(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210496299.9 (22)申请日 2022.05.09 (71)申请人 中国人民解 放军总医院第三医学中 心 地址 100039 北京市海淀区永定路69号 (72)发明人 崔蓓　贾洪真　洪博　邵维阳　 田春雨　黄金峰　曹利群　王凤翔　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 专利代理师 高倩倩 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G01N 33/68(2006.01) (54)发明名称 青光眼的诊断生物标志 物及其应用 (57)摘要 本发明公开了青光眼的诊断生物标志物及 其应用， 所述生物标志物包括PDGFRL、 CLEC2B、 EFHD1或RTN1的一种或多种； 相比于正常对照， PDGFRL、 CLEC2B、 EFHD1或RTN1在青光眼患者呈现 显著性差异， 且 上述基因尤其是上述基因的组合 用于青光眼的诊断具有较高的诊断效能。 权利要求书1页 说明书11页 序列表2页 附图2页 CN 114875132 A 2022.08.09 CN 114875132 A 1.检测样品中生物标志物的试剂在制备诊断青光眼的试剂盒中的应用， 其特征在于， 生物标志 物包括PDGFRL、 CLE C2B、 EFHD1或RTN1的一种或多种。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 所述试剂包括： 与所述生物标志 物的基因特异性结合的引物对、 探针或反义核苷酸； 或 与所述生物标志物的蛋白质或肽片段特异性结合的抗体、 相互作用蛋白、 配体、 纳米粒 子或适配 体。 3.根据权利要求1或2所述的应用， 其特 征在于， 所述样品选自组织。 4.一种用于诊断个体的青光眼的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括检测生物样品 的生物标志物水平的试剂， 所述生物标志物包括PDGFRL、 CLEC2B、 EFHD1或RTN1的一种或多 种。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂包括在mRNA水平或蛋白水平上 确定生物标志 物PDGFRL、 CLE C2B、 EFHD1和/或RTN1表达水平的试剂。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒括通过聚合酶链反应、 实时 荧光定量逆转录多聚酶链反应、 逆转录聚合酶链反应、 竞争性聚合酶链反应、 核酸酶保护分 析、 原位杂交法、 核酸 微阵列、 RNA印迹或DNA芯片的方法进行确定mRNA水平的试剂。 7.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括通过免疫印迹、 酶联免 疫吸附试验、 放射免疫分析、 放射免疫扩散法、 免疫电泳、 组织免疫染色、 免疫沉淀分析法、 补体固定分析法、 荧光激活细胞分选、 质量分析或蛋白质微阵列的方法进行检测蛋白水平 的试剂。 8.根据权利要求4 ‑7任一项所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括从样品中分 离核酸或蛋白的试剂。 9.生物标志物在构建预测青光眼的计算模型中的应用， 其特征在于， 所述生物标志物 包括PDGFRL、 CLE C2B、 EFHD1或RTN1的一种或多种。 10.一种用于确定指示对象是否患有青光眼的装置， 其特 征在于， 所述装置包括： 数字处理器， 所述数字处 理器执行以下方法： 以生物标志物的表达水平作为输入变量， 基于从所述对象的样本 中的生物标志物的水 平来确定指示所述对象是否具有青光眼的异常表达的生物标志物， 所述生物标志物包括 PDGFRL、 CLE C2B、 EFHD1或RTN1的一种或多种； 其中， 异常表达的生物标志 物的确定基于相应生物标志 物的参考水平； 其中， 所述 参考水平反映在健康对象的样品中发现的所述 生物标志 物的水平； 其中， 与健康参考水平相比， 生物标志物PDGFRL、 CLEC2B在青光眼患者 中的表达水平上 调， EFHD1、 RTN1在青光眼患者中的表达水平下调。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114875132 A 2青光眼的诊断生物标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学 领域， 涉及青光眼的诊断生物标志 物及其应用。 背景技术 [0002]青光眼是全世界不可逆性失明的主要原因（Sharma S, Bollinger K E, Kodeboyina S K, et al. Proteomic Alter ations in Aqueous Humor From Patients With Primary Open Angle Glaucoma[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2018, 59(6): 2635‑2643.） 。 它是一种进行性视神经退行性病变， 伴有视网膜神经节细胞(Retinal ganglion c ells, RGC)丢失、 视神经萎缩和视野 丧失 （Kliuchnikova AA, Samokhina N I, Ilina I Yet al. Human aqueous humor proteome in cataract, glaucoma, and pseudoexfoliation syndrome[J]. Proteomics, 2016 16(13): 1938 ‑46. ） 。 基于虹膜角 的开放性或闭合性， 两种常见的青光眼类型分为原发性开角型青光眼(Primary open angle glaucoma, POAG)和原发性闭角型青光眼(Primary angle closure glaucoma, PACG )。 超过50%的青光眼导致的失明是由PACG引起的， 尤其是在亚洲人 （Zhang J L, Song XY， Chen Y Y， et al. Novel inflammatory cytokines (IL ‑36, 37,38) in the aqueous humor from patients with chronic primary angle closure glaucoma[J]. Int Immunopharmacol, 2019, 71:164 ‑168.） 。 原发性急性闭角型青光眼(Primary acute angle clo sure glauco ma, PAACG)是PACG的一种类型， 是东亚地区致盲的重要原因。 PAA CG 发生在前房角突然阻塞， 眼压迅速升高到较高水平。 原发性慢性闭角型青光眼(Primary chronic angle closure glaucoma, PCACG)是由周围性前粘连(Peripheral anterior synechia, PAS)引起的永久性闭角引起的眼压升高。 PCACG的患病率随着年龄的增长而增 加， 并经常与白内障并存。 除原发性青光眼外， 新生血管性青光眼是一种继发性青光眼， 伴 有视力损害， 最常见于糖尿病 、 视网膜主 要血管阻塞、 颈动脉阻塞性疾病。 [0003]青光眼是一种复杂的神经退行性眼病， 具有多种遗传和非遗传危险因素。 高眼压 是青光眼的主要危险因素， 治疗性降压可显著延缓疾病进展， 但有关眼压如何导致 RGC死亡 和视神经损伤的分子机制仍不明确 （Adav S S, Wei J, Qian J, et al. Aqueous humor protein dysregulation in primary angle ‑closure glaucoma[J]. Int Ophthalmol, 2018. ） 。 此外， 据报道， 衰 老、 遗传倾向、 氧化应激、 线粒体功能障碍、 炎症、 血管调节障碍、 脂 质代谢与青光眼有关。 然而， 青光眼的确切病因仍不清楚， RGC丢失和 视神经萎缩的分子机 制仍不清楚。 因此， 确定导致这种疾病的发病机制和进展的因素是至 关重要的。 虽然现代眼 科影像学如光学相干断层成像、 超声活体显微镜等的发展为青光眼的早期诊断创造了条 件， 但是还存在一定的局限性。 对青光眼的分子学研究有利于筛查潜在发病人群， 对提高青 光眼的认知， 筛查及防治等工作有重要意 义。 发明内容 [0004]为了弥补现有技术的不足， 本发明的目的之一在于提供包含对于青光眼诊断特异说　明　书 1/11 页 3 CN 114875132 A 3