(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210712999.7 (22)申请日 2022.06.22 (83)生物保 藏信息 GDMCC No:62410 202 2.04.24 (71)申请人 浙江省农业科 学院 地址 310021 浙江省杭州市德胜中路2 98号 (72)发明人 李欢欢　陈黎洪　唐宏刚　赵珂　 张晋　 (74)专利代理 机构 杭州星隆专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33441 专利代理师 刘星海 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12Q 1/689(2018.01)C12Q 1/14(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 21/31(2006.01) A23L 13/40(2016.01) A23L 13/60(2016.01) C12R 1/44(2006.01) (54)发明名称 一株模仿葡萄球 菌HZ01、 菌剂及其应用 (57)摘要 本发明涉及微生物食品发酵技术领域， 具体 公开了一株模仿葡萄球菌HZ01、 菌剂及其应用， 所述模仿葡萄球菌HZ01的保藏编号为， GDMCC   NO.62410； 所述模仿葡萄球菌HZ01的保藏单位 为， 广东省微生物菌种保藏中心； 所述模仿葡萄 球菌HZ01的保藏名称为， Staphylococcus   simulans  HZ01； 所述模仿葡萄球菌HZ01的保藏 时间为2022年4月24日。 本发明具有加工适应性 较好、 蛋白酶和脂肪酶活性均较高、 硝酸还原酶 活性较好及发酵出的肉制品风味较佳的特点。 权利要求书2页 说明书20页 序列表1页 附图7页 CN 114891701 A 2022.08.12 CN 114891701 A 1.一株模仿葡萄球菌HZ01， 其特征是： 所述模仿葡萄球菌HZ01的保藏编号为， GDMCC   NO.62410； 所述模仿葡萄球菌HZ01的保藏单位为， 广东省微生物菌种保藏中心； 所述模仿葡 萄球菌HZ01的保藏名称为， Staphylococcus  simulans  HZ01； 所述模仿葡萄球菌HZ01的保 藏时间为202 2年4月24日。 2.根据权利 要求1所述的一株模仿葡萄球菌HZ01， 其特征是： 所述模仿葡萄球菌HZ01的 基因登录号 为OM758216， 具体核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 3.根据权利 要求2所述的一株模仿葡萄球菌HZ01， 其特征是： 模仿葡萄球菌HZ01基因序 列的测定包括以下步骤， (a)采用细菌基因 组DNA提取 试剂盒提取模仿葡萄球菌 HZ01的总DNA； (b)使用PCR反应 体系对步骤(a)中提取到的总DNA进行16s全长扩增； (c)待16s全长扩增完成后进行切胶纯化， 并进行电泳测序， 测得的序列即为模仿葡萄 球菌HZ01的16s  DNA全长序列； 所述PCR反应 体系中的16s全长扩增包括以下步骤， (b01)将步骤(a)中提取到的总DNA在PCR反应 体系中于95℃的温度条件下反应5mi n； (b02)待步骤(b01)完成后， 继续在95℃的温度条件下反应3 0s； (b03)待步骤(b02)完成后， 继续在5 5℃的温度条件下反应3 0s； (b04)待步骤(b0 3)完成后， 继续在72℃的温度条件下反应1mi n； (b05)重复步骤(b02)～步骤(b04)24次； (b06)待步骤(b0 5)完成后， 在72℃的温度条件延申10mi n； (b07)待步骤(b06)完成后， 在10℃的温度条件保温， 即完成模仿葡萄球菌HZ01总DNA的 16s全长扩增。 