(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210538219.1 (22)申请日 2022.05.17 (71)申请人 山东省农业科 学院 地址 250100 山东省济南市历城区工业北 路202号 (72)发明人 王兴军　赵术珍　 纳维德·艾哈迈德　厉广辉　 赵传志　田锐铮　侯蕾　潘教文　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 刘芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于SSR标记构建芦 笋分子身份 证的方法 (57)摘要 本发明公开了基于SSR标记构建芦笋分子身 份证的方法， 涉及植物品种鉴别领域。 本发明提 供了一种用于鉴别芦笋品种的分子标记组合， 还 提供了一种用于鉴别芦笋品种的引物组合。 本发 明还提供了一种芦笋品种分子身份证的构建方 法， 包括： 采集不同品种的芦笋， 利用上述的引物 组合对不同品种的芦笋的DNA进行PCR扩增， 再对 扩增产物进行电泳检测， 根据电泳检测结果构建 所述芦笋分子身份证。 本发明的方法能够快速的 构建芦笋品种分子身份证或指纹图谱， 克服了以 往形态、 生理鉴定的技 术缺陷。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图1页 CN 114807421 A 2022.07.29 CN 114807421 A 1.一种用于鉴别芦笋品种的分子标记组合， 其特征在于， 所述分子标记包括Asp ‑ SSR6C4、 Asp ‑SSR2C6和Asp ‑SSR3C10， 所述Asp ‑SSR6C4通过如SEQ  ID NO： 1‑2所示引物对扩 增得到， 所述Asp ‑SSR2C6通过如SEQ  ID NO： 3‑4所示引物对扩增得到， 所述Asp ‑SSR3C10通 过如SEQ ID NO： 5‑6所示引物对 扩增得到 。 2.一种用于鉴别芦笋的引物组合， 其特征在于， 包括3对引物对， 所述引物对的核苷酸 序列分别如SEQ  ID NO： 1‑6所示。 3.一种用于鉴别芦 笋品种的试剂盒， 其特 征在于， 包 含权利要求2所示的引物组合。 4.一种芦笋品种分子身份证的构建方法， 其特征在于， 包括： 采集不同品种的芦笋， 利 用权利要求2所述的引物组合对不同品种的芦笋的DNA进行PCR扩增， 再对扩增产物进行电 泳检测， 根据电泳检测结果构建所述芦 笋分子身份 证。 5.根据权利 要求4所述的构 建方法， 其特征在于， 所述芦笋的品种包括： UC157、 格兰德、 沃克卓越、 沃克先锋、 阿特拉斯、 阿波罗、 千禧、 阿根特伊、 紫色激情、 冠军、 硕丰、 京绿1、 京绿 2、 京绿3、 京绿4、 京科1、 京科2、 京科3、 浙丰1、 东芝1、 东芝2、 航育1、 航育 6和浙丰801。 6.根据权利要求4所述的构建方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的体系为： 2xNG  PCR  Master Mix 10 μL， 正向引物0.2 μg， 反向引物0.2 μg， DNA模板50 ‑100ng， 加入ddH2O至总体积 20 μL。 7.根据权利要求4所述的构建方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的程序为： 94℃预变性 2min； 94℃变性3 0s； 50‑56℃退火3 0s， 72℃延伸3 0s， 30个循环； 72℃延伸5mi n。 8.一种如权利要求1所述的分子标记组合、 权利要求2所述的引物组合或权利要求3所 述的试剂盒在获取芦 笋分子身份 证中的应用。 9.一种如权利要求1所述的分子标记组合、 权利要求2所述的引物组合或权利要求3所 述的试剂盒在鉴别芦 笋品种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807421 A 2基于SSR标记构建芦笋分子身份证的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及植物品种鉴别领域， 特别是涉及基于SSR标记构建芦笋分子身份证 的 方法。 背景技术 [0002]芦笋(Asparagus  officinalis  L.)， 又称石刁柏， 为多年生草本植物， 具有极高的 营养、 保健与药用价值。 据联合国粮食及农业组织企业统计数据库统计， 2014 ‑2020年期间 全球和我国芦笋种植面积及产量均呈逐年增长态势。 2020年， 我国芦笋的种植面积150万 亩。 芦笋产业 发展存在一个限制性问题是种子 混杂严重。 因芦笋种子价格高， 导致一些非F1 杂交种、 劣质种子、 淘汰种子在市场上泛滥， 仅靠种子外形很难辨别好坏。 由于芦笋是多年 生植物， 播种后2 ‑3年才能采笋， 从产量上确定其好坏， 因此， 一旦种子质量差， 严重影响笋 农的利益。 如何鉴别芦笋的真伪、 品种纯度成为一个亟待解决 的问题。 分子标记可直接反映 个体DNA水平上的差异， 不受环境与季节的影响， 过程简便且结果可靠， 可有效弥补依据表 型性状进 行品种鉴定的不足。 众多分子标记中SSR标记因其数量众多、 分布广泛、 共显性、 重 复性好、 通用性高， 使其成为构建品种分子身份证的较理想的分子标记技术。 目前， 芦笋全 基因组测序已经完成， 但未见利用SSR建立芦笋分子身份证的报道。 以此方法构建芦笋品种 的分子身份 证， 对种子产业 化和品种的知识产权保护有重大意 义。 发明内容 [0003]本发明的目的是提供基于SSR标记构建芦笋分子身份证 的方法， 以解决上述现有 技术存在的问题， 本发明的方法能够快速的构建芦笋品种分子身份证或指纹图谱， 克服了 以往形态、 生理鉴定的技 术缺陷。 [0004]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0005]本发明提供一种用于鉴别芦笋品种的分子标记组合， 所述分子标记包括Asp ‑ SSR6C4、 Asp ‑SSR2C6和Asp ‑SSR3C10， 所述Asp ‑SSR6C4通过如SEQ  ID NO： 1‑2所示引物对扩 增得到， 所述Asp ‑SSR2C6通过如SEQ  ID NO： 3‑4所示引物对扩增得到， 所述Asp ‑SSR3C10通 过如SEQ ID NO： 5‑6所示引物对 扩增得到 。 [0006]本发明还提供一种用于鉴别芦笋品种的引物组合， 包括3对引物对， 所述引物对的 核苷酸序列分别如SEQ  ID NO： 1‑6所示。 [0007]本发明还提供一种用于鉴别芦 笋品种的试剂盒， 包 含上述的引物组合。 [0008]本发明还提供一种芦笋品种分子身份证的构建方法， 包括： 采集不同品种的芦笋， 利用上述的引物组合对不同品种的芦笋的DNA进行PCR扩增， 再对扩增产物进行电泳检测， 根据电泳检测结果构建所述芦 笋分子身份 证。 [0009]进一步地， 所述芦笋的品种包括： UC157、 格兰德、 沃克卓越、 沃克先锋、 阿特拉斯、 阿波罗、 千禧、 阿根特伊、 紫色激情、 冠军、 硕丰、 京绿1、 京绿2、 京绿3、 京绿4、 京科1、 京科2、 京科3、 浙丰1、 东芝1、 东芝2、 航育1、 航育 6和浙丰801。说　明　书 1/6 页 3 CN 114807421 A 3