(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210497969.9 (22)申请日 2022.05.07 (71)申请人 中山大学中山眼科中心 地址 510060 广东省广州市越秀区先烈南 路54号 (72)发明人 赵凌　赵鸣雷　商必志　 (74)专利代理 机构 广州三环 专利商标代理有限 公司 44202 专利代理师 刘孟斌 (51)Int.Cl. C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/12(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定人性别的试剂盒 (57)摘要 本发明提供一种鉴定人性别的PCR的引物组 合， 所述引物组合由第一引物对和第二引物对组 成， 所述第一引物对包括如SEQ  ID NO:5和SEQ   ID NO:7所述的核苷酸序列， 所述第二引物对如 SEQ ID NO:13和SEQ  ID NO:14所示的核苷酸序 列。 本发明用于鉴定人性别的PCR的引物组合， 特 异性好， 扩增 效率高， 能很好的应用于人的性别 鉴定； 本发明的该鉴定方法操作简便， 鉴定效率 高， 且该鉴定方法具有很高的敏 感性、 特异性、 准 确性以及应用性； 本发明的鉴定方法的准确率可 达到100％。 权利要求书1页 说明书9页 序列表3页 附图6页 CN 115404271 A 2022.11.29 CN 115404271 A 1.一种鉴定人性别的PCR的引物 组合， 其特征在于， 所述引物 组合包括第 一引物对和第 二引物对， 所述第一引物对包括如SEQ  ID NO:5和SEQ  ID NO:7所述的核苷酸序列， 所述第 二引物对如SEQ  ID NO:13和SEQ  ID NO:14所示的核苷酸序列。 2.如权利要求1所述的引物组合， 其特征在于， 所述第一引物对扩增的目的片段为如 SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列； 所述第二引物对扩增的目的片段为如SEQ  ID NO:15所示 的核苷酸序列。 3.一种鉴定人性别的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 提取待检样本的DNA作为模板， 用第一引物对和第二引物对对所述DNA进行PCR扩增， 扩增反应结束后将PCR产物进行电泳 分析， 鉴定结果 为当PCR产物出现两条 带时， 结果 为男性， 出现仅一条 带时， 结果 为女性。 4.如权利要求3所述的鉴定人性别的方法， 其特征在于， 若待检样本的DNA出现一条 403bp的条带为女性， 若同时出现40 3bp和248bp的条 带为男性。 5.如权利要求3所述的鉴定人性别的方法， 其特征在于， 所述PCR反应中， DNA浓度为 15ng～15pg/ μl。 6.如权利要求3所述的鉴定人性别的方法， 其特征在于， 所述PCR反应中， 引物浓度为5 ～20 μmol/L。 7.用于鉴定人性别的基因， 其特征在于， 所述基因包括如SEQ  ID NO:15所示的核苷酸 序列和如SEQ  ID NO:16所示的核苷酸序列。 8.一种鉴定人性别的试剂 盒， 其特征在于， 包括鉴定如权利要求7所述的的基因 的引物 组合。 9.如权利要求8所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述引物组合包括第 一引物对和第 二引物 对， 所述第一引物对包括如SEQ  ID NO:5和SEQ  ID NO:7所述的核苷酸序列， 所述第二引物 对如SEQ ID NO:13和SEQ  ID NO:14所示的核苷酸序列。 10.如权利要求1所述的鉴定人性别的PCR的引物组合或者如权利要求7所述的基因在 鉴定人性别方面的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115404271 A 2一种鉴定人性别的试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及基因鉴定技术领域， 更具体地， 涉及一种鉴定人性别的引物、 试剂盒以 及方法。 背景技术 [0002]利用PCR技术对人类个体、 人源细胞株性别鉴定是目前应用最广泛的方法。 PCR即 聚合酶链式反应(Polymerase  Chain Reaction)， 是指在DNA聚合酶催化下， 以母链DNA为模 板， 以特定引物为延伸起点， 通过变性、 退火、 延伸等步骤， 体外复制出与母链模板DNA互补 的子链DNA的过程。 该技术是一项DNA体外合成放大技术， 能快速特异地在体外扩增目的 DNA。 利用这一方法对性别特异基因(如Y染色体SRY基因)进 行扩增检测， 根据扩增产 物在男 女性别的不同片段大小或信号强弱， 进行检测结果分析， 以判断受检个体的性别。 目前， 根 据扩增方法和循环参数的不同， 可将常用的PCR性别鉴定方法分为普通PCR法、 双重或多重 PCR法、 巢式PCR法， 以及荧 光定量PCR法等。 [0003]其中， 双重或多重PCR法， 即通过设计并合成一对性别特异引物和至少一对 持家基 因进行扩增的内参引物， 以微量DNA为模板， 在一定条件下将两对或多对引物同时在一个 PCR反应体系中进行扩增 检测， 以内参引物的扩增产物作为扩增反应发生与否作为阳性对 照(若内参引物条带没有出现， 则认为PCR反应没有发生， 检测无效)： 在内参引物条带出现 的前提下， 同时出现男性特异条 带为男性， 如果出现女性特异条 带则为女性。 [0004]利用双重或多重PCR法检测性别， 虽然可以减少假阴性结果的发生， 但同时在一个 PCR反应体系中进行两对或更多对引物的扩增反应， 增加了引物内部、 引物间、 引物与模板 间竞争作用， 增加了检测分析的难度， 不利于性别的准确快速检测。 该方法是通过设置内参 引物避免了假阴性结果的发生， 但在一次P CR反应中只加入男性或女性的性别特异引物， 有 些时候需要两次PCR来确定样本是来 自男性还是女性。 因此， 寻求一种简单快速一次性PCR 来鉴定样本性别的方法成为本领域亟 待解决的技 术问题。 发明内容 [0005]为了解决上述目的， 本发明提供了于一步法鉴定人性别的PC R的引物组合， 该引物 组合特异性好， 扩增效率高， 能很好的应用于人性别的鉴定， 避免了假阴性的出现， 提高了 鉴定的准确性。 [0006]本发明的第一个目的在于提供一种鉴定人性别的PCR的引物组合， 所述引物组合 包括第一引物对和第二引物对， 所述第一引物对包括如SEQ  ID NO:5和SEQ  ID NO:7所述的 核苷酸序列， 所述第二引物对如SEQ  ID NO:13和SEQ  ID NO:14所示的核苷酸序列。 [0007]通常说来， 每增加一个核昔酸引物特异性会提高4倍， 这样， 大多数应用的最短引 物长度为 18个核昔酸。 引物长度的上限并不很重要， 主要与反应效率有关。 一般引物的序列 中， G+C含量一般为40％ ‑60％， 一对引物的GC含量和Tm值应该协调。 本发 明的引物组合中的 引物G+C含量均控制在适宜的范围内， 且碱基分布随机， 因而具有适中的解链温度， 便于扩说　明　书 1/9 页 3 CN 115404271 A 3