(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210483643.0 (22)申请日 2022.05.06 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114574575 A (43)申请公布日 2022.06.03 (73)专利权人 深圳会众生物技 术有限公司 地址 518000 广东省深圳市宝安区新 安街 道兴东社区丰业源工业厂区厂房B1夏 谷101 (72)发明人 张俊杰　刘福平　刘晶晶　孙芳　 董玉莲　柳贝　 (74)专利代理 机构 深圳市恒程创新知识产权代 理有限公司 4 4542 专利代理师 苗广冬(51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 Seegene.Obtai ned CE-IVD mark ing for Anyplex™II Thrombosis SNP Panel As say. 《https://www.seegene.com/product_news? category=others》 .2014,第1页. 审查员 邓沁 (54)发明名称 深静脉血栓SNP位点的检测引物、 检测试剂 盒 (57)摘要 本发明涉及生物检测技术领域， 具体公开一 种深静脉血栓SNP位点的检测引物、 检测试剂盒， 所述深静脉血栓SNP位点的检测引物包括第一引 物组、 第二引物组、 第三引物组、 第四引物组、 第 五引物组以及第六引物组。 本发 明提供的深静脉 血栓SNP位点的检测引物， 能够实现对上述6个 SNP位点的特异性引物扩增， 并且， 各引物组进行 引物扩增得到的产物长度各不相同， 而通过各正 向引物标记的荧光基团， 引物扩增后的产物具有 荧光， 产物长度与荧光搭配， 有助于产物在电泳 仪上的基因分型， 从而准确检测出与深静脉血栓 发生相关的6个SNP位点的基因型； 通过核苷酸序 列和荧光基团的设计能够有效避免误判的现象； 有助于增 加引物扩增时的特异性。 权利要求书1页 说明书8页 序列表3页 附图3页 CN 114574575 B 2022.08.26 CN 114574575 B 1.一种深静脉 血栓SNP位 点的检测引物， 其特 征在于， 包括： 第一引物组， 包括第一正向引物、 第 二正向引物和第 一反向引物， 所述第 一正向引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述第二正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， 所 述第一反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示； 第二引物组， 包括第三正向引物、 第四正向引物和第 二反向引物， 所述第 三正向引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示， 所述第四正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:5所示， 所 述第二反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示； 第三引物组， 包括第五正向引物、 第六正向引物和第 三反向引物， 所述第五正向引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:7所示， 所述第 六正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所示， 所 述第三反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:9所示； 第四引物 组， 包括第七正向引物、 第八正向引物和第四反向引物， 所述第七正向引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:10所示， 所述第八正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:11所示， 所述第四反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示； 第五引物 组， 包括第九正向引物、 第十正向引物和第五反向引物， 所述第九正向引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:13所示， 所述第十正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:14所示， 所述第五反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:15所示； 以及， 第六引物 组， 包括第十一正向引物、 第十二正向引物和第六反向引物， 所述第十一正向 引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO:16所示， 所述第十二正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO: 17所示， 所述第六反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:18所示； 其中， 所述第一正向引物、 所述第二正向引物、 所述第 三正向引物、 所述第四正向引物、 所述第五正向引物、 所述第六正向引物、 所述第七正向引物、 所述第八正向引物、 所述第九 正向引物、 所述第十正向引物、 所述第十一正向引物以及所述第十二正向引物的5 ’端均标 记有荧光基团， 所述第一正向引物、 所述第二正向引物、 所述第七正向引物以及所述第八正 向引物的核苷酸序列中， H为碱基A， 所述第三正向引物、 所述第四正向引物、 所述第五正向 引物以及所述第六正向引物的核苷 酸序列中， D为碱基T， 所述第九正向引物、 所述第十正向 引物、 所述第十一 正向引物以及所述第十二 正向引物的核苷酸序列中， B为碱基G； 其中， 所述第一正向引物、 所述第五正向引物、 所述第七正向引物、 所述第九正向引物 以及所述第十一正向引物的5 ’端均标记有FAM荧光基团， 所述第二正向引物、 所述第六正向 引物、 所述第八正向引物、 所述第十正向引物以及所述第十二正向引物的5 ’端均标记有JOE 荧光基团， 所述第三正向引物的5 ’端标记有TMR荧光基团， 所述第四正向引物的5 ’端标记有 ROX荧光基团。 2.一种深静脉血栓SNP位点的检测试剂盒， 其特征在于， 包括如权利要求1所述的深静 脉血栓SNP位 点的检测引物。 3.如权利 要求2所述的深静脉血栓SNP位点的检测试剂盒， 其特征在于， 还包括PCR缓冲 液、 DNA聚合酶、 dNTP以及水。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574575 B 2深静脉血 栓SNP位点的检测引物、 检测试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物检测技术领域， 特别涉及一种深静脉血栓SNP位点的检测引物、 检 测试剂盒。 背景技术 [0002]深静脉血栓形成 （DVT） 是血液在深静脉内不正常凝结引起的静脉回流障碍性疾 病， 常发生于下肢。 研究表明Factor  V基因、 Factor  II基因以及MTHFR基因的相关SNP位点 与静脉血栓栓塞有密切关系， 检测DVT可以通过检测上述基因的相关SNP位点实现， 但现有 的技术只有采用荧光定量PCR平台检测MTHFR基因的相关SNP位点， 而同时检测Factor  V基 因、 Factor  II基因以及MTHFR基因的相关SNP位 点的检测方法鲜有报道。 发明内容 [0003]本发明的主要目的是提出一种深静脉血栓SNP 位点的检测引物、 检测试剂盒， 旨在 提出一种同时检测Factor  V基因、 Factor  II基因以及MTHFR基因与深静脉血栓相关的SNP 位点的检测引物。 [0004]为实现上述目的， 本发明提出一种深静脉 血栓SNP位 点的检测引物， 包括： [0005]第一引物组， 包括第一正向引物、 第二正向引物和第一反向引物， 所述第一正向引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述第二正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所 示， 所述第一反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示； [0006]第二引物组， 包括第三正向引物、 第四正向引物和第二反向引物， 所述第三正向引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示， 所述第四正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:5所 示， 所述第二反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示； [0007]第三引物组， 包括第五正向引物、 第六正向引物和第三反向引物， 所述第五正向引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:7所示， 所述第六正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所 示， 所述第三反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:9所示； [0008]第四引物组， 包括第七正向引物、 第八正向引物和第四反向引物， 所述第七正向引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:10所示， 所述第八正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:11所 示， 所述第四反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示； [0009]第五引物组， 包括第九正向引物、 第十正向引物和第五反向引物， 所述第九正向引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:13所示， 所述第十正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:14所 示， 所述第五反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:15所示； 以及， [0010]第六引物组， 包括第十一正向引物、 第十二正向引物和第六反向引物， 所述第十一 正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:16所示， 所述第十二正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID  NO:17所示， 所述第六反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:18所示； [0011]其中， 所述第一正向引物、 所述第二正向引 物、 所述第三正向引物、 所述第四正向 引物、 所述第五正向引物、 所述第六正向引物、 所述第七正向引物、 所述第八正向引物、 所述说　明　书 1/8 页 3 CN 114574575 B 3