(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210485392.X (22)申请日 2022.05.06 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510000 广东省广州市天河区五山 (72)发明人 李红梅　赵昌滨　胡博文　张细权　 罗庆斌　张德祥　聂庆华　罗文　 黎镇辉　 (74)专利代理 机构 广州世超知识产权代理事务 所(普通合伙) 44498 专利代理师 梅伟红 (51)Int.Cl. C12Q 1/6869(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与黄羽肉鸡腹脂性状相关的分子标记 及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与黄羽肉鸡腹脂性状相 关的分子标记及其应用。 所述分子标记的核苷酸 序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述分子标记的突变 位于其第七外显子g.8419598  C>T处。 本发明发 现由于DKK3基因启动子区域突变影响黄羽肉鸡 的腹脂性状。 因此， 所述本发明分子标记方法可 应用于选育腹脂沉积比较少的个体， 剔除鸡腹脂 沉积严重的个体， 提取待检测黄羽肉鸡的DNA， 通 过目的片段的获得及测序利用正反向引物对通 过PCR扩增待测鸡的DNA， 将获得的产物进行测 序， 分析序列碱基， 根据分析结果， 育种时选 择保 留判定为CT基因型的个体。 所述分子标记有利于 选育优势杂合基因型CT型黄羽肉鸡， 减少鸡的腹 脂沉积。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114790477 A 2022.07.26 CN 114790477 A 1. 一种与黄羽肉鸡腹脂性状相关的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记的核苷酸序 列如SEQ ID NO:1所示， 所述分子标记位于鸡DKK3基因中第七外显子g.8419598  C>T处的突 变。 2.根据权利要求1所述的一种与黄羽肉鸡腹脂性状相关的分子标记， 其特征在于， 所述 分子标记在剔除鸡腹脂沉积严重的个 体中的应用。 3.根据权利要求2所述剔除鸡腹脂沉积严重的个体的分子标记方法， 其特征在于， 所述 分子标记方法的具体步骤如下： S1.根据鸡DKK3基因序列， 设计正反向引物对， 获得扩增引物： 正向引物F （SEQ  ID NO:2） ： 5’ ‑  GGTCTTCTGTGGTGGACCC  ‑3’ 反向引物R （SEQ  ID NO:3） ： 5’ ‑  CTGAAATGGGTGACTGAG GTG  ‑3’ S2. 利用步骤S1所得的扩增引物进行鸡基因组DNA的PCR扩增， 获得扩增产物作为分子 标记的核苷酸序如SEQ  ID NO:1所示， 对获得的产物进行测序， 分析序列碱基； S3.对步骤S2所 得的扩增产物进行电泳分离， 获得分离产物； S4.对步骤S3获得的分离产物进行基因型分析， 获得鸡腹脂性状的有利基因型， 得到分 子标记的突变位于其第七外显子g.8419598  C>T处， 所述有利基因型为CT基因型的个体， 所 述鸡腹脂性状包括鸡的腹脂 重和腹脂率。 4.根据权利要求3所述分子标记方法， 其特征在于， 步骤S2中所述PCR扩增的反应条件 为： 94℃预变性2mi n； 94℃变性3 0s， 58℃退火3 0s， 72℃延伸40s， 34个 循环； 72℃延伸5mi n。 5. 根据权利 要求3所述的分子标记方法， 其特征在于， 步骤S2中所述PCR扩增的反应体 系如下： DNA模板             2 μL F‑DKK3              0.6 μL R‑DKK3              0.6 μL 2xTaq Master Mix    15 μL ddH2O               11.8 μL。 6.根据权利要求3所述的分子标记方法， 其特征在于， 步骤S3 中所述的电泳分离采用琼 脂糖凝胶分离， 所述 琼脂糖凝胶的浓度为1.5%。 7.根据权利 要求3所述的分子标记方法， 其特征在于， 步骤S1所述的DKK3基因序列 位于 鸡1号染色体结构上存在的脂肪酸结合区域。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114790477 A 2一种与黄羽肉鸡腹脂性状相关的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及家禽遗传育种技术领域， 具体地， 涉及一种与黄羽肉鸡腹脂性状相关 的分子标记及其应用。 背景技术 [0002]我国作为世界第一肉鸡出栏大国， 年出栏量超过了100多亿只。 随着人们对鸡肉消 费的提高， 对鸡肉品质的要求也随之提升， 适度的脂肪含量能增添肉质的风味， 提升嫩度和 多汁感。 但腹脂过度沉积则影响肉质。 当今企业的需求， 也已经从一味的追求肉鸡生长速率 转变为开 发新的低脂品系， 这是由于生产上过度的追求肉鸡的生长速率会导致鸡腹脂过度 的沉积， 且使得肥胖基因提早表达。 这不仅会使得饲料利用率降低， 饲养成本增加， 经济效 益降低， 而且影响鸡体健康和肉质的风味， 同时脂肪作为生产废料还会严重污染环境。 在我 们前期对Wnt信号通路上游调控因子中发现了一个能调控脂肪分化的关键基因DKK3， 于是 我们想探究该基因是否通过 单核苷酸多态性的改变 影响了肉鸡的脂肪性状。 [0003]DKK3 （dickkopf3） 是DKK蛋白家族的一员， 是一种分泌型糖蛋白， 在组织发育、 体内 平衡调节、 和多种病理状态中都发挥着 重要调节作用。 目前DKK3的研究多集中于肿瘤方面， 有许多研究报道， DKK3作为肿 瘤抑制剂被应用于许多人类的癌症当中， 当过表达DKK3后能 够抑制肿瘤细胞的生长。 随着研究深入， 人们又发现在直肠癌中， DKK3 反而会促进肿瘤细胞 的增长。 本研究发现DK K3的基因多态性与腹脂沉积密切相关。 [0004]单核苷酸多态性 （(Single  nucleotide polymorphism， SNP） 分子标记具有 可遗传 特性， 可广泛用于 黄羽肉鸡的大群 体规模化育种筛 选。 发明内容 [0005]本发明的目的是为了克服现有技术上的不足， 提供一种与黄羽肉鸡腹脂性状相关 的分子标记及并将其应用于腹脂性状的标记辅助选择， 本发明发现DKK3基因突变影响黄羽 肉鸡的腹脂性状。 因此， 该分子标记有利于选育优势纯合基因型黄羽肉鸡， 剔除腹脂沉积严 重的个体， 提高黄羽肉鸡的生产性能。 [0006]为了实现上述目的， 本发明是通过以下 方案予以实现的： 一种与黄羽肉鸡腹脂性状相关的分子标记， 所述分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID  NO:1所示， 所述分子标记 位于鸡DKK3基因中第七外显子g.8419598  C>T处的突变。 本发 明在 所检测黄羽肉鸡群体中， 发现基因突变型CT型腹脂沉积更少， 因此得出由于DKK3第七外显 子区域的突变导致其转录效率发生改变， 进一步影响了脂肪酸的摄取。 因此通过筛选CT型 可以获得腹脂沉积更少的个 体。 [0007]进一步地， 剔除鸡腹脂沉积严重 的个体的分子标记方法， 所述分子标记方法的具 体步骤如下： S1.根据鸡DKK3基因序列， 设计正反向引物对， 获得扩增引物： 正向引物F （SEQ  ID NO:2） ： 5’ ‑  GGTCTTCTGTGGTGGACCC  ‑3’说　明　书 1/4 页 3 CN 114790477 A 3