4.模仿葡萄球菌HZ01菌剂， 其特征是： 所述模仿葡萄球菌HZ01菌剂采用权利 要求1中的 模仿葡萄球菌 HZ01制得； 所述模仿葡萄球菌 HZ01菌剂的制备包括以下步骤， (A)将模仿葡萄球菌 HZ01接种到NB培 养基中培 养， 制得菌液； (B)待步骤(A)制得菌液中模仿葡萄球菌HZ01的浓度为1.0 ×108log10CFU/mL～9.9 × 109log10CFU/mL时进行离心； (C)待离心完成后加入灭菌脱脂牛奶重悬； (D)待重悬完成后进行冷冻干燥， 即制得浓度为1.0 ×1010log10CFU/g～9.9 × 1011log10CFU/g的粉末状模仿葡萄球菌 HZ01菌剂。 5.模仿葡萄球菌 HZ01在降解肌浆蛋白质中的应用。 6.根据权利要求5所述的模仿葡萄球菌HZ01在降解肌浆蛋白质中的应用， 其特征是： 模 仿葡萄球菌 HZ01对肌浆蛋白质的降解结果检测包括以下步骤； (S01)提取肌浆蛋白质， 并采用L owry蛋白浓度试剂盒测定 肌浆蛋白质的浓度； (S02)取步骤(S01)中的肌浆蛋白质、 葡萄糖和模仿葡萄球菌 HZ01菌液共同孵 育； (S03)待孵育完成后将菌液离心； (S04)取2 ×SDS上样缓冲液与步骤(S0 3)离心后的上清液混合， 并水浴； (S05)取10％ ‑12％的Bio ‑Rad预制胶肌浆蛋白和标准蛋白， 并在10％ ‑12％的Bio ‑Rad 预制胶肌浆蛋白和标准蛋白上分别上步骤(S04)中的样品；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891701 A 2(S06)上样后进行电泳； (S07)待电泳完成后用 考马斯亮蓝R ‑250进行染色， 通过染色结果得出模仿葡萄球菌 HZ01对肌浆蛋白质的降解结果； 所述肌浆蛋白质的提取包括以下步骤， (S011)取猪肉与PB缓冲液混合并匀浆； (S012)将步骤(S01 1)匀浆后的上清液通过 滤膜过滤并除菌后， 即得肌浆蛋白质。 7.模仿葡萄球菌 HZ01在将硝酸盐还原为 亚硝酸盐时的应用。 8.根据权利要求7所述的模仿葡萄球菌HZ01在将硝酸盐还原为亚硝酸盐时的应用， 其 特征是： 对亚硝酸盐的浓度检测包括以下步骤， (ⅰ)配制含适 量浓度KNO3/NaNO3的NB培养基； (ⅱ)将模仿葡萄球菌 HZ01菌液接种至步骤( ⅰ)中的NB培 养基中培 养； (ⅲ)在培养过程中间隔取发酵 液离心并收集上清液； (ⅳ)检测步骤( ⅲ)上清液中的亚硝酸盐含量； 所述步骤(ⅳ)对上清液中亚硝酸盐的含量检测包括以下步骤， (ⅳ01)取适量上清液置 于比色管中； (ⅳ02)在步骤( ⅳ01)的比色管中加入适 量对氨基苯磺酸溶 液， 混匀后静置； (ⅳ03)在步骤( ⅳ02)静置后的溶 液中加入适 量盐酸萘乙二胺溶 液； (ⅳ04)将步骤( ⅳ03)中的溶 液加水至比色管刻度后， 混匀 和静置； (ⅳ05)测定步骤( ⅳ04)中溶液的吸光度。 9.模仿葡萄球菌 HZ01在干腌发酵肉制品中的应用。 10.根据权利要求9所述的模仿葡萄球菌HZ01在干腌发酵肉制品中的应用， 其特征是： 所述干腌发酵肉制品的制备包括以下步骤， (一)取模仿葡萄球菌 HZ01的浓 缩液或粉剂， 使用食用水稀释； (二)取适 量份的食盐、 白糖和谷氨酸钠溶解于步骤(一)中的溶 液中， 制成腌制液； (三)取肉糜， 将步骤(二)中的腌制液加入肉糜中， 待肉糜中模仿葡萄球菌HZ01的浓度 达到1.0×107log10CFU/g～9.9×108log10CFU/g时， 对肉糜进行低温腌制； (四)待腌制完成后将肉糜依次进行灌肠、 排气、 烘制和发酵， 即得干腌发酵肉制品成 品。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891701 A 3