11919133， (8)Chr1:11919160、 Chr1:11919144和Chr1:11919011， (9)Chr1:11919160、 Chr1:11919133和Chr1:11919011， (10)Chr1:11919144、 Chr1:11919133和Chr1:11919011， (11)Chr1:11919160、 Chr1:11919144、 Chr1:11919133和Chr1:11919011。 3.根据权利要求1所述的DNA羟甲基化标志物， 其特征在于， 检测位点羟甲基化水平 的 方法包括以下步骤： (1)提取DNA样本， 用T4β ‑葡糖基转移酶和APOBE C3A酶处理所述DNA样本； (2)扩增步骤(1)处 理后的样品， 得到扩增产物； (3)对步骤(2)的扩增产物进行转录和酶切， 得到转录和酶切产物； (4)对步骤(3)的转录和酶切产物进行检测， 获取样品序列中位点Chr1:11919160、 Chr1:11919144、 Chr1:11919133或Chr1:11919011的羟甲基化水平。 4.根据权利 要求1所述的DNA羟甲基化标志物， 其特征在于： 扩增所述DNA羟甲基化标志 物的上游引物如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物如SEQ  ID NO.2所示。 5.权利要求1 ‑4任一项所述的DNA羟甲基化标志物在制备预测脑卒中发病风险的试剂 盒中的应用。 6.扩增权利要求1 ‑4任一项所述的DNA羟甲基化标志物的引物在制备预测脑卒中发病 风险的试剂盒中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于： 扩增所述DNA羟甲基化标志物 的上游引物 如SEQ ID NO.1所示， 下游引物如SEQ  ID NO.2所示。 8.一种预测脑卒中发病风险的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中包含： 扩增NPPB基因 启动子区的DNA羟甲基化位点Chr1:11919160、 Chr1:11919144、 Chr1:11919133和Chr1: 11919011中至少一个位 点的引物。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒中还包含检测Chr1: 11919160、 Chr1:11919144、 Chr1:11919133和Chr1:11919 011中至少一个位点羟甲基化水平 的试剂。 10.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于： 上游引 物如SEQ ID NO.1所示， 下游引权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114807356 A 2物如SEQ ID NO.2所示。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114807356 A 3