(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210503161.7 (22)申请日 2022.05.10 (71)申请人 南华大学 地址 421000 湖南省衡阳市 常胜西路28号 (72)发明人 王丹玲　万正卿　龚茜　朱琳　 陈雯　 (74)专利代理 机构 北京市广友专利事务所有限 责任公司 1 1237 专利代理师 张仲波 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) (54)发明名称 用于检测口腔癌及其预后的基因标志物、 引 物及其试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测口腔癌及其预 后的基因标志物EYA2基因并针对该标记物设计 了引物和检测用试剂盒， 本发明根据患者肿瘤组 织中EYA2 基因的表达 水平， 即可快速准确的判断 受测组织是否为肿瘤组织， 并判断患者的预后情 况， 以协助临床决策。 该基因的表达在所有患者 中都可以检测， 不受特定患者的限制。 采用本发 明的检测试剂盒判断肿瘤组织的准确度为 100％， 特异度为80％。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图3页 CN 114908170 A 2022.08.16 CN 114908170 A 1.EYA2基因作为标志 物在制备检测口腔癌及其预后相关试剂中的应用。 2.一种用于检测口腔癌及其预后的引物对， 其特征在于， 所述引物对的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1‑2所示。 3.一种用于检测口腔癌及其预后的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求2所述的引物 对。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括内参基因GAPDH的检 测引物对。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述内参基因GAPDH的检测引物对的核 苷酸序列如SEQ  ID NO.3‑4所示。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括含有核酸染料的DNA 聚合酶预混试剂。 7.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述含有核酸染料的DNA聚合酶预混试 剂为含有SYBR  green染料的DNA聚合酶预混试剂。 8.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒用于cDNA样品的qPCR扩增， 并根据每个样品的标准化Ct 值， 判断受测样品是否为口腔癌组织样品或判断其可能的预后 情况； 所述标准 化Ct值的计算公式如下： 标准化Ct＝Ct(EYA2)‑Ct(GAPDH) 其中， Ct(EYA2)为EYA2基因的Ct值， Ct(GAPDH)为内参基因GAP DH的Ct值。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 若标准化Ct值>7.152为正常组织， 若标 准化Ct值<7.152为肿瘤组织。 10.根据权利 要求9所述的试剂盒， 其特征在于， 所述样品的起始 RNA量为1ug， 逆转录完 成后取1ul  cDNA产物的5倍稀释液进行qPCR扩增。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114908170 A 2用于检测口腔 癌及其预后的基因标志物、 引物及其试剂盒 技术领域 [0001]本申请涉及口腔癌检测技术领域， 具体而言， 涉及一种用于检测口腔癌及其预后 的基因标志 物、 引物及其试剂盒。 背景技术 [0002]口腔癌是指发生于 口腔部位的恶性肿瘤， 在所有头颈部恶性肿瘤中最为常见。 口 腔癌发病机制复杂， 是一个多因素、 多步骤、 多阶段的过程， 涉及遗传因素和环境因素 的共 同作用。 老龄、 吸烟、 饮酒及不良的饮食习惯， 如咀嚼槟榔， 是口腔癌发病的重要风险因素。 目前认为， 癌基因的激活和抑癌基因的失活， 导致细胞正常生理过程及大分子代谢紊乱、 信 号传导受阻、 细胞结构改变及免疫调节紊乱等， 是口腔细胞癌变的分子基础之一。 然而， 至 今为止， 口腔癌发病的分子 机理仍不完全清楚， 相关的分子标记 物也极为 缺乏。 [0003]临床现有方法主要是根据患者的临床分期分级来判断。 目前能找到的分子标记物 有专利申请CN110499368A中公开的一种与口腔癌预后 预测相关的snp标志物及其应用， 该 专利申请中采用PCR反应检测一种与口腔癌预后有关 的snp标志物。 但是， 该方法必须要检 测到特定的SNP， 而实际上不是 所有人都携带 该SNP， 因此 该检测方法只适用于一小部分人。 [0004]EYA(Eyes  absent)家族蛋白是一种高度保守的转录辅助因子， 包括EYA1～EYA4。 EYA家族蛋白主要通过调控细胞增殖、 决定细胞命运从而参与视网膜的早期发育， 是视网膜 决定基因网络(Retinal  Determination  Gene Network， RDGN)信号传导通 路的重要组成部 分。 最近的研究表明， E YA家族蛋白可能参与肿瘤的发生发展。 发明内容 [0005]发明人通过综合口腔癌组织RNA测序结果及甲基化芯片结果意外的发现， 口腔癌 组织中EYA家族蛋白EYA2的表达量相较癌旁组织显著降低， 且低表达EYA2的肿瘤患者预后 也相对较差， 提 示EYA2在口腔癌进程中可能发挥肿瘤抑制因子的功能。 [0006]基于此， 本 发明提供了一种EYA2基因作为标志物在制备检测口腔癌及其预后相关 试剂中的应用。 [0007]本发明还提供一种用于检测口腔癌及其预后的引物对， 所述引物对的核苷酸序列 如SEQ ID NO.1‑2所示。 [0008]本发明还提供一种用于检测口腔癌及其预后的试剂盒， 包括前述的引物对。 [0009]进一步的， 所述试剂盒还 包括内参基因GAP DH的检测引物对。 [0010]所述内参基因GAP DH的检测引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3‑4所示。 [0011]更进一步的， 所述试剂盒还包括含有核酸染料的D NA聚合酶预混试剂。 所述含有核 酸染料的DNA聚合酶预混试剂可以为含有SYBR  green染料的DNA聚合酶预混试剂。 [0012]本发明的试剂盒可用于cDNA样品的qPCR扩增， 并根据每个样品的标准化Ct值， 判 断受测样品是否为口腔癌组织样品或判断其可能的预后情况； [0013]所述标准 化Ct值的计算公式如下：说　明　书 1/6 页 3 CN 114908170 A 3