(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210531395.2 (22)申请日 2022.05.16 (71)申请人 西北工业大 学 地址 710072 陕西省西安市友谊西路127号 (72)发明人 皇甫淑媛 　李郁　樊甜　杨红　 张玲　骞爱荣　王苗　马小魁　 (74)专利代理 机构 西安凯多 思知识产权代理事 务所(普通 合伙) 61290 专利代理师 王鲜凯 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 基于数字PCR技术无创产前筛查胎儿常见染 色体异常的引物组合 (57)摘要 本发明涉及一种基于数字PCR技术无创产前 筛查胎儿常见 染色体异常的引物组合， 根据已知 通用探针序列， 通过筛选21、 18、 13号染色体上的 保守区域序列来设计多重引物作为靶染色体引 物， 通过筛选其他染色体的保守区域来设计多重 引物作为参考染色体引物， 优化反应条件解决可 能出现的多重引物的互相配对问题， 并以微滴式 数字PCR作为平台， 可增加阳性率、 提高检测限， 筛查胎儿21、 18、 13号染色体 是否存在异常， 操作 简单， 适于临床推广。 权利要求书1页 说明书8页 附图2页 CN 114921459 A 2022.08.19 CN 114921459 A 1.一种基于数字PCR技术无创产前筛查胎儿常见染色体异常的引物组合， 其特征在于 包括： 根据人类第21、 18、 13号染色体的基因序列设计的多条特异性引物即靶染色体引物， 以及根据人类其他染色体的基因序列设计设计的多条特异性引物即参考 染色体引物； 其中 所述多条 特异性引物的核苷酸序列为SEQ  ID NO： 1‑80。 2.根据权利要求1所述基于数字PCR技术无创产前筛查胎儿常见染色体异常的引物组 合， 其特征在于： 所述的引物组合分为四组， 第一组包括SEQ  ID NO 1‑20的核苷酸序列， 检 测21号染色体； 第二组包括SEQ  ID NO 21‑40的核苷酸序列， 检测18号染色体； 第三组包括 SEQ ID NO 41‑60的核苷酸序列， 检测13号染色体； 第四组包括SEQ  ID NO 61‑80的核苷酸 序列， 检测其 他参染色体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921459 A 2基于数字PCR技术无创产前筛查胎儿 常见染色体异常的引物 组合 技术领域 [0001]本发明属于染色体检测， 特别涉及母血中胎儿游离核酸的检测， 涉及一种基于数 字PCR技术无创产前筛查胎儿常见染色体异常的引物组合。 背景技术 [0002]21三体综合征(唐氏综合征)、 18三体综合征(爱德华氏综合征)和13三体综合征 (帕陶氏综合征)为常见染色体异常疾病， 占总染色体非整倍体出生缺陷人口的8 0％‑90％。 染色体疾病在出生缺陷患儿中发生率高， 常常导致智力障碍及婴幼儿期死亡， 对人类危害 极大。 出生缺陷是影响出生人口素质的重要问题， 给社会和家庭带来沉重负 担， 而产前检测 是减少出生 缺陷的有效措施之一。 [0003]在新一代测序技术出现之前， 诊断胎儿染色体疾病常通过侵入性产前诊断操作, 如绒毛活检、 羊膜腔穿刺获得样本,对细胞培养后进 行染色体核 型分析以明确诊断。 但穿刺 引起的出血或感染而导致的流产率达0.2％ ‑0.4％， 绒穿导致胎儿肢体畸形的风险达 0.01％‑0.03％， 且产前胎儿组织取材时不可避免混入母体组织， 影响了胎儿遗传物质诊断 的准确性。 随着测序技术的发展， 利用孕妇外周血中的胎儿游离DNA进 行无创性产前诊断方 法取得尤为突出的进展， 该技术从母体外周血中胎儿细胞和游离胎儿核酸采样和分析技 术， 可避免流产风险， 特异性 好。 [0004]目前检测胎儿是否患有三大染色体疾病主要就是通过抽取孕妇外周血， 对孕妇外 周血中的游离DNA(cfDNA)， 利用二代测序(NGS)即无创产前筛查来检测胎儿染色体， 再将测 序结果进行生物信息学分析， 对染色体具有优越的全景性描述， 但其数据冗余需要专业的 人员来操作， 导致检测耗时长且费用昂贵， 用于筛查对于社会和家庭负担较重， 另外， 胎 儿 游离核酸在血液中清除速率极快， 检测难度较大。 而 数字PCR用于无创 产前筛查没有做冗余 的扩增， 成本较低， 并且数字PCR数据分析简单， 可用于广泛的筛查工作。 数字PCR进行产前 筛查的方法一般采取多对引物配合多条探针进行检测， 每条探针仅标记一对引物。 且目前 数字PCR仪多为2个荧光通道， 且探针价格较高， 探针的数量受到限制， 因此引物的数量也受 到限制。 而胎儿游离核酸含量很少， 仅用几对引物进行扩增， 实际上并不能充分扩增， DNA的 扩增效率较低， 阳性克隆数少， 导 致诊断敏感性下降。 [0005]因而， 期望能够提供一种基于数字PCR用于胎儿常见染色体异常疾病筛查的成本 低且能够保证DNA得到充分的扩增的引物组合。 发明内容 [0006]要解决的技 术问题 [0007]为了避免现有技术的不足之处， 本发明提出一种基于数字PCR技术无创产前筛查 胎儿常见染色体异常的引物组合， 解决目前检测存在二代测序耗时长、 价格高昂、 进 行广泛 筛查对家 庭和社会造成的负担较重、 以及检测敏感性低的不足之处。说　明　书 1/8 页 3 CN 114921459 A 3