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(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210511750.X (22)申请日 2022.05.12 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市天河区五山 华 南农业大 学 (72)发明人 赵佳 王州飞 何永奇 彭丽玲  (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 专利代理师 傅婷婷 (51)Int.Cl. C12N 15/54(2006.01) C12N 9/12(2006.01) C12N 15/82(2006.01) A01H 5/10(2018.01) A01H 5/00(2018.01)A01H 6/46(2018.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 水稻三磷酸肌醇激酶基因的应用 (57)摘要 本发明公开了水稻NAC转录因子基因在种子 活力改良中的应用。 所述的基因OsITPK4核苷酸 序列如SEQ  ID NO.1所示, 以及编码相应的蛋白 氨基酸序列如序列表SEQ  ID NO.2所示。 本发明 在水稻中首次报道了OsITPK4基因能调控水稻种 子活力, 通过试验表明突变该基因后, 种子活力 显著降低, 过量表达该基因提高种子活力。 证明 本发明OsITPK4基因调控了水稻种子活力, 利用 该基因有助于筛选和培育高活力水稻品种, 有利 于直播稻生产。 权利要求书1页 说明书4页 序列表5页 附图1页 CN 114891811 A 2022.08.12 CN 114891811 A 1.水稻1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶编码基因OsITPK4在筛选或培育高种子活力水稻品 种中的应用, 所述的水稻1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶编码基因OsITPK4核苷酸序列如SEQ   ID NO.1所示。 2.根据权利要求1所述的应用, 其特征在于过表达所述的基因OsITPK4, 能够提高水稻 种子活力。权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 114891811 A 2水稻三磷酸肌醇 激酶基因的应用 技术领域 [0001]本发明属于种子生物技术领域, 涉及一个1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶基因 OsITPK4的应用。 背景技术 [0002]水稻(Oryza  sativa L.)是我国最重要的粮食作物之一。 水稻直播栽培方式具有 省工、 省力, 节约成本、 经济效益好等优势, 近年来生产面积逐年扩大。 但直播稻存在难全 苗、 草害重、 易倒伏等难题。 高活力种子在田间具有发芽好、 成苗快, 幼苗生长潜势大、 抗逆 能力强等特性, 这对保障直播稻产量具有重要作用。 1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶(ITPK)是 一种保守的多功能酶, 在调控磷酸肌醇代谢,生物信号传导及生长发育中起重要作用, 广泛 参与植酸生物合成、 植物抗逆等多种生物学过程。 但其在调控水稻种子活力中的功 能尚未 报道, 有待进一步研究。 发明内容 [0003]本发明的目的是提供一个调控水稻种子活力的1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶 OsITPK4分离克隆、 功能验证和应用。 [0004]本发明的目的可通过如下技 术方案实现: [0005]本发明的一个来自水稻的1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶OsITPK4, 其核苷酸序列如 序列表SEQ  ID NO.1所示。 [0006]本发明所述的水稻1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶OsITPK4, 其氨基酸序列SEQ  ID  NO.2所示。 [0007]本发明所述的水稻O sITPK4基因或蛋白在筛 选或培育高活力水稻品种中的应用。 [0008]所述的水稻1,3,4 ‑三磷酸肌醇5/6 ‑激酶OsITPK4在提高水稻种子活力, 促进直播 稻生产中的应用。 [0009]所述的应用优选, 过表达O sITPK4基因以提高水稻种子活力。 [0010]本发明所述的水稻O sITPK4基因突变 体获得和基因功能验证, 包括如下步骤: [0011](1)获得水稻OsITPK4基因的核苷酸序列及氨基酸序列; [0012](2)设计靶位点及其引物, 以pCBC ‑MT1T2为模板进行PCR扩增, 纯化回收PCR产物, 获得MT1T2 ‑PCR载体; [0013](3)将步骤(2)得到的带有OsITPK4基因的目标片段的MT1T2 ‑PCR胶回收产物构建 到pHUE41 1载体上, 获得pHUE41 1+MT1T2‑PCR载体; [0014](4)将步骤(3)得到的带有OsITPK4基因目标片段 的质粒转化农杆菌; 将带有转化 质粒的农杆菌转 化水稻; [0015](5)水稻突变 体筛选与鉴定, 并进行发芽表型鉴定 。 [0016]进一步的, 在步骤(1)中利用水稻cDNA为模板, PCR克隆出该基因的序列, 所述PCR 的上游引物序列如序列表SEQ  ID NO.3所示, 下游引物序列如序列表SEQ  ID NO.4所示。说 明 书 1/4 页 3 CN 114891811 A 3

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