(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210494697.7 (22)申请日 2022.05.07 (71)申请人 南昌师范学院 地址 330032 江西省南昌市经济技 术开发 区瑞香路8 89号 (72)发明人 马荆鄂　周敏　许继国　朱学农　 谭玉文　杨艳北　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 刘芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与宁都黄鸡睾丸性状相关的分子标记 及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与宁都黄鸡睾丸性状相 关的分子标记及其应用， 涉及基因工程技术领 域。 所述分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1 所示， 所述 分子标记有三个SNP位点， SNP1位于 所 述分子标记的509bp处， 存在T/C突变， SNP2位于 所述分子 标记的， 653bp处， 存在G/A突变， SNP3位 于所述分子标记的1039bp处， 存在C/T 突变。 本发 明从GH基因5 ’调控区筛选得到了3个SNP位点， 并 将其与宁都黄鸡睾丸性状进行相关性分析， 从而 得到了适合宁都黄鸡睾丸性状选育的分子标记， 为地方鸡种公鸡选育及标记辅助选择提供了依 据。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图1页 CN 114703297 A 2022.07.05 CN 114703297 A 1.一种与宁都黄鸡睾丸性状相关的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记的核苷酸序 列如SEQ ID NO.1所示， 所述分子标记有三个SNP位点， SNP1位于所述分子标记的1039bp处， 存在C/T突变， SNP2位于所述分子标记的， 653bp处， 存在G/A突变， SNP3位于所述分子标记的 509bp处， 存在T/ C突变。 2.根据权利 要求1所述的分子标记， 其特征在于， 所述SNP1的基因型为TT、 TC或CC， 所述 SNP2的基因型为G G或GA， 所述SNP3的基因型为T T或TC。 3.一种权利要求1或2所述的分子标记的扩增引物对， 其特征在于， 所述引物对包括如 SEQ ID NO.2所示的上游引物和如SEQ  ID NO.3所示的下游引物。 4.一种利用权利要求1或2所述的分子标记鉴别宁都黄鸡睾丸性状的方法， 其特征在 于， 包括以下步骤： (1)提取待测宁都黄鸡基因组DNA， 利用权利要求3所述的引物对进行PCR扩增， 获得扩 增产物； (2)对所述扩增产物测序， 检测SNP1 ‑3位点的基因型， 当SNP1位点的基因型为TC时， 睾 丸重量大于TT和CC； 当SNP2位点的基因型为GG时， 睾丸重量大于GA； 当SNP3位点的基因型为 TT时， 睾丸重量大于TC 。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的体系为： DNA模板1μL， 2*PCR   mix 7.5 μL， 混合引物 2 μL， H2O补至15 μL。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的扩增程序 为： 95℃ 3min； 94 ℃ 15s， 55℃ 15s， 72℃  30s， 20个循环； 72℃  3min。 7.一种鉴别宁都黄鸡睾丸性状的试剂盒， 其特 征在于， 包 含权利要求3所述的引物对。 8.一种利用权利要求1或2所述的分子标记筛选具有优良睾丸性状的宁都黄鸡的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： (1)提取待测宁都黄鸡基因组DNA， 利用权利要求3所述的引物对进行PCR扩增， 获得扩 增产物； (2)对所述扩增产物测序， 检测SNP1 ‑3位点的单倍型组合， 当SNP1 ‑3位点的单倍型组合 为CGT/CAT时， 即为所述具有优良睾丸性状的宁都黄鸡。 9.一种筛选具有优良睾丸性状的宁都黄鸡的试剂 盒， 其特征在于， 包含权利要求3所述 的引物对。 10.一种如权利要求3所述的引物对、 如权利要求7所述的试剂 盒或如权利要求9所述的 试剂盒在宁都黄鸡遗传育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703297 A 2一种与宁都黄鸡睾丸性状相关的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及基 因工程技术领域， 特别是涉及一种与宁都黄鸡睾丸性状相关的分子 标记及其应用。 背景技术 [0002]睾丸是公鸡的重要生殖器官， 具有产生精子和 分泌雄激素的功能， 发育良好的睾 丸是获得出色繁殖力的基础。 睾丸生长发育是一个精细又复杂的过程， 受众多因素调控影 响， 其中占主导地位的是遗传调控。 GH作为垂体分泌的主要激素之一， 能够在性腺各种细胞 中表达， 参与机体性别分化、 性激素合成、 生殖细胞发生等生理过程， 是一种调节机体性腺 生长发育的重要激素。 研究表明基因上游序列中单核苷酸多态性(Single  Nucleotide   Polymorphism,SNP)丰富， 一些位点与鸡生产性状显著关联。 如果能够从GH基因5 ’调控区 SNPs入手， 筛选睾丸性状相关的遗传标记， 可为鸡繁殖力的分子辅助选育积累理论基础， 对 种公鸡科 学培育是非常必要的。 [0003]宁都黄鸡肉质鲜美、 口感丰富， 是优良的江西省地方品种。 它具有早熟性， 公鸡最 早在20日龄左右开啼， 55 ‑70日龄性成熟， 是地方鸡种质资源中性成熟最早品种之一。 鸡的 性成熟标志着繁殖活动的开始， 是重要的经济性状。 研究和培育早熟型个体是优质肉鸡育 种的重要方向。 生产中公鸡的性早熟主要通过鸡冠来判别， 鸡冠作为重要的第二性征， 其 发 育程度与性腺发育紧密关联， 但尚缺乏宁都黄公鸡睾丸性状选育的分子标记。 由此， 运用分 子遗传标记选择方法， 筛选GH基因5 ’调控区与宁都黄公鸡睾丸性状相关联的SNPs， 选育高 繁殖力的优质鸡， 有重要的商业 价值。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种与宁都黄鸡 睾丸性状相关的分子标记及其应用， 以解决 上述现有技术存在的问题， 本发明从GH基因5 ’调控区筛选得到了3个SNP位点， 并将其与宁 都黄鸡睾丸性状进行相关性分析， 从而得到 了适合宁都黄鸡睾丸性状选 育的分子标记。 [0005]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0006]本发明提供一种与宁都黄鸡睾丸性状相关的分子标记， 所述分子标记的核苷酸序 列如SEQ ID NO.1所示， 所述分子标记有三个SNP位点， SNP1位于所述分子标记的1039bp处， 存在C/T突变， SNP2位于所述分子标记的， 653bp处， 存在G/A突变， SNP3位于所述分子标记的 509bp处， 存在T/ C突变。 [0007]进一步地， 所述SNP1的基因型为TT、 TC或CC， 所述SNP2的基因型为GG或GA， 所述 SNP3的基因型为T T或TC。 [0008]本发明还提供一种上述分子标记的扩增引物对， 所述引物对包括如SEQ  ID NO.2 所示的上游引物和如SEQ  ID NO.3所示的下游引物。 [0009]本发明还提供一种利用上述的分子标记鉴别宁都黄鸡睾丸性状的方法， 包括以下 步骤：说　明　书 1/7 页 3 CN 114703297 A 3