(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210542853.2 (22)申请日 2022.05.18 (71)申请人 云南省农业科 学院花卉研究所 地址 650000 云南省昆明市盘龙区北京路 2238号云南省农业科学院科研 办公楼 4楼 (72)发明人 李帆　金春莲　刘斌　王继华　 孙丹　杨春梅　莫锡君　 (74)专利代理 机构 北京知呱 呱知识产权代理有 限公司 1 1577 专利代理师 朱芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01)G16B 25/20(2019.01) (54)发明名称 覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系 及应用 (57)摘要 本发明实施例公开了一种覆盖满天星全基 因组的InDel 分子标记体系及应用。 所述InDel 分 子标记体系包括191个标记位点所对应的引物 对， 其引物序列如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID NO.382 所示。 本发明基于下一代测序技术开发出191个 基因组多态性的InDel标记， 为满天星遗传多样 性分析、 品种鉴定等方面增加了分子标记种类和 数量， 有助于满天星品种的检测及为满天星遗传 和分子育种等方面奠定 了基础。 权利要求书1页 说明书64页 序列表59页 附图2页 CN 114807422 A 2022.07.29 CN 114807422 A 1.覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系， 其特征在于， 所述InDel分子标记体系 包括191个标记位 点所对应的引物对， 其引物序列如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID NO.382所示。 2.权利要求1所述的覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系在满天星遗传图谱构 建中的应用。 3.权利要求1所述的覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系在满天星遗传多样性 分析中的应用。 4.权利要求1所述的覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系在满天星分子育种中 的应用。 5.权利要求1所述的覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系在鉴定满天星品种中 的应用。 6.一种鉴定满天星品种的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)获取待测样本的基因 组DNA； (2)利用权利要求1所述的引物对所述基因 组DNA进行PCR扩增； (3)对PCR扩增产物进行琼脂 凝胶电泳检测； (4)确定待测样本品种。 7.根据权利 要求6所述的鉴定满天星品种的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增程序为： 95 ℃预变性5mi n； 95℃变性3 0s， 56℃退火3 0s， 72℃延伸3 0s， 共29个循环； 72℃延伸7mi n。 8.根据权利 要求6所述的鉴定满天星品种的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增体系每10 μ L包括： 7.3 μL  ddH2O； 1μL 10×Taq buffer； 0.8 μL  dNTP； 浓度为10 μM的前引物和后引物各 0.2 μL； 0.1 μL  taq酶； 0.4 μL基因 组DNA。 9.根据权利要求6所述的鉴定满天星品种的方法， 其特征在于， 所述电泳检测的琼脂凝 胶浓度为3.0％ ‑3.5％。 10.根据权利要求6所述的鉴定满天星品种的方法， 其特征在于， 所述电泳检测的压力 为100V， 时间为1.0 h‑1.5h。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807422 A 2覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系及应用 技术领域 [0001]本发明实施例涉及分子生物学技术领域， 具体涉及一种覆盖满天星全基因组的 InDel分子标记体系及应用。 背景技术 [0002]分子标记已被广泛的应用于观赏物种的遗传和进化研究中， 如种质鉴定、 遗传作 图、 多样性分析和分子标记辅助育种选择等。 在分子标记的发展历史中， 基于DNA的标记系 统如RFLP(限制性片段长度多态性)已逐渐被基于PCR的标记如RAPD(随机扩增多态 性DNA)、 SSR(简单序列重复)、 SNP(单核苷酸多态性)和INDEL(插入/缺失)所淘汰。 下一代测序(NGS) 技术的发展促进了越来越多的观赏植物基因组测序， 从而促进了蔷薇和菊花等花卉物种中 SNP和INDEL标记的识别和开发。 SNP和InDel标记由于其丰富的多态性、 全基因组分布、 共显 性和成本效益， 已成为植物研究中最常用的分子标记。 一些研究报告了应用SNP和KASP技术 进行遗传作图和基因分型， 并测量拟南芥和其他作物的遗传多样性。 利用显著相关的分子 标记对观赏植物进行QTL定位和候选基因鉴定也很重要。 最近， 利用分子标记定位克隆技 术， 在石竹中发现了重瓣花相关基因AP2 L。 因此， 建立观 赏植物的遗传标记体系是进 行观赏 植物研究的关键 。 [0003]满天星(2n＝34)是满天星属的多年生草本灌木， 包括大约150种一年生、 两年生和 多年生植物。 它起源于亚洲和欧洲的温带地区， 在不同地区显示出多种形态类型。 它通常用 作插花的填充物， 同时也是全球市场上重要的切花。 然而， 现有技术中对满天星的基因研究 很少， 这与其重要的市场地位不一致。 有研究报道使用分子标记对满天星属物种和杂种之 间的遗传多样性进行初步评估， 但是没有关于覆盖满天星的整个基因组的遗传图谱或标记 系统的任何信息， 这在很大程度上阻碍了其分子生物学的科学研究， 以及 商业品种的鉴定。 因此， 分子标记系统的构建对 满天星至关重要。 发明内容 [0004]为此， 本发明实施例提供一种覆盖满天星全基因 组的InDel分子标记体系及应用。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下技 术方案： [0006]本发明实施例的第一方面， 提供一种覆盖满天星全基因组的InDel分子标记体系， 所述InDel分子标记体系包括191个标记位点所对应的引物对， 其引物序列如SEQ  ID NO.1 ～SEQ ID NO.382所示。 [0007]本发明实施例的第二方面， 提供如上所述的覆盖满天星全基因组的InDel分子标 记体系在满天星遗传图谱构建中的应用。 [0008]本发明实施例的第三方面， 提供如上所述的覆盖满天星全基因组的InDel分子标 记体系在满天星遗传多样性分析中的应用。 [0009]本发明实施例的第四方面， 提供如上所述的覆盖满天星全基因组的InDel分子标 记体系在满天星分子 育种中的应用。说　明　书 1/64 页 3 CN 114807422 A 3