(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210480661.3 (22)申请日 2022.05.05 (71)申请人 首都医科 大学附属北京胸科医院 地址 101100 北京市通州区北关大街9号院 申请人 北京市结核病胸部肿瘤研究所 (72)发明人 潘丽萍　董静　张宗德　史雨婷　 贾红彦　孙琦　李自慧　杜博平　 魏荣荣　邢爱英　 (74)专利代理 机构 北京象合知识产权代理事务 所(普通合伙) 11893 专利代理师 封明艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物 组合物及其应用 (57)摘要 本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种用 于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物及其 应用。 所述的分子标志物组合物为miR ‑4455、 miR‑574‑5p和miR‑4701‑3p的组合物。 所述的分 子标志物组合物在制备结核性胸膜炎诊断试剂 或试剂盒中的用途。 本发明首次使用高通量微阵 列芯片鉴定用于区分结核性胸膜炎和恶性胸膜 疾病的胸腔积液差异miRNA， 并在独立样本中进 一步验证。 本发 明提供并鉴定了可用于鉴别诊断 结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的病灶部位的 miRNA组合物， 对于提高结核性胸膜炎的诊断十 分重要。 权利要求书1页 说明书11页 附图1页 CN 114686586 A 2022.07.01 CN 114686586 A 1.一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物， 其特征在于： 所述的分子标志物 组合物为miR ‑4455、 miR‑574‑5p和miR‑4701‑3p的组合物。 2.根据权利要求1所述的分子标志物组合物在制备结核性胸 膜炎诊断试剂或试剂盒中 的用途。 3.根据权利要求2所述用途， 其特征在于： 所述诊断为区分结核性胸 膜炎和恶性胸 膜疾 病。 4.一种结核性胸 膜炎辅助诊断试剂 盒， 其特征在于： 包括检测权利要求1所述的标志物 组合物表达量的试剂。 5.根据权利 要求4所述试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒还包括RNA提取、 反转录及qPCR 检测的试剂。 6.根据权利要求 4所述试剂盒， 其特 征在于， 所述检测表达量的试剂为检测引物； 其中miRNA上游引物分别为： hsa‑miR‑574‑5p， 其序列为5 ’ ‑TCGGCAGGTGAGTGTGTGT ‑3’； hsa‑miR‑4455， 其序列为5 ’ ‑GCCGAGAGGGTGTGTGTGT T‑3’； hsa‑miR‑4701‑3p， 其序列为5 ’ ‑TCGGCAGGATGGGTGATG‑3’； 下游引物为 通用引物， 其序列为5 ’ ‑CTCAACTGGTGTCGTG GA‑3’。 7.权利要求4～6任一项所述的诊断试剂盒制备结核性胸膜炎诊断试剂或试剂盒中的 用途。 8.根据权利要求7所述用途， 其特征在于： 所述诊断为区分结核性胸 膜炎和恶性胸 膜疾 病。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114686586 A 2一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组合物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种用于诊断结核性胸膜炎的分子标志物组 合物及其应用。 背景技术 [0002]多种疾病可以引起胸腔积液的异常积聚， 包括结核性胸膜炎、 恶性胸膜疾病及肺 炎等。 在结核病高负担国家， 由结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病引发的胸腔积液最为常见。 目 前， 结核性胸膜炎的诊断主要依靠病史、 临床表现、 影像学、 胸腔积液常规检查和疗效观 察， 确诊率较低， 特别是与恶性胸膜疾病及其 他感染性胸膜疾病鉴别诊断困难。 [0003]目前， 结核性胸膜炎的诊断金标准仍然是胸腔积液中查到结核分枝杆菌。 但是， 应 用常规涂片方法找到抗酸杆菌的灵敏度极低(0～1％)， 胸腔积液中难以检测出结核分枝杆 菌。 另外， 胸腔 积液培养结核分枝杆菌 灵敏度在1 1～50％， 而且需要2 ～4周的培 养时间。 [0004]结核性胸膜炎的诊断其他方法如： (1)分子生物学诊断是近年来的热点， 但即使是 敏感性较高的Xpert  MTB/RIF检测， 对于结核性胸腔积液的诊断敏感性仅为50％左右； (2) 胸膜组织活检发现结核性肉芽肿、 干酪性坏死或有抗酸杆菌存在， 但此项检查创伤较大， 手 术风险较高； (3)传统的生化免疫 学检查如纤维连接蛋白、 腺苷脱氨酶、 铁蛋白、 溶菌酶以及 胸腔积液血清白蛋白比值检测， 有助于胸腔积液 的诊断， 但敏感性和特异性均无法满足诊 断要求。 因此， 结核性胸膜炎虽然 有多种诊断方式， 但仍 缺乏简便、 经济、 快速的确诊方法。 [0005]临床上与结核性胸膜炎最难以鉴别诊断的是恶性胸膜疾病， 尽管胸腔积液细胞学 检查对恶性胸腔积液的诊断具有重要的意义， 胸腔积液中查到癌细胞或取得 组织学诊断乃 是恶性胸腔积液的金标准， 但常规的细胞学检查阳性率较低(30～60％)， 尤其是较早期异 形性不太明显的癌细胞与间皮细胞几乎无法区别， 以至造成诊断结果中存在着相当数量的 假阴性。 胸腔镜检查对恶性胸腔积液的诊断具有较高的价值， 但因费用昂贵， 操作难度大且 有一定的手术 风险， 患者较难接受。 [0006]因此， 实现结核性胸膜炎和恶性胸膜疾病的鉴别诊断， 对后续精准治疗具有重要 意义。 [0007]微小核糖核酸(microRNA,miRNA)存在于真核生物中， 是一类长度约为22个核苷酸 的非编码单链RNA分子。 可以在外周血、 胸腔积液和脑脊液等多种体液中检测到， 且稳定性 较好， 显现其出作为生物标志物的潜在可能性； 与此同时， 越来越多的实验表 明， miRNAs在 分枝杆菌感染过程中起到重要的调控作用， 其异常表达与疾病的发生发展转归相关； 且在 其他疾病如肺癌、 乳 腺癌和宫颈癌等， 已经有用mi RNA作为生物标志物用于疾病诊断的相关 研究。 [0008]对于胸腔积液miRNA作为生物标志物也有过相关研究， 主要集中于恶性胸膜疾病 的胸腔积液特异miRNA， 发现miR ‑198、 miR‑134、 miR‑185、 miR‑22、 miR‑195‑5p、 miR‑182‑5p 和miR‑34a‑5p等在恶性胸膜疾病的胸腔积液中特异表达， 具有作为恶性胸膜疾病诊断用生 物标识物的潜力。 但是， 既往研究主要集中于癌症， 部 分研究并没有将结核性胸膜炎单独分说　明　书 1/11 页 3 CN 114686586 A 3