(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210529413.3 (22)申请日 2022.05.16 (71)申请人 广东省农业科 学院动物卫 生研究所 地址 510630 广东省广州市天河区五山路 白石岗 (72)发明人 周秀蓉　翟颀　罗胜军　孙铭飞　 贾春玲　吕殿红　温肖会　 (74)专利代理 机构 北京哌智科创知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11745 专利代理师 刘小兵 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于检测非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的 试剂盒 (57)摘要 本发明公开了用于检测非洲猪瘟病毒和猪 圆环病毒2型的试剂盒， 属于检测试剂盒技术领 域， 用荧光PCR建立能够 区分ASFV和PCV2的精确 鉴别检测方法就非常有应用价值， 可为ASFV的防 控和净化提供新的技术保障， 通过参考GenBank 中非洲猪瘟病毒的P72基因(MH 713612.1)和猪圆 环病毒2型的ORF 1基因(AF027217)的高度保守序 列设计得到针对非洲猪瘟病毒P72基因的引物对 (ASFV‑F/R)及探针(ASFV ‑P)和针对猪圆环病毒2 型ORF1基因的引物对(PCV2 ‑F/R)及探针(PCV2 ‑ P)。 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 CN 115261510 A 2022.11.01 CN 115261510 A 1.用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在于： 包括引物探针混合 物和Pro Taq HS Premix； 其中引物探针混合物包括工作浓度为20 0nM的ASFV ‑F与ASFV‑R； 工作浓度为15 0nM的ASFV ‑Probe； 工作浓度为20 0nM的CSFV ‑F与CSFV‑R， 工作浓度为15 0nM的CSFV ‑Probe。 2.根据权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： 所述ASFV ‑F为上游引物且基因序列为CTGCATA ATGGCGTTAAC； 其中ASFV ‑F的识别标记为SEQ  ID NO.1； ASFV‑R为下游引物且基因序列为GCTGATACGTGTC CATAA； 其中ASFV ‑R的识别标记为SEQ  ID NO.2。 3.根据权利要求2所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： PCV2‑F为上游引物且基因序列为CTCTCTATCG GAGGATTAC； 其中PCV2‑F的识别标记为SEQ  ID NO.4； PCV2‑R为下游引物且基因序列为C CACTTAAACCCTAAATGAA； 其中PCV2‑R的识别标记为SEQ  ID NO.6。 4.根据权利要求3所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： ASFV‑F/R扩增得到的目的基因的序列CTGCATAATGGCGTTAACAACATGTCCGAACTTGTGCCAAT CTCGGTGTTGATGA GGATTTTGATCGGA GATGTTCCA GGTAGGTTTTAATCCTATAAACATATATTCAATGGGCCA TTTAAGAGCAGACATTAGTTTTTCATCGTGGTGGTTATTGTTGGTGTGGGTCACCTGCGTTTTATGGACACGTATC AGC； 其中ASFV ‑F/R的识别标记为SEQ  ID NO.7。 5.根据权利要求4所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： PCV2‑F/R扩增得到的目的基因的序列CTCTCTATCGGAGGATTACTTCCTTGGTATTTTGGAAGAAT GCTACAGAACAATCCACGGA GGAAGGGGGCCAGTTCGTCACCCTTTCCCCCCCATGCCCTGAATTTCCATATGAAA TAAATTACTGAGTCT TTTTTATCACTTCGTAATGGTTTTTATTTTTCATTTAGGGTTTAAGTGG； 其中PCV2‑F/R的识别标记为SEQ  ID NO.8。 6.根据权利要求5所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： ASFV‑probe的基因序列为CAC CAACAATAACCACCACGATGA A； 其中ASFV ‑probe的识别标记为SEQ  ID NO.3。 7.根据权利要求6所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： PCV2‑probe的基因序列为A AGAATGCTACAGA ACAATCCACGG； 其中PCV2‑probe的识别标记为SEQ  ID NO.6。 8.根据权利要求7所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： 其中ASFV ‑probe的5'端连接有6 ‑FAM， 3'端连接有BHQ1； PCV2‑probe的5'端连接有VIC， 3'端连接有BHQ1。 9.根据权利要求8所述的用于检测非洲猪瘟病 毒和猪圆环病 毒2型的试剂 盒， 其特征在 于： 还不包括试剂盒的识别方法： 选取样品核酸/阳性标准品/阴性标准品2μL、 引物探针混合物1.5μL、 Pro  Taq HS  Premix10 μL和DEPC水补足至20 μL；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115261510 A 2反应程序为： 95℃30s； 95℃5s， 57℃30s， 40个循环， 在每一循环退火结束时收集荧光信 号； 通过荧光定量PCR仪自带 软件读取相应的Ct值。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115261510 A 3