(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210522094.3 (22)申请日 2022.05.13 (71)申请人 甘肃农业大 学 地址 730070 甘肃省兰州市安宁区营门村1 号 (72)发明人 李冲　黄永亮　王维民　陈占玉　 王国秀　 (74)专利代理 机构 北京智为时代知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11498 专利代理师 王加岭　杨静 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与绵羊内脏器官重量相关的分子标记 及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种与绵羊内脏器官重量相 关的分子标记及其应用。 本发明通过对绵羊 GLP2R基因进行PCR扩增和序列分析， 发现在扩增 片段的第389位存在一个G/A多态性位点， 进 一步 使用KASPar引物对9 00只湖羊的多态性位点进行 检测和建立最小二乘模型， 对基因型与内脏器官 重量进行关联分析， 最终确定了本发明扩增的 GLP2R基因片段可以作为与绵羊内脏器官发育、 重量相关的分子标记。 通过检测本发 明的分子标 记， 可用于选留GG纯合的绵羊进入核心群， 通过 分子标记辅助选择选育心脏、 肺脏和肾脏发育较 好的绵羊， 加速绵羊育种进程。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114717336 A 2022.07.08 CN 114717336 A 1.一种与绵羊内脏器官重量相关的分子标记及其应用， 其特征在于， 其核苷酸序列如 SEQ ID NO.1所示， 其第389bp处的R表示G或A， 该突变导 致分子标记的G/A多态性。 2.一种检测权利要求1所述的分子标记的PCR引物对， 其特征在于， 其包括核苷酸序列 如SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示的序列。 3.一种检测权利要求1所述的分子标记的KASPar引物对， 其特征在于， 其包括核苷酸序 列如SEQ ID NO.4、 SEQ ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示的序列。 4.一种检测权利要求1所述的分子标记的试剂盒， 其特征在于， 其包含权利要求2所述 的PCR引物对或/和权利要求3所述的KAS Par引物对。 5.一种检测权利要求1所述的分子标记的方法， 其包括如下步骤： a)使用权利要求2所述的PCR引 物对或权利要求3所述的KASPar引 物对， 或者使用权利 要求4所述的试剂盒， 对绵羊全血基因 组DNA进行扩增； b)对步骤a)获得扩增产物的多态性 位点进行分型鉴定 。 6.根据权利 要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤b)中的分型鉴定方法为测序法和KASP 基因分型技 术。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 利用权利要求3所述的KASPar引物对进行 PCR扩增， 扩增结束后， 再通过检测荧 光信号确定分型 结果。 8.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的PCR引物对或权利要求3所述的 KASPar引物对， 或权利要求4所述的试剂盒， 或权利要求5 ‑7任一项所述的方法在绵羊内脏 器官重量相关检测中的应用。 9.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的PCR引物对或权利要求3所述的 KASPar引物对， 或权利要求4所述的试剂盒， 或权利要求5 ‑7任一项所述的方法在绵羊育种 中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 其育种目的是为挑选出内脏器官发育好、 重量较大的绵羊品种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114717336 A 2一种与绵羊内脏器 官重量相关的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记制备技术领域， 具体涉及GLP2R基因片段作为影响绵羊内脏 器官重量的分子标记及其应用。 背景技术 [0002]内脏器官的重量和器官指数在一定程度上反映了动物机体的机能状况和生长发 育情况， 对于理论研究和生产实践有重要的意义。 内脏器官 的重量和脏器指数能反映动物 健康状况， 也是判断其生长、 生理状态和进化水平的重要指标。 既可以作为动物遗传品质鉴 定的重要依据， 又可以为动物的饲养提供理论依据。 有研究表明动物主要内脏的重量与体 重显著正相关。 另外， 在医学上常用动物的脏器质量及脏器指数来衡量动物的功能状态、 评 价药品的安全性等。 因此， 针对内脏器官发育开展遗传改良有利于提高绵羊养殖综合效益。 然而内脏发育相关性状难以测量， 传统的育种进程耗时长、 性状改良成本较高且育种 结果 不确定性较高。 而分子标记辅助选择可将有价值性状相关的DNA标记代替表型选择来加速 育种过程。 因此， 寻找和绵羊内脏器官发育相关的基因和数量性状位点可加速湖羊在生长 发育等方面的育种进程， 但是 具体哪些分子标记能够反应并不清楚。 [0003]胰高血糖素样肽 ‑2受体(glucagon ‑like peptide‑2receptor， GLP2R)是胰高血糖 素受体家族的成员， 迄今已知该家族成员至少包括17个。 所对应的配体胰高血糖素样肽 ‑2 (GLP2)由肠内的内分泌L细胞和脑中的前胰高血糖素原神经元分泌， 二者结合后因作用的 靶点不同而作用各异， 如在胃肠道内有助于胃肠道生长发育， 增加其血流量， 提高胃肠道屏 障功能， 促进胃肠道对营养物质的吸收， 发挥调节胃肠道黏膜细胞增殖、 分化和修复等； 在 胰腺内可以调节胰高血糖素的分泌； 在下丘脑可以产生饱腹感调控采食量。 目前针对GLP2R 的研究主要包括人的糖尿病和肥胖症、 小鼠的脂肪肝或肝脏炎症、 猪肉和羊肉品质等。 内脏 发育受基础代谢和能量供给等因素的影响， 而GLP2R是调控机体能量平衡的关键介质。 但绵 羊GLP2R基因多态性与内脏重量的关联性仍不清楚。 与绵羊内脏器官重量相关的分子标记 及其应用未 见报道。 发明内容 [0004]为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种作为与绵羊内脏器官重量相关的分子 标记及其应用。 本发明的分子标记从绵羊GLP2R基因中扩增得到， 其具体核苷酸序列如SEQ   ID NO.1所示。 通过扩增绵羊GLP2R基因的DNA序列并测序， 寻找GLP2R基因的多态性位点， 从 而可以建立绵羊 内脏器官重量相关分子标记的检测方法， 并可将该分子标记应用于 分子标 记辅助育种， 选 育内脏器官发育较好的绵羊。 [0005]为实现上述目的， 本发明采用以下的技 术方案为： [0006]一方面， 本发明提供了一种与绵羊内脏器官重量相关的分子标记， 该分子标记对 通过对绵羊GLP2R基因进行扩增 而获得， 具体的， 该分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1 所示， 其第389bp位的R表 示G或A， 由于上述序列在第389位碱基处有一个G/A突变， 从而导致说　明　书 1/6 页 3 CN 114717336 A 3