(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210546425.7 (22)申请日 2022.05.19 (71)申请人 苏州大学 地址 215000 江苏省苏州市吴中区石湖西 路188号 (72)发明人 彭浩　陈立楠　刘洋　 (74)专利代理 机构 苏州市中南伟业知识产权代 理事务所(普通 合伙) 32257 专利代理师 王玉仙 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) (54)发明名称 一种评估脑 卒中发病风险的DNA甲基化标志 物、 引物及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种评估脑 卒中发病风险的DNA 甲基化标志物、 引物及其应用， DNA甲基化标志物 包括CORIN基因启动子区的DNA甲基化位点Chr4: 47840038、 Chr4:4 7839941和Chr4:47839933中的 至少一个位点， 并基于该DNA甲基化标志物提供 了一种评估脑 卒中发病风险的试剂盒。 本发明提 供的CORIN基因DNA甲基化标志物可用于预测脑 卒中发病风险， 作为脑卒中高危人群的筛查指 标， 也可以作为预防和控制脑卒中的干预靶点。 本发明不仅有助于阐释Corin作为心房利钠肽的 调控者参与脑卒中发病的分子机制， 也将为 CORIN基因甲基化作为预防和控制脑卒中的药物 靶点提供重要的流行病学证据。 权利要求书1页 说明书12页 序列表1页 附图9页 CN 114807355 A 2022.07.29 CN 114807355 A 1.一种用于评估脑卒中发病风险的DNA甲基化标志物， 其特征在于： 所述DNA甲基化标 志物包括CORIN基因启动子区的以下DNA甲基化位点中的至少一个： Chr4:47840038、 Chr4: 47839941、 Chr4:47839 933。 2.根据权利要求1所述的DNA甲基化标志物， 其特征在于： 所述DNA甲基化标志物包括 CORIN基因启动子区的DNA甲基化位点的组合； 所述DNA甲基化位点的组合为以下组合(1) ‑ (4)中的任意 一种： (1)Chr4:47840 038和Chr4:47839 941， (2)Chr4:47840 038和Chr4:47839 933， (3)Chr4:47839 941和Chr4:47839 933， (4)Chr4:47840 038、 Chr4:47839 941和Chr4:47839 933。 3.根据权利 要求1所述的DNA甲基化标志物， 其特征在于： 扩增所述DNA甲基化标志物的 上游引物如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物如SEQ  ID NO.2所示。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的DNA甲基化标志物在制备评估脑卒中发病风险的试剂盒 中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于： 所述评估脑卒中发病风险的试剂 盒中包括 扩增CORIN基因启动子区的DNA甲基化位点Chr4:47840038、 Chr4:47839941和Chr4: 47839933中至少一个位 点的引物对。 6.根据权利 要求5所述的应用， 其特征在于： 上游引物如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物如 SEQ ID NO.2所示。 7.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于， 所述的应用包括以下步骤： (1)提取DNA样本， 对DNA样本进行亚硫酸盐处 理； (2)用所述引物对 扩增步骤(1)经亚硫酸盐处 理后的样品， 得到扩增产物； (3)对步骤(2)的扩增产物进行转录和酶切， 得到转录和酶切产物； (4)对步骤(3)的转录和酶切产物进行检测， 获取Chr4:47840038、 Chr4:47839941或 Chr4:47839 933位点的甲基化水平。 8.扩增权利要求1 ‑3任一项所述的DNA甲基化标志物 的引物对在制备评估脑卒中发病 风险的试剂盒中的应用， 其特征在于： 上游引物如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物如SEQ  ID  NO.2所示。 