(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210532328.2 (22)申请日 2022.05.11 (71)申请人 中南大学湘雅医院 地址 410008 湖南省长 沙市湘雅路87号 (72)发明人 贺曦　刘彦伶　熊寅　 (74)专利代理 机构 长沙湘之星知识产权代理事 务所(普通 合伙) 43271 专利代理师 刘向丹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒及引 物组的应用 (57)摘要 本发明涉及生物 技术及医学领域， 具体公开 了一种家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒， 包括如 SEQ ID No.33所示的正向扩增引物、 如SEQ  ID  No .34所示的反向扩增引物以及如SEQ  ID  No.126所示的测序引物； 所述检测试剂盒用于检 测家族性多发性脂肪瘤的致病基因， 致病基因为 突变的ABCA13基因， 突变的ABCA13基因与野 生型 ABCA13基因的差异包括1个突变， 突变为野生型 ABCA13基因编码区17号外显子第29 08位碱基C突 变为T， 突变的ABCA13基因的核苷酸序列如SEQ   ID NO.139所示。 试剂盒具有检测方便， 高灵敏 度、 结果精准的特点。 本发明还公开了一种引物 组在家族性多发性脂肪瘤致病基因检测产品中 的应用， 检测产品可用于检测野 生型ABCA13基因 在任意位点上的碱 基突变。 权利要求书1页 说明书10页 序列表27页 附图4页 CN 114875148 A 2022.08.09 CN 114875148 A 1.一种家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒， 其特征在于， 包括如SEQ  ID No.33所示的正 向扩增引物、 如SEQ  ID No.34所示的反向扩增引物以及 如SEQ ID No.126所示的测序引物。 2.根据权利要求1所述的家族性多发性脂肪瘤检测试剂 盒， 其特征在于， 所述检测试剂 盒用于检测家族性多发性脂肪瘤的致病基因， 致病基因为突变的ABCA13基因， 突变的 ABCA13基因与野生型ABCA13基因的差异包括1个突变， 突变为野生型ABCA13基因编码区17 号外显子第2908位碱基C突变为T， 突变的ABCA13基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.139所示。 3.根据权利要求1所述的家族性多发性脂肪瘤检测试剂 盒， 其特征在于， 检测试剂 盒还 包括用于PCR的DNA扩增酶、 缓冲液、 dNTP混合物， 所述DNA扩增酶为Taq  DNA聚合酶， Taq  DNA 聚合酶的浓度为1U/ μL； 所述缓冲液为MgCl2溶液， MgCl2溶液的浓度为10mM； 所述dNTP混合 物的浓度为10mM 。 4.根据权利要求3所述的家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒， 其特征在于， 检测试剂盒 中， 引物组、 DNA扩增酶、 缓冲液、 水的体积比为2:1:2:4。 5.根据权利要求4所述的家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒， 其特征在于， 检测时， 加入 的DNA模板与缓冲液的体积比为1:1， DNA模板的浓度为5 0ng/ μL。 6.一种引物组在家族性多发性脂肪瘤致病基因检测产品中的应用， 其特 征在于， 所述引物组包括62组引物对以及14个测序引物； 引物对的正向扩增引物如SEQ  ID No.(2N‑1)所示， 反向扩增引物如SEQ  ID No.2N所 示， N＝1～62； 测序引物如SEQ  ID No.M所示， M＝125～138。 7.根据权利要求6所述的引物组在家族性多发性脂肪瘤致病基因检测产品中的应用， 其特征在于， 所述检测产品用于检测家族性多发性脂肪瘤的致病基因， 致病基因为野生型 ABCA13基因在任意位点上的碱基突变， 野生型ABCA13基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.140 所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114875148 A 2一种家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒及引物组的应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物技术及医学领域， 具体涉及一种家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒 及引物组的应用。 背景技术 [0002]家族性多发性脂肪瘤病(Familial  multiple lipomas， FML)是一种罕见的皮下脂 肪多发脂肪瘤的脂肪疾病(RAD)(OMIM  151900)， 估计患病率为1/50,000， 其特征是四肢和 躯干出现包被良好的皮下结节， 质地柔软， 主要由成熟的脂肪组织构成， 包以结缔组织外 囊， 大小不一， 小的如豌豆， 大的如拳， 甚 或更大， 可发生于任何年龄， 家庭外显率不相等， 多 见于青壮年、 老年或肥胖者。 脂肪瘤通常不会疼痛或触痛， 但在生长过程中， 它们 可能在形 成时引起轻微的瘙痒或烧灼感。 如果脂肪瘤发生在有压力的部位， 如腿部背部， 则会引起压 痛。 患者血脂一般正常， 脂肪的沉积一般是无症状和不对称的， 一些患者病灶数量较多可能 会影响美观和日常生活， 有时在关节、 四肢附近的脂肪瘤会导致关节、 四肢等功能障碍， 并 且有些FML家族中的患者中出现胰岛素的敏感性低于正常水平， 胰岛素代谢清除率低于正 常水平等现象。 目前家族性多发性脂肪瘤病的病因尚不清楚， 治疗方式比较局限， 主要依靠 外科手术方式切除， 但切除后多出现瘢痕， 且有复发的风险。 因此， 探索FML的发病机制， 为 其治疗提供新的可能显得 尤为重要。 [0003]家族性多发性脂肪瘤病通常以常染色体显性遗传的方式遗传。 但FML的遗传学机 制研究极少， 目前仅报道了PALB2、 HMGA2两个致病基因。 这两个基因均在高加索人群中鉴定 到， 在东亚人群中并没有这两个基因导致FML的相关报道。 因此， 我们需要定位更多的FML致 病基因， 以此揭示FML的致病机制， 为FML的预防、 治疗与诊断， 产前诊断提供指导。 [0004]现有的家族性多发性脂肪瘤病的检测产品存在检测周期长， 检测准确度不高， 检 测过程中引物测序次数多， 测序次数多等问题， 亟 待改进。 发明内容 [0005]本发明所解决的技术问题在于提供一种家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒， 试剂盒 用于检测如SEQ  ID NO.139所示的突变的致病基因， 具有检测方便， 灵敏度高、 结果精 准、 更 为经济的特点。 [0006]本发明所解决的技术问题之二在于提供一种引物组在家族性多发性脂肪瘤致病 基因检测产品中的应用， 可用于野生型ABCA13基因在任意位点上的碱基突变， 具有检测方 便， 灵敏度高、 结果精准、 更为经济的特点。 [0007]本发明所解决的技 术问题采用以下技 术方案来实现： [0008]一种家族性多发性脂肪瘤检测试剂盒， 包括如SEQ  ID No.33所示的正向扩增引 物、 如SEQ ID No.34所示的反向扩增引物以及 如SEQ ID No.126所示的测序引物。 [0009]进一步地， 所述检测试剂盒用于检测家族性多发性脂肪瘤的致病基因， 致病基因 为突变的ABCA13基因， 突变的ABCA13基因与野生型ABCA13基因的差异包括1个突变， 突变为说　明　书 1/10 页 3 CN 114875148 A 3