(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210480676.X (22)申请日 2022.05.05 (71)申请人 首都医科 大学附属北京胸科医院 地址 101100 北京市通州区北关大街9号院 申请人 北京市结核病胸部肿瘤研究所 (72)发明人 潘丽萍　董静　张宗德　史雨婷　 贾红彦　孙琦　李自慧　杜博平　 魏荣荣　邢爱英　 (74)专利代理 机构 北京象合知识产权代理事务 所(普通合伙) 11893 专利代理师 封明艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物 及其应用 (57)摘要 本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种用 于诊断结核性胸膜炎的分子标志物及其应用。 所 述的分子标志物为miR ‑4455或miR ‑574‑5p或 miR‑4701‑3p。 所述的分子标志物在制备结核性 胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的用途。 本发明的优 点： (1)鉴别效果好。 (2)敏感性高。 (3)特异性高。 (4)适用于诊断， 准确性高。 权利要求书1页 说明书13页 附图5页 CN 114686587 A 2022.07.01 CN 114686587 A 1.一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物， 其特征在于： 所述的分子标志物为miR ‑ 4455或miR‑574‑5p或miR‑4701‑3p。 2.根据权利 要求1所述的分子标志物， 其特征在于： 所述分子标志物为miR ‑4455和miR ‑ 574‑5p的组合、 miR ‑4455和miR‑4701‑3p的组合、 miR ‑574‑5p和miR‑4701‑3p的组合。 3.根据权利要求1或2所述的分子标志物在制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的 用途。 4.根据权利要求3所述用途， 其特征在于： 所述诊断为区分结核性胸 膜炎和恶性胸 膜疾 病。 5.一种结核性胸膜炎辅助诊断试剂盒， 其特征在于： 包括检测权利要求1～3任一项所 述标志物表达量的试剂。 6.根据权利 要求5所述试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒还包括RNA提取、 反转录及qPCR 检测的试剂。 7.根据权利要求5所述试剂盒， 其特 征在于， 所述检测表达量的试剂为检测引物； 其中miRNA上游引物分别为： hsa‑miR‑574‑5p， 其序列为5 ’ ‑TCGGCAGGTGAGTGTGTGT ‑3’； hsa‑miR‑4455， 其序列为5 ’ ‑GCCGAGAGGGTGTGTGTGT T‑3’； hsa‑miR‑4701‑3p， 其序列为5 ’ ‑TCGGCAGGATGGGTGATG‑3’； 下游引物为 通用引物， 其序列为5 ’ ‑CTCAACTGGTGTCGTG GA‑3’。 8.权利要求5～7任一项所述的诊断试剂盒制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的 用途。 9.根据权利要求8所述用途， 其特征在于： 所述诊断为区分结核性胸 膜炎和恶性胸 膜疾 病。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114686587 A 2一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物及 其应用。 背景技术 [0002]正常人胸腔内约有5～15ml液体将两层胸膜分开， 在呼吸运动时起润滑作用。 胸腔 液体量并非 固定不变， 正常人每24小时亦有500～1000 ml的液体渗出与再吸收， 两者处于平 衡状态。 任何原因造成其渗出增多和/或再吸收减少， 出现胸膜腔内液体增多时则产生胸腔 积液。 胸腔积液根据病因和 生化性质分为漏出液和渗出液两大类， 临床上可以通过李凡他 实验鉴定。 但在渗出性胸腔积液这一类别中， 诸多 可以引起胸腔积液的疾病中， 以结核性胸 膜炎和恶性胸膜疾病多 见。 结核性胸膜炎是临床上常见的肺外结核病， 发病率较高， 但由于 诊断技术限制， 确诊比例非常低。 据统计， 结核性胸膜炎占整个胸膜疾病的44.1％， 我国第 三次结核病流行病学调查表明结核性胸膜炎占结核病总数 的2.5％。 恶性胸膜疾病占胸腔 积液的29.6％， 而大约50％转移性肿 瘤患者在疾病过程中会出现胸腔积液。 尽管都出现症 状相似的胸腔积液， 但结核性胸膜炎与恶性胸膜疾病的治疗和预后完全不同， 若得不到及 时的诊断治疗， 将直接影响预后， 但目前鉴别这两种疾病仍然是临床的一大难题。 [0003]结核性胸膜炎的确诊依据之一是在胸腔积液中找到结核分枝杆菌病原学证据， 但 目前应用常规涂片方法找到抗酸杆菌的灵敏度极低(0～1％)； 胸腔积液培养结核分枝 杆菌 灵敏度在11～50％， 而且需要2～ 4周的培养时间； 分子生物学诊断是近年来的热点， 但即使 是敏感性较高的Xpert  MTB/RIF检测， 对于结核性胸腔积液的诊断敏感性仅为50％左右。 另 一种方法是胸膜组织活检发现结核性 肉芽肿、 干酪性坏死或有抗酸杆菌存在， 但此项检查 创伤较大， 手术风险较高。 胸腔积液细胞学检查对恶性胸腔积液的诊断具有重要的意义， 胸 腔积液中查到癌细胞或取得 组织学诊断乃是恶性胸腔积液的金标准， 但常规的细胞学检查 阳性率较低(30～60％)， 尤其是较早期异形性不太明显的癌细胞与间皮细胞几乎无法区 别， 以至造成诊断结果中存在着相当数量的假阴性。 胸腔镜检查对恶性胸腔积液 的诊断具 有较高的价值， 但因费用昂贵， 操作难度大且有一定的手术风险， 患者较难接受。 传统的生 化免疫学检查如纤维连接蛋白、 腺苷脱氨酶、 铁蛋白、 溶菌酶以及胸腔积液血清白蛋白比值 检测， 有助于胸腔 积液的诊断， 但敏感性和特异性均无法满足诊断要求。 [0004]微小核糖核酸(microRNA,miRNA)存在于真核生物中， 是一类长度约为22个核苷酸 的非编码单链RNA分子， 由内源性基因编码， 是转录后抑制靶mRNA表达的关键调控因子。 通 常认为miRNA与靶基因mRNA的3 ’ ‑非翻译区(3 ’ ‑untranslated region,3 ’ ‑UTR)以完全互补 或非完全互补配对的方式， 阻止核糖体的组装从而抑制相应蛋白质的翻译， 但随着研究的 不断深入， 发现miRNA除了抑制蛋白质的翻译外， 还存在翻译活化、 增强转录和 类激素的功 能， 虽然其具体的作用机制 还需要进一步研究阐明或完善， 但毋庸置疑的是， miRNA在细胞 行使功能和疾病发生发展的过程中有着十分重要的调控作用。 [0005]miRNA可以在外周血、 胸腔积液和脑脊液等多种体液中检测到， 且稳定性较好， 显说　明　书 1/13 页 3 CN 114686587 A 3