(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210520234.3 (22)申请日 2022.05.13 (71)申请人 核工业总医院 地址 215004 江苏省苏州市姑苏区三 香路 1055号 (72)发明人 王凌霞　杨欢　王波　王冰莹　 虞培娟　郭敏　曹颖　黄燕　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 李彬 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 circHIPK2作为乳腺癌生物标志 物的应用 (57)摘要 本发明公开了一种circHIPK2作为乳腺癌生 物标志物的应用， 属于生物医药技术领域。 本发 明公开了circHIPK2作为乳腺癌生物标志物在制 备乳腺癌诊断试剂盒或诊断试剂中的应用， 所述 乳腺癌诊断试剂盒或诊断试剂包括检测 circHIPK2的引物对， 所述引物对 的核苷酸序列 如SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ  ID NO： 2 所示的下游引物。 本发明针对circHIPK2分子， 在 乳腺癌患者中完成对乳 腺癌组织、 血清等样本的 检测分析， 结果显示， 临床检测circHIPK2分子的 表达水平对于乳腺癌的早期筛查诊断、 疗效监测 及预后分析具有重要意义， 从而提高了乳腺癌的 临床诊疗水平， 具有良好的经济和社会效益。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图6页 CN 114921546 A 2022.08.19 CN 114921546 A 1.circHIPK2作为乳腺癌生物标志 物在制备乳腺癌诊断试剂盒 或诊断试剂中的应用。 2.circHIPK2作为乳腺癌生物标志物在制备乳腺癌预后评估试剂盒或预后 评估试剂中 的应用。 3.根据权利要求1 ‑2任一项所述的应用， 其特征在于， 所述乳腺癌诊断试剂盒或诊断试 剂和所述乳腺癌预后评估试剂盒或预后评估试剂包括检测circHIPK2的引物对， 所述引物 对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的上游引物和SEQ  ID NO： 2所示的下游引物。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 所述乳腺癌诊断的方法包括如下步骤： (1)收集待测对象的血清或组织样本， 并以健康人群的血清或组织样本为对照组； (2)利用权利要求3中所述引物对检测待测对象和对照组样本中生物标志物的含量， 并 将所得结果进行比对； (3)根据比对结果判断待测对象是否为乳腺癌患者； 若待测对象样本中生物标志物含 量高于对照组， 则判断为乳腺癌。 5.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述乳腺癌预后评估的方法包括如下步 骤： (1)收集预后乳腺癌患者的血清或组织样本为待测组， 并以预前乳腺癌患者的血清或 组织样本为对照组； (2)利用权利要求3中所述引物对检测待测组和对照组样本中生物标志物的含量， 并将 所得结果进行比对； (3)根据比对结果评估乳腺癌患者预后治疗效果； 若待测组样本中生物标志物含量低 于对照组， 则判断待测组预后评估有 治疗效果。 6.根据权利 要求4‑5任一项所述的应用， 其特征在于， 采用qPCR荧光染料法检测待测 样 本中生物标记 物含量。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述qPCR荧光染料法的PCR扩增反应体系 包括以下组分： 2 ×AceQ qPCR SYBR Green Master Mix 10 μl， 上下游引物浓度均为10 μM， 用量各0.4μl， cDNA模板3 μl， ddH2O补足至20 μl； PCR扩增反应程序为： 95℃预变性10min； 95 ℃10s， 60℃30s； 40个循环。 8.一种用于诊断和/或预后评估乳腺癌的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括检测 circHIPK2的试剂。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂包括扩增circ HIPK2的引物对。 10.根据权利要求9所述的试剂盒， 其特征在于， 所述引物对的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.1所示的上游引物和SEQ  ID NO： 2所示的下游引物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921546 A 2circHIPK2作 为乳腺癌生物标志物的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 特别是涉及一种circHIPK2作为乳腺癌生物标志 物的应用。 背景技术 [0002]世界卫生组织下属的国际癌症研究机构(IARC)近日发布最新数据显示， 女性乳腺 癌超越肺癌， 成为 发病率最高的癌症恶性肿瘤。 目前， 虽然乳腺癌的治疗技术 获得了一定的 进步， 但仍有很多患者治疗后出现复发与转移， 直接影响患者预后。 早发现、 早诊断、 早治 疗， 能够有效控制病情恶化， 并为患者争取更多生存期 。 目前乳腺癌的诊断、 疗效监测、 复发 转移预测与预后判断的有效手段包括组织病理和B超、 X线、 MRI等影像学检查以及乳 腺癌肿 瘤标志物等。 长期以来， 组织活检病理学检查常作为肿瘤诊断的金标准， 但组织活检技术有 一定的局限性， 主要表现为： 创伤性较大； 有限穿刺针数无法展现肿瘤的全部异质性； 组织 活检报告 结果的滞后性对患者的治疗不利。 影像学检查因肿瘤需达到一定体积大小的时才 可能被检测到， 另外还有辐 射等原因不能作为实时检测手段。 血液肿瘤标志物检测具有操 作简便、 无创、 便于动态监测等优点， 但是目前已广泛应用的肿瘤标志物如CEA、 CA ‑153、 CA199、 CA72 ‑4、 CA125、 AFP等， 由于其诊断的灵敏度和特异性相对较低， 尚不能满足恶性肿 瘤诊断、 疗效监测与预后判断的需要。 因此， 寻找满足恶性肿瘤临床应用的新型非创伤性分 子标志物尤为迫切。 [0003]近年来， miRNAs， lncRNAs， circRNAs等非编码RNAs分子在乳腺癌发生发展中的作 用及其在诊断及预后中的应用价 值备受关注。 [0004]环状RNA(CircRNA)是前体mRNA反向剪接过程中产生的一类不具有5' ‑3'末端和 polyA尾的单链共价闭合环状分子， 其不受RNA外切酶影响， 表达更稳定， 不易降解， 具有调 控基因转录、 选择性剪切、 结合miRNA  和蛋白质 、 翻译多肽等作用， 是参与肿 瘤发生发展的 关键调控因子。 因而  circRNAs等非编码RNAs分子有作为肿 瘤诊断及预后的新型标志物的 潜力。 利用环状非编码RNAs寻找肿瘤诊断、 治疗以及评价患者预后的分子标志物已成为肿 瘤医学转 化领域的重要发展方向。 [0005]因而针对以上阐述的现阶段肿瘤诊断方法的缺陷与circRNAs所有的诊断优势， 本 发明拟寻找在乳腺癌诊断、 治疗及预后评价中具有重要价值的环状RNA作为乳腺癌的新型 生物标志 物。 发明内容 [0006]本发明的目的是提供一种circHIPK2作为乳腺癌生物标志物的应用， 以解决上述 现有技术存在的问题， 该生物标志物对于乳腺癌的早期筛查诊断、 疗效监测及预后分析具 有重要意 义， 能够提高乳腺癌的临床诊疗水平， 具有良好的经济和社会效益。 [0007]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0008]本发明提供circHIPK2作为乳腺癌生物标志物在制备乳腺癌诊断试剂盒或诊断试说　明　书 1/9 页 3 CN 114921546 A 3