(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210538110.8 (22)申请日 2022.05.17 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 申请人 镇江江之源渔业科技有限公司 (72)发明人 高泽霞　徐子升　罗丽飞　万世明　 许柯昕　滕金梦　顾树信　 (74)专利代理 机构 武汉宇晨专利事务所(普通 合伙) 42001 专利代理师 龚莹莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定刀鲚遗传性别的SNP标记及其引物 和应用 (57)摘要 本发明涉及SNP标记领域， 具体公开了一种 鉴定刀鲚遗传性别的SNP标记及其引物和应用。 本发明通过2b ‑RAD测序方法成功筛选到刀鲚性 别特异性SNP标记， 该标记位于刀鲚LG18染色体 上的第121862 57位碱基。 针对该SNP标记， 设计引 物利用常规PCR扩增和Sanger测序能够准确快速 鉴定出刀鲚的遗传性别。 与之前解剖检测、 性腺 切片观察相比， 该技术具有准确、 简单、 快速， 对 鱼体伤害少等优点， 解决了刀鲚性别鉴定的难 题， 将有助于大规模培育刀鲚全雌体系， 为刀鲚 繁养殖业的发展， 提供有力依据。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图1页 CN 114752664 A 2022.07.15 CN 114752664 A 1.检测刀鲚LG18染色体上的第12186257位碱基的试剂在鉴定刀鲚性别中的应用。 2.检测刀鲚LG18染色体上的第12186257位碱基的试剂在刀鲚育种中的应用。 3.根据权利要求1所述的应用， 所述的试剂为引物。 4.根据权利要求2所述的应用， 所述的引物为： Forward primer： gcaca aagttgcactgt tcc Reverse primer： atgcaca acacggatcttgc。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114752664 A 2一种鉴定刀鲚遗传性别的SNP标记及其引物和应用 技术领域 [0001]本发明涉及S NP标记领域， 尤其涉及一种鉴定刀鲚遗传性别的S NP标记及其引物和 应用。 背景技术 [0002]刀鲚(Coilia  nasus)学名长颌鲚， 隶属脊索动物门、 硬骨鱼纲、 鲱形目、 鳀科、 鲚 属， 是我国长江中一种中小型溯河洄游型鱼类， 具有较高的营养价值和经济价值， 与鲥鱼 (Tenualosa  reevesii)、 暗纹东方鲀(Takifugu  fasciatus)并称为 “长江三鲜 ”。 刀鲚具有 显著的雌雄生长二态性， 同时期的刀鲚雌鱼生长速度显著快于雄鱼， 且达到成熟时的雌鱼 个体也比雄鱼个体大。 因此， 开 发刀鲚全雌育种及 全雌养殖技术具有重要的产业意义。 但在 性腺发育成熟之前， 很难从外部形态上区分其雌鱼和 雄鱼， 胚胎和幼体阶段雌雄鱼形态上 几乎没有区别， 这给刀鲚全雌育种技术的开发带来了很大困难， 也给刀鲚基因组选择育种 计算雌雄候选亲本数量性状的基因组育种值带来了困难， 且阻碍了需要在性腺发育 分化之 前进行遗传性别识别的性别决定分子机制 研究的开展。 因此， 开发一种能准确稳定鉴别刀 鲚遗传性别的分子标记， 对于刀鲚性别控制育种具有极大的促进作用和生产应用价 值。 [0003]从现阶段已公布的刀鲚基因组信息来看， 仅有雌性刀鲚基因组和注释文件(Xu   etal.,2020)， 尚无雄性相关信息， 无法直接从两种性别刀鲚基因组层面展开比对， 这为刀 鲚性别相关标记的筛选带来了一定的难度。 随着 高通量测序技术的快速发展， 基于酶切的 简化基因组测序(RAD ‑Seq,Restriction ‑site Associated DNA Sequence)作 为一种通过 测序进行基因分型的方法， 为开发鱼类的性别特异性分子标记提供了可能(Gamble  et  al.,2014； L iu et al.,2018； Zhou  et al.,2019； Han  et al.,2020)。 [0004]本发明利用RAD简化基因组测序的方法， 提供了刀鲚雌雄特异性SNP标记， 并成功 应用于刀鲚雌雄 性别的快速鉴定， 为刀鲚全雌育种等相关研究提供了一定的理论基础。 [0005]参考文献 [0006]1.Gamble  T,Coryell  J,Ezaz T,et al.Restriction  site‑associated  DNA  sequencing(RAD ‑seq)reveals  an extraordinary  number of transitions  among Gecko  sex determining systems.Molecular Biology and Evolution,2014,32:12 96‑1309. [0007]2.Han C,Zhu Q,Lu H,et al.Screening  and characterization  of sex‑ specific  markers developed  by a simple NGS method in mandarin  fish(Siniperca   chuatsi).Aquaculture,2020,527:73 5495. [0008]3.Liu H,Pang M,Yu X,et al.Sex‑specific  markers developed  by next‑ generation  sequencing  confirmed an XX/XY sex determination  system in bighead  carp(Hyp ophthalmichthys  nobilis)and  silver carp(Hyp ophthalmichthys  molitrix) .DNA Research,2018,25:257 ‑264. [0009]4.Xu G,Bian C,Nie Z,et al.Genome  and population  sequencing  of a  chromosome ‑level genome assembly  of the Chinese tapertail  anchovy(Coilia  说　明　书 1/5 页 3 CN 114752664 A 3