(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221049582 2.6 (22)申请日 2022.05.07 (71)申请人 江西省农业科 学院农产品质量 安全 与标准研究所 地址 330200 江西省南昌市青云谱区南 莲 路602号 (72)发明人 张标金　严松　昌晓宇　涂田华　 聂元元　龙起樟　陆文英　刘清兰　 董秋洪　严寒　 (74)专利代理 机构 北京三聚阳光知识产权代理 有限公司 1 1250 专利代理师 张均莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12Q 1/6869(2018.01) C12Q 1/6816(2018.01) (54)发明名称 一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应 用 (57)摘要 本发明涉及水稻分子生物学及遗传育种技 术领域， 具体涉及一种水稻富硒性状紧密连锁分 子标记及应用。 所述分子标记位于水稻第6号染 色体， 通过引物对1和引物对2扩增得到， 获得的 目标扩增产物为13 7～139bp的片段、 127～129bp 的片段、 119～121bp的片段和131～133bp的片段 中的任意两个。 通过本发明提供的分子标记对水 稻富硒性状主要关联区域具有很好的鉴别效果， 鉴别方法简单， 在常规的分子生物学实验室即可 实现。 且本发 明提供的分子标记可以筛选富硒水 稻种质资源或选育富硒水稻新品种， 快速筛选出 具有富硒基因的水稻品种。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 114717356 A 2022.07.08 CN 114717356 A 1.一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记， 其特征在于， 所述分子标记位于水稻第6号染 色体， 通过引物对1和引物对2扩增得到， 获得的目标扩增产物为137～139bp的片段、 127～ 129bp的片段、 119～121bp的片段和131～133bp的片段中的任意两个， 其中， 引物对1的正向 引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 引物 对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4 所示。 2.一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物， 其特征在于， 所述检测引物包括 引物对1和引物对2， 其中， 引物对1的正向引物的核苷 酸序列如S EQ ID NO.1所示， 反向引物 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示。 3.一种如权利要求1所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记或权利要求2所述的水稻 富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物在富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富 硒水稻新品种中的应用。 4.一种富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种试剂盒， 其特征在 于， 包括权利要求2所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物。 5.根据权利要求4所述的富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种 试剂盒， 其特征在于， 还包括： 引物对1和引物对2各自对应的PCR扩增体系， 以10 μL为计， 均 为： 10×PCR buffer， 1 μL； dNTP， 每种碱基的浓度为2mM， 1 μL； Mgcl2， 浓度为25mM， 0.8 μL； Taq酶， 0.5U； 正向引物， 浓度为10 μM， 0.2 μL； 反向引物， 浓度为10 μM， 0.2 μL； DNA模板， 1 μL； 加双蒸水至10 μL。 6.一种富硒水稻种质资源筛 选方法， 其特 征在于， 包括： 步骤1： 提取待测水稻DNA； 步骤2： 以待测水稻DNA为模板， 分别使用权利要求1中的引物对1和引物对2进行PCR扩 增反应， 得到扩增产物； 步骤3： 检测扩增产物， 根据扩增产物的长度， 判断是否为具有富硒性状的水稻品种， 若 两引物对扩增得到的扩增产物长度分别为137～139bp和127～129bp， 则为具有富硒性状的 水稻品种， 若两引物对扩增得到的扩增产物长度分别 为119～121bp和131～133bp， 则为具 有低硒性状的水稻品种。 7.如权利要求6富硒水稻种质资源筛选方法， 其特征在于， 步骤2中， 所述PCR扩增反应 的条件为94℃ 预变性5min； 94℃变性60s， 53℃退火60s， 72℃延伸60s， 35个循环； 最后72℃ 延伸7min， 4℃保存。 8.如权利要求6～7任一项所述的富硒水稻种质资源筛选方法， 其特征在于， 步骤2中， 引物对1和引物对2各自PCR扩增采用的反应体系为10 μL， 均包括： 10 ×PCR buffer为1 μL， 每权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114717356 A 2种碱基浓度为2mM的dNTP为1μL， 25mM的Mgcl2为0.8 μL， Taq酶为0.5U， 10 μM的正向引物0.2 μ L， 10 μM的反向引物0.2 μL， DNA模板为1 μL， 加双蒸水至10 μL。 9.一种选 育富硒水稻新品种的方法， 其特 征在于， 包括： 步骤1： 选取供体亲本和受体亲本； 所述供体亲本为利用权利要求6 ‑8任一项所述的富 硒水稻种质资源筛选方法鉴别为具有富硒性状的水稻品种， 所述受体亲本为利用权利要求 6‑8任一项所述的富硒水稻种质资源筛 选方法鉴别为具有低硒性状的水稻品种； 步骤2： 将供体亲本与受体亲本进行杂交得到杂交一代， 为F1代， F1代混合收种， 自交繁 殖至杂交二代， 为F2 代； 步骤3： 种植F2代， 提取F2代单株DNA， 用权利要求1中的引物对1和引物对2进行PCR扩 增， 检测扩增产物长度， 获得具有富硒性状的纯合单株、 具有低硒性状的纯合单株和杂合单 株； 所述具有富硒性状的纯合单株为： 扩增产物长度包 含137～139bp和127～12 9bp； 所述具有低硒性状的纯合单株为： 扩增产物长度包 含119～121bp和131～13 3bp； 所述杂合单株为： 扩增产物长度包含137～139bp和119～121bp， 或者扩增产物长度包 含127～129bp和131～133bp， 或者扩增产物长度包含137～139bp和131～133bp， 或者扩增 产物长度包 含119～121bp和127～12 9bp； 步骤4： 选择具有富硒性状的纯合单株收获种子， 种植F3代， 重复步骤3的步骤， 筛选具 有富硒性状的纯合单株， 重复上述过程直至F6～7代， 得到具有富硒性状一致的单株， 获得 了富硒水稻新品种。 10.根据权利要求9所述的选育富硒水稻新品种的方法， 其特征在于， 所述引物对1和引 物对2各自对应的PCR扩增体系， 以10 μL 为计， 均为： 10×PCR buffer， 1 μL； dNTP， 每种碱基的浓度为2mM， 1 μL； Mgcl2， 浓度为25mM， 0.8 μL； Taq酶， 0.5U； 正向引物， 浓度为10 μM， 0.2 μL； 反向引物， 浓度为10 μM， 0.2 μL； DNA模板， 1 μL； 加双蒸水至10 μL； 可选的， 步骤3中， 所述PCR扩增反应的条件为94℃预变性5min； 94℃ 变性60s， 53℃退火 60s， 72℃延伸6 0s， 35个循环； 最后72℃延伸7mi n， 4℃保存。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114717356 A 3