(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210494864.8 (22)申请日 2022.05.07 (71)申请人 英科新创 （苏州） 生物科技有限公司 地址 215124 江苏省苏州市工业园区星湖 街218号生物纳米园B9、 B10 (72)发明人 马娇龙　王志宇　梅亚军　李兴翠　 樊俊　陈红干　姚忻岑　陆世达　 陈梁　 (74)专利代理 机构 苏州所术专利商标代理事务 所(普通合伙) 32473 专利代理师 孙兵 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于快速检测猫瘟病毒的试剂或试剂盒、 其 应用及检测方法 (57)摘要 本申请涉及一种用于快速检测猫瘟病毒的 试剂或试剂盒、 其应用及检测方法， 该试剂或试 剂盒包括引物探针组， 该引物探针组针对VP2基 因， 包括上游引物FPVF、 下游引物FPVR 以及探针 FPVP， 所述FPVF、 FPVR和FPVP的序列分别如SEQ   ID NO.1、 SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 该试 剂或试剂盒还包括PCR反应液和核酸释放剂， 并 基于特定的反应程序条件实现快速荧光PCR扩 增。 通过该方案， 在保证检测精确度的前提下， 能 够简化检测流程及检测时间， 显著提高检测效 率。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图4页 CN 114959111 A 2022.08.30 CN 114959111 A 1.一种用于快速检测猫瘟病 毒的试剂 或试剂盒， 其特征在于， 包括引物探针组， 所述引 物探针组针对VP2 基因， 包括上游引物FPVF、 下游引物FPVR以及探针FPVP， 所述FPVF、 FPVR和 FPVP的序列分别如SEQ  ID NO.1、 SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 2.如权利要求1所述的试剂 或试剂盒， 其特征在于， 还包括用于检测猫管家基因 的管家 基因引物探针组， 所述管家基因引物探针组包括上游引物 IF、 下游引物 IR以及探针IP， 所述 IF、 IR和IP的序列分别如SEQ  ID NO.4、 SEQ ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示。 3.如权利 要求2所述的试剂或试剂盒， 其特征在于， 所述引物FPVP和IP的5 ’端标记有荧 光基团， 所述引物FPVP和IP的3 ’端标记有淬灭基团； 所述FPVP和IP分别标记不同的荧光基 团。 4.如权利要求3所述的试剂或试剂盒， 其特征在于， 所述荧光基团选自HEX、 FAM、 TET、 CF532、 JOE、 TAMRA、 ROX、 CY3、 CY5、 Texas  Red、 NED、 Alexa  Flour或VIC中的至少一种； 和/或， 所述淬灭基团选自MGB、 TAMRA、 BHQ1、 BHQ2、 BHQ3或QSY4中的至少一种。 5.如权利要求1至4中任一项所述的试剂 或试剂盒， 其特征在于， 还包括核酸释放剂， 所 述核酸释放剂包括10 ‑500mM HEPES， 1‑100mM氯化钾,5 ‑50mM氨基三乙酸， 0.1 ‑3.5mM 3‑[3‑ (胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐， 0.01 ‑1M氢氧化钠或氢氧化钾， 1 ‑50mM三聚磷酸钠、 0.2‑30mM十二烷基苯磺酸钠， 1 ‑50mM乙二胺四乙酸 二钠溶液。 6.权利要求1至 5中任一项所述的试剂或试剂盒在制备检测猫瘟病毒的产品中的应用。 7.一种不以疾病诊断治疗为目的的猫瘟病毒的检测方法， 其特征在于， 采用如权利要 求1至5中任一项所述的试剂或试剂盒对待测样本进行快速荧光PCR扩增， 再对扩增产物进 行检测判断。 8.如权利要求7所述的检测方法， 其特征在于， 在对所述待测样本进行快速荧光PCR扩 增前， 还包括将所述待测样 本置于核酸释放剂中， 混匀静置； 其中， 所述核酸释放剂包括 10‑ 500mM HEPES， 1‑100mM氯化钾,5 ‑50mM氨基三乙酸， 0.1 ‑3.5mM 3‑[3‑(胆酰胺丙基)二甲氨 基]丙磺酸内盐， 0.01 ‑1M氢氧化钠或氢氧化钾， 1 ‑50mM三聚磷酸钠、 0.2 ‑30mM十二烷基苯磺 酸钠， 1‑50mM乙二胺四乙酸 二钠溶液。 