9.一种评估脑卒中发病风险的试剂盒， 其特征在于： 所述评估脑卒中发病风险的试剂 盒中包含： 分别或同时扩增CORIN基因启动子区的DNA甲基化位点Chr4:47840038、 Chr4: 47839941和Chr4:47839933的引物， 以及检测Chr4:47840038、 Chr4:47839941和Chr4: 47839933中至少一个位 点甲基化水平的试剂。 10.根据权利要求9所述的试剂盒， 其特征在于： 上游引 物如SEQ ID NO.1所示， 下游引 物如SEQ ID NO.2所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807355 A 2一种评估 脑卒中发病风险的DNA甲 基化标志物、 引物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 尤其涉及一种评估脑卒中发病风险的  DNA甲基化 标志物、 引物及其应用。 背景技术 [0002]脑卒中是一类突发性的脑组织血液循环障碍疾病， 目前已经成为全球范围内影响 人类健康的首要疾病之一， 2019年全球脑卒中患病达到1.01亿人， 约有655万人死于脑卒 中， 脑卒中已经成为全球第二大死因。 因此如何有效地防治脑卒中是公共卫生领域面临的 重大挑战， 发现更多的潜在危险因素与治疗 靶点并促进其临床转 化刻不容缓。 [0003]利钠肽系统(Natriuretic  Peptide system,NPs)的主要成员包括心房利钠肽 (ANP)和B型利钠肽(BNP)， 通过利钠、 利尿和血管舒张在维持血压方面发挥重要作用。 已有 的研究表明， 利钠肽水平的增加与脑卒中的发病风险有关。 Cor in是一种在心肌细胞中高表 达的II型跨膜丝氨酸蛋白酶， 是ANP  的主要生理激活因子， 也能够激活BNP。 因此， Corin作 为NPs的上游调节因子可能参与脑 卒中的发病机制。 基础研究和流行病学研究提示Corin对 心血管的影响。 例如， 在 扩张型心肌病小鼠中使Cor in蛋白过表达可改善心功能并延缓心力 衰竭的进展。 相反， CORIN基因敲除小鼠则发生高血压和心肌肥厚。 在人类中， Corin蛋白的 编码基因CORIN的多态性与 心衰、 心肌肥厚和高血压的易 感性相关。 一些小 型横断面临床 研 究发现， 可溶性Cor in 与心血管疾病相关， 如房颤， 心力衰竭， 心肌梗 死。 本实验室先前的研 究发现， 较低的血清Corin水平与脑卒中的患病率以及不良脑 卒中预后显著相关。 上述研究 提示了Cor in蛋白可能与脑 卒中的发病机制有关， Cor in蛋白可能成为脑 卒中防治的治疗靶 点或候选药物。 然而， 在人血浆中未发现Cor in蛋白的抑制剂， 降低了其临床转化的安全性。 因此， 有必要更好地了解Corin  与脑卒中之间关联的分子机制。 表观遗传因子作为联系基 因组和动态环境的界面， 可能影响基因的表达和功 能， 从而具有作为 我们需要的分子机制 的潜力。 DNA甲基化作为最常见和目前研究最为深入的表观遗传修饰， 已被认 为通过影响相 关基因的表达参与了疾病的病理过程。 例如， 总体DNA甲基化水平与脑卒中有关， 以及脑卒 中相关基因启动子的甲基化， 如ABCG1，  MMP2， ERα， 血栓调节蛋白和TP53在一些小样 本病例 对照研究中被证明与脑 卒中有关。 但目前尚未见关于C ORIN基因DNA甲基化与脑 卒中的研究 报道， 也没有报道一种合 适的甲基化标志 物可作为预防和控制脑卒中的干预靶点。 发明内容 [0004]为解决上述技术问题， 本 发明通过对CORIN基因D NA甲基化与脑卒中表型相关性的 研究， 提供一种与脑卒中相关的DNA甲基化标志物， 为预测脑卒中的发病风险、 脑卒中高危 人群的筛查 提供依据， 也有望作为预防和控制脑卒中的干预靶点。 [0005]本发明的第一个目的是提供一种用于评估脑卒中发病风险的DNA甲基化标志物， 所述的DNA甲基化标志物包括CORIN基因启动子区的DNA  甲基化位点Chr4:47840038、 Chr4: 47839941和Chr4:47839 933中的至少一个位 点。说　明　书 1/12 页 3 CN 114807355 A 3