(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221048023 6.4 (22)申请日 2022.05.05 (71)申请人 季华实验室 地址 528200 广东省佛山市南海区桂城街 道环岛南路28号 (72)发明人 缪鹏　郭振振　陈锡峰　 (74)专利代理 机构 佛山市海融科创知识产权代 理事务所(普通 合伙) 44377 专利代理师 罗尹清 (51)Int.Cl. C12Q 1/6825(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种miRNA荧 光传感器及检测miRNA的方法 (57)摘要 本申请涉及生物医学工程领域， 公开了一种 miRNA荧光传感器及检测miRNA的方法。 本申请的 miRNA荧光传感器至少包 括： 共价连接有DNA 探针 A的金纳米颗粒， 所述DNA 探针A中包含探针B以及 可与所述目标miRNA杂 交生成DNA/RNA杂合体的 第一DNA序列； 具有哑铃结构的探针C， 所述具有 哑铃结构 的探针C的一端修饰有荧光分子， 另 一 端修饰有巯基， 茎部具有可与所述探针B杂交的 第二DNA序列； 所述具有哑铃结构的探针C的所述 一端的序列可与所述另一端的序列杂交。 采用本 申请的miRNA荧光传感器进行检测目标miRNA， 通 过检测荧光 分子发射的信号强度， 即可用于指示 目标miRNA的浓度。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图4页 CN 114574555 A 2022.06.03 CN 114574555 A 1.一种miRNA荧 光传感器， 用于检测目标miRNA， 其特 征在于， 至少包括： 共价连接有DNA探针A的金纳米颗粒， 所述DNA  探针A中包含探针B以及可与所述目标 miRNA杂交生 成DNA/RNA杂合体的第一DNA序列； 所述第一DNA序列的一端通过共价连接在所 述金纳米颗粒 上， 另一端与所述探针B连接； 具有哑铃结构的探针C， 所述具有哑铃结构的探针C的一端修饰有荧光分子， 另一端修 饰有巯基， 茎部具有 可与所述探针B杂交的第二DNA序列； 所述具有哑铃结构的探针C的所述 一端的序列可与所述另一端的序列杂交； 所述探针B的序列为： 5’ ‑GTTGGAGCTAGTG GCGTAG‑3’。 2.根据权利 要求1所述的miRNA荧光传感器， 其特征在于， 所述具有哑铃结构的探针C的 序列为： 5’ ‑SH‑(CH2)6‑TCCAACGGCGTAGTCGAAATAGGCTACGCCACTAGC  TCCAACTCGAAATAGGGTTGGA ‑ Alexa Fluor 488‑3’。 3.根据权利要求1所述的miRNA荧光传感器， 其特征在于， 所述目标miRNA为hsa ‑let‑ 7a， 所述DNA  探针A的序列为： 5’ ‑GTTGGAGCTAGTG GCGTAGAACTATACA ACCTACTACCTCA‑  (CH2)6‑SH‑3’。 4.根据权利要求1所述的miRNA荧光传感器， 其特征在于， 所述miRNA荧光传感器还包括 裸金纳米颗粒。 5.根据权利要求1所述的miRNA荧光传感器， 其特征在于， 所述miRNA荧光传感器还包括 双链特异性核酸酶。 6.一种检测miRNA的方法， 其特征在于， 采用如权利要求1~5任一项所述的miRNA荧光传 感器进行检测目标miRNA。 7.根据权利要求6所述的检测miRNA的方法， 其特征在于， 所述检测miRNA的方法包括以 下步骤： （1） 将待测溶 液与共价连接有DNA  探针A的金纳米颗粒混合； （2） 加入双链特异性核酸酶， 在45 ‑55℃下进行裂解反应； （3） 离心， 收集上清液， 将上清液与具有哑铃结构的探针C混合， 在室温下反应15 ‑30分 钟后， 添加与反应后溶 液相同体积的裸金纳米颗粒； （4） 将溶 液转移到反应杯中进行荧 光测量。 8.根据权利要求6所述的检测miRNA的方法， 其特征在于， 在步骤 （1） 之前， 还包括制备 裸金纳米颗粒， 具体为以下步骤： 配置质量浓度为0.01%的氯金酸溶 液和质量浓度为1%的柠檬酸 三钠溶液； 将3.5 mL柠檬酸 三钠添加到10 0 mL冷凝回流的氯金酸溶 液中， 搅拌并煮沸15分钟； 停止加热并搅拌3 0分钟； 将溶液冷却至室温， 得到金纳米颗粒； 将合成的金纳米颗粒在10000~13000转/分的转速下， 离心10~30分钟进行纯化， 得到裸 金纳米颗粒。 9.根据权利要求8所述的检测miRNA的方法， 其特征在于， 在步骤 （1） 之前， 还包括制备 共价连接有DNA探针A的金纳米颗粒， 具体为以下步骤：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114574555 A 2将DNA探针A添加到裸金纳米颗粒中进行反应； 用柠檬酸盐缓冲液将pH调节至3.0， 以10000~13000转/分的速度离心10~30分钟， 去除 多余的试剂， 得到共价连接有DNA探针A的金纳米颗粒。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114574555 A 3