(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210510891.X (22)申请日 2022.05.11 (71)申请人 国能神东煤炭集团有限责任公司 地址 017219 内蒙古自治区鄂 尔多斯市伊 金霍洛旗乌兰木伦镇上湾金 龙路北 申请人 中国神华能源股份有限公司神东煤 炭分公司 (72)发明人 王小龙　郭永进　樊龙斌　訾振军　 张建军　 (74)专利代理 机构 北京康信知识产权代理有限 责任公司 1 1240 专利代理师 金田蕴 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 检测粪大肠菌 群的试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测粪大肠菌群的试剂 盒及其应用。 其中， 该试剂盒包 括针对uidA基因、 cas5e基因和ybtT基因的检测探针和引物。 应用 本发明的技术方案， 对井下环境进行分析， 得出 各种条件对粪大肠菌群繁殖的影 响， 从而得出在 特定环境下生长的优势菌种， 为引物的设计提供 了依据和来源； 另一方面利用荧光定量PCR检测 技术进行采样和分析， 其技术的优势是快速、 特 异、 灵敏； 对实验室模拟水样检测结果表明方法 具有较高的检测效率和检测能力。 权利要求书1页 说明书6页 序列表3页 附图4页 CN 114959080 A 2022.08.30 CN 114959080 A 1.一种检测 粪大肠菌群的试剂盒， 其特征在于， 包括针对uidA基因、 cas5e基因和 ybtT 基因的检测探针和引物。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述探针和引物针对uidA基因的第533 ～594位、 cas5e基因的第276～3 39位和ybtT基因的第6 08～675位核苷酸片段。 3.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒为用于检测矿井水中粪大肠 菌群的试剂盒。 4.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述探针包括如SEQ  ID NO： 1、 SEQ  ID  NO： 4和SEQ  ID NO： 7所示的探针。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述引物包括如SEQ  ID NO： 2、 SEQ  ID  NO： 3、 SEQ ID NO： 5、 SEQ ID NO： 6、 SEQ ID NO： 8和SEQ  ID NO： 9所示的探针。 6.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、 Mg2+ 溶液、 含dUTP的dNTPs和Tap酶。 7.如权利要求1至6中任一项所述的检测粪大肠菌群的试剂盒在检测粪大肠菌群中的 应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述检测粪大肠菌群的试剂 盒在检测矿井 水中粪大肠菌群中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述应用包括： 取待检测矿井水样本， 提取 所述待检测矿井水样 本中大肠菌群的DNA样 本， 采用所述检测粪大肠菌群的试剂盒进 行PCR 检测。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述PCR检测反应条件如下： 95℃预变性 30s， 95℃变性10s， 58℃退火3 0s， 72℃延伸15s， 3 5个循环， 最后72℃延伸7mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959080 A 2检测粪大肠菌群的试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及微生物检测技术领域， 具体而言， 涉及一种检测粪大肠菌群的试剂盒 及其应用。 背景技术 [0002]粪大肠菌群又名耐热大肠菌群， 属于细菌 的一种， 能够生长在人体或动物的肠道 内， 会随着粪便排到体外， 其占到粪便干重的32％。 而粪便的排放， 经过一系列的途径会被 渗入到水体中， 对水体造成了严重的污染。 除此之外， 大肠菌群数 的高低， 也表明了粪便污 染的程度， 反映了对人体健康危害性的大小。 [0003]目前， 煤矿产生矿井水量大， 配套矿井水处理厂也众多， 均需要进行粪大肠菌群检 测。 但是存在以下问题： 现有的粪大肠菌群检测 手段步骤繁琐， 检测周期较长， 在检测过程 中难以避免细菌的繁殖， 从而导致检测结果不准确。 例如： 1)当前， 对于水质大肠菌群的指 标检测多采用 《水质粪大肠菌群的测定滤膜法》 ， 该国标法检测结果的准确 性、 灵敏性均较 高， 但是操作繁杂、 耗时较长， 需要用到大量的玻璃容器和仪器， 不适合用于矿井下水质指 标的测定； 2)废水中粪大肠菌群繁殖速率极快， 约20 分钟便可繁殖一倍。 而现阶段的取样监 测化验中， 存在取样时水质达标， 将水样带回化验室检测时超标的问题。 [0004]因此， 从经济环保角度看， 开发一种快速检测粪大肠菌群试剂盒， 非常有必要。 发明内容 [0005]本发明旨在 提供一种检测粪大肠菌群的试剂盒及 其应用， 以解决现有技术中粪大 肠菌群检测手段步骤繁琐， 检测周期较长的技 术问题。 [0006]为了实现上述目的， 根据本发明的一个方面， 提供了一种检测 粪大肠菌群的试剂 盒。 该试剂盒包括针对uidA基因、 cas5e基因和ybtT基因的检测探针和引物。 [0007]进一步地， 探针和引物针对uidA基因的第533～594位、 cas5e基因的第276～339 位 和ybtT基因的第6 08～675位核苷酸片段。 [0008]进一步地， 试剂盒为用于检测矿井水中粪大肠菌群的试剂盒。 [0009]进一步地， 探针包括如SEQ  ID NO： 1、 SEQ ID NO： 4和SEQ  ID NO： 7所示的探针。 [0010]进一步地， 引物包括如SEQ  ID NO： 2、 SEQ  ID NO： 3、 SEQ  ID NO： 5、 SEQ  ID NO： 6、 SEQ ID NO： 8和SEQ  ID NO： 9所示的探针。 [0011]进一步地， 试剂盒还 包括PCR反应缓冲液、 Mg2+溶 液、 含dUTP的dNTPs和Tap酶。 [0012]根据本发明的另一个方面， 提供一种检测粪大肠菌群的试剂盒在检测粪大肠菌群 中的应用。 [0013]进一步地， 检测粪大肠菌群的试剂盒在检测矿井水中粪大肠菌群中的应用。 [0014]进一步地， 应用包括： 取待检测矿井水样本， 提取待检测矿井水样本中大肠菌群的 DNA样本， 采用检测粪大肠菌群的试剂盒进行PCR检测。 [0015]进一步地， PCR检测反应条件如下： 95℃预变性30s， 95℃变性10s， 58℃退火30s， 72说　明　书 1/6 页 3 CN 114959080 A 3