(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210498124.1 (22)申请日 2022.05.09 (71)申请人 中国水稻研究所 地址 311400 浙江省杭州市富阳区水稻所 路28号 (72)发明人 朱玉君　王世林　樊叶杨　张振华　 黄得润　庄杰云　 (74)专利代理 机构 浙江杭州金通专利事务所有 限公司 3 3100 专利代理师 刘晓春 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 筛选水稻粒重QT L qTGW10-21.9上高粒重等 位基因的DNA标记及应用 (57)摘要 本发明为筛选 水稻粒重QT L qTGW10‑21.9上 高粒重等位基因的DNA标记及应用， 提供了一个 用于筛选水稻千粒重QT L qTGW10‑21.9上高千粒 重等位基因的DNA标记Ten21945及其在水稻千粒 重改良育种中的应用。 应用Ten21945能准确识别 待鉴定水稻品种是否携带qTGW10 ‑21.9座位上 IR24高千粒重等位基因。 通过实例证明携带 qTGW10‑21.9上IR24高千粒重等位基因的水稻材 料千粒重显著增加， 说明本发明设计的DNA标记 Ten21945可有效应用于水稻千粒重的改良育种 中。 权利要求书1页 说明书2页 序列表1页 附图1页 CN 114990247 A 2022.09.02 CN 114990247 A 1.筛选水稻粒重QTL  qTGW10‑21.9上高粒重等位基因的DNA标记Ten21945， 其特征在于 引物序列： Ten21945 ‑F： 5'‑TCAATCAATTCTGTTGGTATAACTATGATTG ‑3'， 所述核苷酸序列为SEQ  ID  NO:1所示的核苷酸序列； Ten21945 ‑R： 5'‑GATGGAGAATTAACGAACGAACGG ‑3'， 所述核苷酸序列为SEQ  ID NO:2所示 的核苷酸序列。 2.权利要求1所述DNA标记在筛选粒重QTL  qTGW10‑21.9上高粒重等位基因的育种应 用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990247 A 2筛选水稻粒 重QTL qTGW10‑21.9上高 粒重等位基因的DNA标记 及应用 技术领域 [0001]本发明属于水稻粒重改良的遗传育种领域， 涉及控制粒重QTL的鉴定、 高粒重等位 基因的检测 和育种应用。 背景技术 [0002]水稻是我国最重要的粮食作物 之一， 提高其产量对保障国家粮食安全具有重要意 义。 水稻产量三要素包括： 有效穗数、 每穗实粒数和粒重。 挖掘控制水稻粒重的有利等位基 因是进行水稻粒重改良的基础。 目前， 从水稻自然变异群体中已经克隆了24个控制粒重和 粒形的数量性状座位(QTL)， 分布在除第4、 11和12染色体外的其余9条染色体上。 它们中的 大部分有利等位基因都可以在现代水稻改良品种中被检测到， 说明这些基因已广泛应用于 育种实践， 对水稻粒重和粒 形的改良起了 重要作用。 [0003]通过分子生物学技术将目的有利等位基因导入优良的水稻品种是定向改良的重 要手段。 在过去近二十多年中， 分子标记辅助选择是进 行定向改良的关键技术， 特别是在抗 病虫方面取得很大进展。 挖掘 控制粒重的QTL， 并开发与其紧密连锁的DNA标记是应用分子 标记辅助选择改良水稻粒重的基础。 专利权人从骨干亲本特青和I R24衍生群体精细定位到 1个新的控制粒重的QTL  qTGW10‑21.9， IR24等位基因增加粒重。 在此基础上， 专利权人开发 了1个用于检测qTGW10 ‑21.9上IR24高粒重等 位基因的DNA标记， 用于水稻粒重改良。 发明内容 [0004]本发明解决的技术问题： 开发了1个可准确识别水稻粒重QTL  qTGW10‑21.9座位上 IR24高粒重等位基因的DNA标记， 通过实例证明该标记可有效应用于高粒重水稻品种的选 育。 [0005]本发明采用以下技 术方案： [0006]根据qTGW10 ‑21.9精细定位所在染色体区间， 查找特青和 IR24在该区间内的序列 差异， 应用软件Oligo  7.0设计1个可准确识别qTGW10 ‑21.9座位上IR24高粒重等位基因的 DNA标记， 命名为Ten21945， 其中Ten代表第10染色体， 数字代表染色体上的具体位置为 21.945Mb， 其特征在于其引物： [0007]Ten21945 ‑F： 5'‑TCAATCAATTCTGTTGGTATAACTATGATTG ‑3'， 如序列表SEQ  ID No:1 所示； [0008]Ten21945 ‑R： 5'‑GATGGAGAATTAACGAACGAACGG‑3'， 如序列表SEQ  ID NO.2所示。 [0009]通过该特异性DNA标记 识别qTGW10 ‑21.9座位上高粒重等 位基因的简要步骤如下： [0010](1)DNA提取： 采用常规方法提取对照IR24和待检测水稻材 料的基因 组DNA； [0011](2)PCR扩增： 以I R24和待测材料的DNA为模板， 应用Ten21945进 行扩增， PCR反应程 序按照购买的Taq  DNA聚合酶说明书设置， 引物退火温度为5 5℃； [0012](3)凝胶电泳： PC R产物应用浓度为6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离， 并通说　明　书 1/2 页 3 CN 114990247 A 3