(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210542510.6 (22)申请日 2022.05.18 (71)申请人 南昌大学第一附属医院 地址 330006 江西省南昌市永外正 街17号 (72)发明人 刘洋　许恒毅　王峥峥　魏丹丹　 程南燕　肖芳斌　徐倩　苏康太　 张伟　 (51)Int.Cl. C12N 1/02(2006.01) C12N 13/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/14(2006.01) C12N 15/11(2006.01) B82Y 30/00(2011.01) B82Y 5/00(2011.01) C12R 1/445(2006.01) (54)发明名称 一种快速富集分离耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌的试剂盒及制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种快速富集分离耐甲氧西 林金黄色葡萄球菌的试剂盒及制备方法。 属于生 物技术领域。 包括： 试剂盒盖、 Bueffer  B放置槽、 试剂盒外壳、 低吸附管放置槽、 海绵、 Bueffer  A 放置槽和Bueffer  C放置槽； 试剂盒表面由试剂 盒外壳和试剂盒盖构成。 针对现有技术需复杂的 前处理步骤， 费时费力等缺陷， 本发明提供的试 剂盒和检测方法捕获 效率高、 简便、 分离时间短， 可低梯度磁场下从复杂基质中分离耐甲氧西林 金黄色葡萄球 菌， 达到便携式使用的目的。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 114806882 A 2022.07.29 CN 114806882 A 1.一种快速富集分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂 盒， 其特征在于， 包括： 试剂 盒 盖、 Bueffer  B放置槽、 试剂盒外壳、 低吸附管放置槽、 海绵、 Bueffer  A放置槽和Bueffer  C 放置槽； 试剂盒表面由试剂盒外壳和试剂盒盖构成； 试剂盒内设置有海绵， 所述Bueffer  B 放置槽、 Bueffer  A放置槽和Bueffer  C放置槽水平设置于海绵上， 低吸附管放置槽平行于 Bueffer B放置槽、 Bueffer A放置槽和Buef fer C放置槽设置于海绵上。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 包括： Buffer  A、 Buffer  B、 Buffer  C， 所 述Buffer  A成分为氨苄青霉素 ‑磁性纳米粒子， 所述氨苄青霉素 ‑磁性纳米粒子的制备方 法： 1)将羧基化磁珠用无菌PBS洗涤后重悬于无菌 MES溶液中， 得到磁性纳米粒子溶 液； 2)分别将EDC和NHSS分别溶解于无菌MES溶液， 得到EDC溶液、 NHSS溶液， 然后加入至步 骤1)得到的磁性纳米粒子溶液， 活化， 将活化后的磁性纳米粒子用PBS洗涤重悬， 得到活化 后的磁性纳米粒子溶 液； 3)将氨苄青霉素溶解于无菌MES溶液， 得到氨苄青霉素溶液， 氨苄青霉素溶液加入至步 骤2)得到的活化后的磁性纳米粒子溶液， 反应， 将反应产物用PBS溶液洗涤重悬， 得到氨苄 青霉素修饰的磁性纳米粒子复合物。 3.根据权利 要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 步骤1)所述羧基化磁珠、 无菌MES溶液的 质量体积比为1∶ 1mg/mL。 4.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 步骤2)所述EDC、 无菌MES溶液的质量体 积比为0.29∶29mg/ μl； 所述NHSS、 无菌MES溶液的质量体积比为0.33∶33mg/ μl； 所述活化的 温度： 37℃， 时间0.5～ 2h。 5.根据权利 要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 步骤3)所述氨苄青霉素、 无菌MES溶液的 质量体积比为 4.5∶ 450mg/ μl； 所述反应的温度37℃， 时间3～6 h。 6.根据权利 要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述羧基化磁珠平均粒径为180nm； 所述 氨苄青霉素分子量 为371.39。 7.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述Buffer  B成分为0.01mM  PBS溶液， pH 6.0； Buffer C成分为0.01mM  PBS溶液， pH 7.4。 8.一种非诊断治疗检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法， 其特征在于， 使用权利要 求1～7任一所述的试剂盒。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将100 μL  Buffer A、 800 μL Buffer B加入至1mL含细菌的样本中， 以180rpm 的转速 37℃孵育15min， 插入磁力架分离4～7mi n， 分离产物后， 去上清液； (2)用Buffer  B洗涤， 并将所得产物用Buffer  C重悬为50～100μL， 即得耐甲氧西林金 黄色葡萄球菌 ‑氨苄青霉素‑磁性纳米粒子复合物和上清液； (3)分别将上清液和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ‑氨苄青霉素 ‑磁性纳米粒子复合物稀 释一定倍数， 点板计数， 并按照公式进行富 集效率(C E)计算： CE＝[1‑S/(S+C)] ×100％ 其中， C为分离液中的菌落数， S为上清液中的菌落数。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114806882 A 2一种快速富集分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂盒及制 备方法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物技术领域， 更具体的说是涉及一种快速富集分离耐甲氧西林金黄 色葡萄球菌的试剂盒及制备 方法。 背景技术 [0002]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌， 感染多发生于免疫 缺陷者， 大面积烧伤， 大手术后患者， 长期住院及老年患者， MRSA极易导致感染的流行和暴 发。 MRSA传播主要通过医护人员的手， 在患者、 医护人员、 患者间播散， 另外， 衣物、 敷料等物 品可携带MRSA， 促进MRSA在院内的流行， 病人一旦 感染或携带MRSA， 该菌可存在于患者身上 达数月之久 。 [0003]目前针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌所开发出的一系列检测方法， 由于样本基质 的影响及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的浓度较低， 从而导致检测灵敏度较低， 严重影响了 对耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌的监测。 [0004]因此， 如何实现医院样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的快速筛查是本领域技术 人员亟需解决的问题。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明提供了一种快速富集分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂盒 及制备方法。 针对现有技术需复杂的前处理步骤， 费时费力等缺陷， 本发明捕获效率高、 简 便、 分离时间短， 可低梯度磁场下从复杂基质中分离耐甲氧西林金黄 色葡萄球菌， 达到便携 式使用的目的。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0007]一种快速富集分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂盒， 其特征在于， 包括： 试剂 盒盖、 Bueffer  B放置槽、 试剂盒外壳、 低吸附管放置槽、 海绵、 Bueffer  A放置槽和Bueffer   C放置槽； 试剂盒表 面由试剂盒外壳和试剂盒盖构成； 试剂盒内设置有海绵， Bu effer B放置 槽、 Bueffer  A放置槽和Bueffer  C放置槽水平设置于海绵上， 低吸附管放置槽平行于 Bueffer B放置槽、 Bueffer A放置槽和Buef fer C放置槽设置于海绵上。 [0008]优选的： 包括： Buffer  A、 Buffer  B、 Buffer  C， Buffer  A成分为氨苄青霉素 ‑磁性 纳米粒子， 氨苄青 霉素‑磁性纳米粒子的制备 方法： [0009]1)将羧基化磁珠用无菌PBS洗涤后重悬于无菌MES溶液中， 得到磁性纳米粒子溶 液； [0010]2)分别将EDC和NHSS分别 溶解于无菌MES溶液， 得到EDC溶液、 NHSS溶液， 然后加入 至步骤1)得到的磁性纳米粒子溶液， 活化， 将活化后的磁性纳米粒子用PBS洗涤重悬， 得到 活化后的磁性纳米粒子溶 液； [0011]3)将氨苄青霉素溶解于无菌MES溶液， 得到氨苄青霉素溶液， 氨苄青霉素溶液加入说　明　书 1/5 页 3 CN 114806882 A 3