(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 20221047825 3.4 (22)申请日 2022.05.05 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114574628 A (43)申请公布日 2022.06.03 (73)专利权人 首都医科 大学附属北京友谊医院 地址 100050 北京市西城区永安路95号 (72)发明人 杨国威　吴云　 (74)专利代理 机构 北京领科知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11690 专利代理师 徐丹丹　张丹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6893(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12Q 1/04(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 111926007 A,2020.1 1.13 CN 111926007 A,2020.1 1.13 CN 110760606 A,2020.02.07 Matheus da Si lva Zatti等.Loop- mediated Isothermal Ampl ification and nested PCR of the I nternal Transcribed Spacer(ITS) for Histoplas ma capsulatum detection. 《PLOS Neglected Tropical Diseases》 .2019,第13卷(第8 期),第e0 007692篇 第1-20页. Matheus da Si lva Zatti等.Loop- mediated Isothermal Ampl ification and nested PCR of the I nternal Transcribed Spacer(ITS) for Histoplas ma capsulatum detection. 《PLOS Neglected Tropical Diseases》 .2019,第13卷(第8 期),第e0 007692篇 第1-20页. Yun Wu等.Detecti on of Pneumocystis jiroveci i and Toxoplas ma gondii in patients w ith lung i nfections by a duplex qPCR assay. 《PLOS NEGLE CTED TROPICAL DISEASES》 .2021,第15卷(第12期),e0 010025第 1-15页. Yun Wu等.Detecti on of Pneumocystis jiroveci i and Toxoplas ma gondii in patients w ith lung i nfections by a duplex qPCR assay. 《PLOS NEGLE CTED TROPICAL DISEASES》 .2021,第15卷(第12期),e0 010025第 1-15页. 审查员 张蕾 (54)发明名称 一种检测试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种检测试剂盒或芯片及其 应用。 该检测试剂盒或芯片包含耶氏肺孢子菌、 弓形虫和/或荚膜组织胞浆菌的引物和/或探针。 本发明的检测试剂盒或芯片能同时或单独检测 上述三种病原体， 提高疾病的诊断效率， 降低医 务人员的工作强度， 提高患者的治 疗效率。 权利要求书1页 说明书13页 序列表4页 附图2页 CN 114574628 B 2022.08.23 CN 114574628 B 1.一种检测试剂 盒， 其特征在于， 所述的检测试剂 盒包含耶氏肺孢子菌、 弓形虫和荚膜 组织胞浆菌的引物和探针， 其中， 耶氏肺孢子菌的探针如SEQ  ID NO： 3所示， 上游引物如SEQ  ID NO： 1所示， 下游引物如 SEQ ID NO： 2所示； 弓形虫的探针如SEQ  ID NO： 6所示， 上游引物如SEQ  ID NO： 4所示， 下游引物如SEQ  ID  NO： 5所示； 荚膜组织胞浆菌的探针如SEQ  ID NO： 9所示， 上游引物如SEQ  ID NO： 7所示， 下游引物 如SEQ ID NO： 8所示； 所述探针中SEQ  ID NO： 3、 6或9的5 ’端包含荧光报告基团的修饰， 3 ’端包含荧光淬灭基 团的修饰。 2.根据权利 要求1所述的检测试剂盒， 其特征在于， 所述的荧光报告基团选自VIC、 FAM、 Texas Red、 TAMRA、 TET、 JOE、 HE X、 ROX、 LC  RED640、 LC  RED705、 CY3或CY5， 所述的荧光淬灭基 团选自TAMRA、 DABC YL、 BHQ1、 BHQ2或BHQ3 。 3.根据权利要求1 ‑2中任一所述的检测试剂盒， 其特征在于， 所述检测试剂盒还包括 PCR反应的试剂和/或DNA提取 所需试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574628 B 2一种检测试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种耶氏肺孢子菌、 弓形虫和荚膜组织胞浆 菌的检测引物组、 检测试剂盒 或芯片及应用。 背景技术 [0002]肺孢子菌肺炎( Pneumocystis pneumonia ， PCP)是由耶氏肺孢子菌( Pneumocystis  jirovecii ， PJ) 感染引起的肺炎， 是免疫缺陷患者重要的致死原因。 肺孢子菌肺炎临床表 现缺乏特异性， 以发热、 干咳、 呼吸困难最常见， 其他症状包括嗜睡、 恶心、 呕吐、 腹泻、 体重 下降等； 患者肺部听诊 可无异常或 闻及干、 湿性啰音， 大多表现为症状与体征的严重程度不 成比例。 [0003]弓形虫病( Toxoplasmosis )是由弓形虫( Toxoplasma  gondii， TG)引起的一种人畜 共患寄生原虫病。 该虫体主要侵犯眼、 脑、 心 等器官， 寄生于有核细胞内， 人体通常表现为隐 性感染， 不表现明显症状， 因此常被漏诊和误诊。 但是当人体免疫功能受损或低下时， 特别 是感染艾滋病的病人， 可由弓形虫隐性感染转为弓形虫病急性发作， 出现急性症状， 严重者 可造成死 亡。 [0004]荚膜组织胞浆菌病( HistopLasmosis ， HP)是由荚膜组织胞浆菌( Histoplasma   capsulatum ， HC)引起的具有传染性的深 部真菌病， 经呼吸道传染， 也可经皮肤、 胃肠道 黏膜 受染， 其发病初 往往易误诊， 使病情迁延加重。 由于荚膜组织胞浆菌病主要侵犯肺和单核 吞 噬细胞系统， 临床表现各种各样， 可有发热、 肝脾肿大、 贫血、 少数有皮肤黏膜损害， 可在有 免疫功能降低或缺陷的AID S患者继发荚膜组织胞浆菌病。 [0005]肺孢子菌肺炎、 弓形虫病和荚膜组织胞浆菌病的患者在临床上均表现出发热、 咳 嗽及呼吸困难等症状， 感染程度不同临床表现的严重程度不一， 影像学上也很难进 行区分， 患者耽误治疗会引起爆发性肺炎甚至死亡， 因此， 在临床上明确诊断感染病原体对于指导 临床医生用药以及患者的良好预后具有重要意 义。 发明内容 [0006]本发明依据耶氏肺孢子菌mtSSU （线粒体小亚单位） 基因以及弓形虫的REP ‑529  (529bp的重复片段)片段的保守区域和荚膜组织胞浆菌的ITS （internal  transcribed   spacer， 转录间隔区） 片段的保守区域设计了特异性引物、 探针， 构建了三重荧光定量P CR的 鉴别诊断检测体系， 并制备成肺孢子菌肺炎、 弓形虫病和荚膜组织胞浆菌病的检测试剂盒 或芯片。 该检测试剂盒或芯片能同时或单独检测三种病原体， 提高了疾病的诊断效率， 降低 医务人员的工作强度， 提高了患者的治疗效果。 [0007]本发明提供了一种检测试剂盒或芯片， 所述的检测试剂盒或芯片包含耶氏肺孢子 菌、 弓形虫和/或荚膜组织胞浆菌的引物和/或探针。 [0008]优选的， 耶氏肺孢子菌的引物与探针扩增或靶向mtSSU基因。 进一步优选的， 耶氏 肺孢子菌的探针包含SEQ  ID NO： 3所示核苷酸序列或者包含SEQ  ID NO： 3经过一个或几个说　明　书 1/13 页 3 CN 114574628 B 3