9.如权利要求7所述的检测方法， 其特征在于， 所述快速荧光PCR扩增的反应程序条件 为： 预变性反应： 92 ‑98℃反应1 ‑5min； 扩增反应： 92 ‑98℃ 1‑15s， 55‑60℃ 5s‑25s， 30‑ 45cycles。 10.如权利要求7所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测判断的标准为： 如果FPV通道 有明显扩增曲线， 则判定为阳性； 如果FPV通道没有扩增曲线则判定为阴性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959111 A 2用于快速检测猫瘟病毒 的试剂或试剂盒、 其应用及检测方 法 技术领域 [0001]本申请涉及一种用于快速检测猫瘟病毒的试剂或试剂盒、 其应用及检测方法， 属 于生物技 术领域。 背景技术 [0002]猫瘟热病毒(FelinePanleukopeniaVirus， FPV)又称猫泛白细胞减少症是由猫细 小病毒引起的一种急性高度接触性传染病， 该病毒属于细小病毒。 细小病毒是直径18至28 纳米的单链DNA， 属于最小的病毒。 FPV可感染所有猫科动物， 甚至浣熊、 狐狸与貂。 FPV多发 于1岁以下的幼猫， 以3～5个月龄未接种疫苗的幼猫最易感， 感染率可达70％， 病死率为 50％～60％， 成年猫感染后通常呈隐性， 一般在经历各种应激情况、 免疫力低下或者感染其 他细菌或寄生虫时， 会转变为显性感染。 FPV会引起猫出现高热、 呕吐、 腹泻、 厌食、 共济失调 以及全身性白细胞数量锐减。 本病通过直接接触及 间接接触而传播， 患病的猫为本病的主 要传染源， 病猫的呕吐物尿液、 唾液、 鼻和眼分泌物尤其是粪便中含有大量的病毒。 所以一 旦猫群中出现发病 病例， 极难彻底 清除。 [0003]目前医院的检验方式除血液生化学等检测外， 还会对病原体进行检测， 如胶体金 免疫层析法、 荧光免疫层析等， 此类方法均利用抗原 抗体反应检测猫瘟病毒抗原， 但是免疫 反应的灵敏度有限， 漏检率高， 经常出现假阴性， 因此医生还会对胶体金阴性的疑似病例进 行核酸检测而确诊， 无形中增加时间及资金成本。 目前核酸检测的方法也很多， 如聚合 酶链 式反应(Polymerase  Chain Reaction， PCR)、 恒温扩增反应等， 其中PCR以其出色的灵敏度 及特异性成为检测猫瘟病毒最理想的方法。 但是传统的检测方案中， 核酸的提取一般采用 磁珠法或柱 提法， 再加上核酸扩增时间， 整个流程在1.5 ‑2h之间， 耗时耗力， 成本较高； 且由 于宠物医院检验人员并未进行过专业的PCR知识及技能的培训， 因此此类方案并不被终端 认可和接受。 而恒温扩增方式检测， 如重组酶聚合酶链反应(Recombinase  Polymerase   Amplification， RPA)或者环介导的等温扩增反应(Loop ‑mediated  isothermal   amplification， LAMP)技术， 检测时间短， 但是灵敏度及特异性均不及PCR， 且成本较高， 终 端用户不能接受。 [0004]因此建立一种低成本、 快速、 准确、 操作简单的检测猫瘟病毒的方法尤为重要， 可 为临床诊断和治疗提供技 术支持。 发明内容 [0005]本申请的目的在于提供一种用于快速检测猫瘟病毒的试剂或试剂盒、 其应用及检 测方法， 能够简化检测流 程及检测时间， 显著提高检测效率。 [0006]第一方面， 本申请提供一种用于快速检测猫瘟病毒的试剂或试剂盒， 其包括引 物 探针组， 上述引物探针组针对VP2基因， 包括上游引物FPVF、 下游引物FPVR以及探针FPVP， 上 述FPVF、 FPVR和FPVP的序列分别如SEQ  ID NO.1、 SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 [0007]通过本申请实施例的技术方案， 上述试剂或试剂盒能有效扩增VP2基因， 并且， 上说　明　书 1/10 页 3 CN 114959111 A 3