(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210484420.6 (22)申请日 2022.05.06 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114574629 A (43)申请公布日 2022.06.03 (73)专利权人 中国热带农业科 学院三亚研究院 地址 572000 海南省三 亚市崖州区创意产 业标准厂房二区三楼 235区 (72)发明人 赵辉　纪长绵　郭安平　张雨良　 郭运玲　郭静远　王雨　肖苏生　 (74)专利代理 机构 西安合创非凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 61248 专利代理师 白文佳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 112210622 A,2021.01.12 IN 1039MU2015 A,2015.0 5.08 CN 1094869 28 A,2019.0 3.19 审查员 颜泉梅 (54)发明名称 与番木瓜果实重量相关的SNP分子标记及应 用 (57)摘要 本发明涉及分子生物学领域， 具体涉及一种 与番木瓜果实重量相关的SNP分子标记及应用， 本发明基于GWAS分析方法发现了与番木瓜果实 重量相关的SNP分子 标记， 该分子标记位于Chr 09 染色体上的Cpa09g016360基因CDs区域， 命名为 分子标记Cp a09g016360:1846， 并确定了与番木 瓜果实重量相关的候选基因Cpa09g016360。 所述 的SNP分子标记可用于检测高果实重量番木瓜育 种材料， 辅助杂交育种， 缩短新品种培育周期， 且 检测成本较低、 不受环境限制、 检测结果准确性 高、 易重复。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图2页 CN 114574629 B 2022.08.02 CN 114574629 B 1.检测与番木瓜果实重量相关的SNP分子标记的试剂的应用， 其特征在于： 所述应用为 检测番木瓜高果实重量的育种材料， 其中， 所述SNP分子标记位于SEQ  ID No.1所示核苷酸 序列的第14 4位， 所述第14 4位碱基为G或A， 其中G G基因型的果实重量高于A A基因型。 2.检测与番木瓜果实重量相关的SNP分子标记的试剂的应用， 其特征在于： 所述应用为 预测番木瓜果实重量高低， 其中， 所述SNP分子标记位于SEQ  ID No.1所示核苷酸序列的第 144位， 所述第14 4位碱基为G或A， 其中G G基因型的果实重量高于A A基因型。 3.检测与番木瓜果实重量相关的SNP分子标记的试剂的应用， 其特征在于： 所述应用为 番木瓜果实重量高品种的选择， 其中， 所述SNP分子标记位于SEQ  ID No.1所示核苷酸序列 的第144位， 所述第14 4位碱基为G或A， 其中G G基因型的果实重量高于A A基因型。 4.检测与番木瓜果实重量相关的SNP分子标记的试剂的应用， 其特征在于： 所述应用为 番木瓜果实重量相关的分子标记辅助育种， 其中， 所述SNP分子标记位于SEQ  ID No.1所示 核苷酸序列的第14 4位， 所述第14 4位碱基为G或A， 其中G G基因型的果实重量高于A A基因型。 5.一种检测与番木瓜果实重量相关的SNP分子标记的方法， 其特征在于： 所述SNP分子 标记位于SEQ  ID No.1所示核苷酸序列的第144位， 所述第144位碱基为G或A， 以含有所述 SNP分子标记的核苷 酸序列为基础序列， 设计引物对， 以番木瓜基因组DNA 为模板进行PCR扩 增， 检测扩增产 物的基因型， 其中GG基因型的果 实重量高于AA基因型， 所述引物对的上游引 物为： 5’cttcctatcaca attcaaag’3， 下游引物为： 5 ’agggctgcttgctcccatact’3。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574629 B 2与番木瓜果实 重量相关的SNP分子标记及应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学领域， 具体涉及一种与番木瓜果实重量相关的SNP分子标 记及应用。 背景技术 [0002]番木瓜是一种热带常绿果树， 为番木瓜科番木瓜属多年生肉质草本植物， 又名乳 瓜、 石瓜、 万寿果、 番瓜、 木冬瓜、 木瓜、 莲生果。 其原产于墨西哥和中美洲， 广泛栽培于全世 界的热带和亚热带地区， 自17世纪传入我国， 主产于广东、 海南、 广西、 云南、 台湾、 福建， 四 川西昌和江西赣州也有种植。 番木瓜鲜果外形美观、 皮薄肉厚、 汁多味甜、 气味香甜、 营养丰 富。 成熟番木瓜果肉呈黄色或红色， 胡罗卜素、 番茄红素含量丰富， 具有卓越的保健效果和 重要的食用价值和工业价值。 发展番木瓜生产将极大刺激食品加工、 医药卫生、 美容保健和 养殖业等相关产业的发展， 具有重要的意 义。 [0003]分子育种有助于选择目标性状然后培育新品种。 随着遗传学的发展， 遗传标记的 方法可以作为辅助工具帮助人们进行选择， 提高育种过程中的准确性(孙德权等,  2006,  种子, 25(12): 54‑57)。 对于番木瓜的抗病毒育种研究， 随着组织培养技术不断的完善， 基 因工程技术有了很大进展。 Fitch等(1990)研究中采用基因枪法培育出转基因番木瓜植株， 然后进一步培育并成功得到具有稳定的遗传性状的相关愈伤组织。 周鹏等(1997,  热带作 物学报,16(2):  66‑69)研究了  PRV‑CP‑SN 的双价基因转入进番木瓜中， 成功得到了转基 因的植株。 周鹏和郑学勤(1996,  热带作物学报,  17(2): 84‑87)利用农杆菌介导法得到的 转基因植株可以成功表达  Sm 株 CP 基因。 赵志英等(1998,  热带作物学报,  19(2): 20‑ 26)利用基因工程技术， 把  PRV RNA 的核酶相关基因转入了番木瓜中， 成功得到了转基因 植株， 该研究也进行了人工接种相 应攻毒研究。 国内中山大学的生命科学院等单位通过大 量研究也成功得到了转基因的番木瓜  植 株(于湄等,  2001)。 Kumar  等(2018)基于转基因 来源的 序列同源性分析， 培育出转  CP 与 GFP 融合基因的  番木瓜， 用于提高转基因番木 瓜株系以抵抗  PRSV 感 染。 Jia 等(2017)试验产生的转基因番木瓜品系， 对PRSV  有一定 的应用价值。 基因工程方法可以作为防控番木瓜育种中抗病育种的一个比较好的方法， 这 个方法使番木瓜能够抵抗各种病毒病(例如:  环斑病毒病)成为可能； 而番木瓜组培快繁技 术(蔡英卿和赖钟雄,  2003)不仅为番木瓜种质资源的保存提供了有效的途径， 也 成功保持 优良品种(抗病,  优质, 高产)的遗传稳定性， 同时为国际间的种质交流 提供了方便 。 [0004]单核苷酸多态性(single  nucleotide polymorphism， SNP),主要 是指在基因组水 平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。 相比早期RAPD、 AFLP、 SSR等分子标记， SNP分子标记具有在个体基因组上分布广泛、 数量较多， 易于基因分型 （SNP的二态性） 、 适于 快速、 规模化筛查等优势。 全基因组关联分析 （GWAS） 是基于高通量SNP分子标记与性状间关 系， 挖掘性状相关候选基因的方法， 其基本原理是群体中基因间连锁 不平衡 （LD） 现象。 GWAS 最早被应用于人类疾病研究中， 其在 复杂数量性状的遗传基础解析上有重要的作用， 对于 挖掘真正的主效基因或关键变异位点有着绝对的优势。 2010年至今， 二代测序技术的推广说　明　书 1/4 页 3 CN 114574629 B 3