(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210495172.5 (22)申请日 2022.05.07 (71)申请人 四川大学华西医院 地址 610041 四川省成 都市武侯区国学巷 37号 (72)发明人 刘书云　刘敬平　 (74)专利代理 机构 北京一枝笔知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11791 专利代理师 张庆瑞 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 47/42(2017.01)A61K 47/46(2006.01) (54)发明名称 一种长循环肾靶向细胞外囊泡的构建及其 应用 (57)摘要 本发明涉及药物 递送(载体)领域， 特别涉及 一种长循环肾靶向细胞外囊泡的构建及其应用。 本发明提供了一种ABP ‑Lamp2b融合表 达载体， 以 及由所述的融合载体转染细胞后产生表面展示 有ABP的细胞外囊 泡(ABP‑EVs)。 本发明还 提供了 ABP‑EVs的基本 特征鉴定， ABP ‑EVs与白蛋白结合 的检测。 此外， 本发明还提供了前述细胞外囊泡 在小鼠体内分布的检测。 其中， 所述的载体转染 293T细胞后， 可以将ABP 展示在细胞外囊 泡表面， 所述细胞外囊泡因表面携带ABP可以和白蛋白结 合， 延长体内循环时间， 提高细胞外囊泡在多器 官的组织 驻留， 可用于多种疾病的给药系统。 权利要求书2页 说明书10页 序列表6页 附图4页 CN 114908087 A 2022.08.16 CN 114908087 A 1.编码白蛋白结合肽段(ABP)的核酸分子， 其特 征在于， 其具有： (I)、 如SEQ  ID No.1所示的核苷酸序列； (II)、 如(I)所述的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸获得的核苷酸序 列， 且与(I)所述的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列； 或 (III)、 与如(I)或(I I)所述的核苷酸序列具有90％以上同一 性的核苷酸序列； 所述取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸中的多个为1～ 9个。 2.ABP‑Lamp2b融合基因， 其特 征在于， 其结构包括： Lamp2b的N端 ‑ABP‑Lamp2b的C端； 所述ABP‑Lamp2b融合基因具有： (i)、 如SEQ  ID No.2所示的核苷酸序列； (ii)、 如(i)所述的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸获得的核苷酸序 列， 且与(i)所述的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列； 或 (iii)、 与如(i)或(i i)所述的核苷酸序列具有90％以上同一 性的核苷酸序列； 所述取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸中的多个为1～ 9个。 3.如权利要求2所述的ABP ‑Lamp2b融合基因， 其特征在于， 在所述Lamp2b的N端插入糖 基化基序GNSTM， 加入3个氨基酸spacer， 连接ABP后再加入10个氨基酸spacer； 和/或 在所述Lamp2b的C端插 入HA标签。 4.如权利要求3所述的ABP ‑Lamp2b融合基因， 其特征在于， 其结构包括GNSTM ‑3‑ABP‑ 10‑Lamp2b‑HA， 具有： (a)、 如SEQ  ID No.3所示的核苷酸序列； (b)、 如(a)所述的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸获得的核苷酸序 列， 且与(a)所述的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列； 或 (c)、 与如(a)或(b)所述的核苷酸序列具有90％以上同一 性的核苷酸序列； 所述取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸中的多个为1～ 9个。 5.包含如权利要求2 ～4任一项所述ABP ‑Lamp2b融合基因的表达载体。 6.如权利要求6所述的表达载体， 其特征在于， 如权利要求2～5任一项所述的ABP ‑ Lamp2b融合基因在Nh e1和BamH1克隆位点处插入载体pcDNA 3.1 Hygro(+)， 获得的融合基因 表达载体为pcDNA  GNSTM‑3‑ABP‑10‑Lamp2b‑HA， 具有： ①、 如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列； ②、 如①所述的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸获得的核苷酸序列， 且与①所述的核苷酸序列功能相同的核苷酸序列； 或 ③、 与如①或②所述的核苷酸序列具有90％以上同一 性的核苷酸序列； 所述取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸中的多个为1～ 9个。 7.转化或转染有如权利要求6或7 所述表达载体的宿主。 8.如权利要求2～5任一项所述ABP ‑Lamp2b融合基因、 如权利要求6或7所述表达载体、 如权利要求8所述宿主直接或间接在制备 药物递送载体或药物中的应用。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述药物递送载体包括： 取如权利要求6或7 所述表达载体转染外泌体和/或细胞外囊泡来源细胞后生产得到的外泌体和/或细胞外囊 泡。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114908087 A 210.外泌体和/或细胞外囊泡， 其特征在于， 其制备方法包括： 取如权利要求5或6所述表 达载体转染外泌体和/或细胞外囊泡 来源细胞后， 培 养， 收集外泌体和/或细胞外囊泡。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114908087 A 3